直接竞争酶联免疫吸附分析法测定氰戊菊酯

采用活性酯法,将氰戊菊酯半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-4-氨基丁酸与载体蛋白共价偶联合成突出氰戊菊酯分子结构特征的人工抗原和包被原.以人工抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,采用(NH4)2SO4分步盐析和DEAE纤维素柱层析法从抗血清中分离纯化对氰戊菊酯具特异性亲和力的抗体,采用活性酯法,以辣根过氧化物酶标记半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-6-氨基己酸.采用固定抗体、氰戊菊酯和酶标半抗原直接竞争结合固相抗体的模式, 建立对氰戊菊酯具高特异性的酶联免疫吸附分析方法.在优化条件下, 测定氰戊菊酯标样检测的线性浓度范围为0.001～10.0 mg/L; 检出限0.001 mg/L; 相对标准偏差(RSD, n=5)为9.19%.小白菜中分别添加0.10和5.0 mg/kg氰戊菊酯,直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定,重复6次,回收率分别为83.8%～109%和93.6%～110%; RSD分别为11.7%和7.25%.对实际样品的有效检出限为0.007 mg/L.其它常用拟除虫菊酯类杀虫剂(氯氰菊酯、溴氰菊脂、功夫菊酯、醚菊酯、联苯菊酯)不干扰氰戊菊酯的测定.     

酶联免疫吸附分析法测定水样中的阿特拉津

应用阿特拉津半抗原衍生物共价交联于载体蛋白分子上，制成免疫抗原，经免疫得到高质量的兔抗阿特拉津抗血清。经条件优选，建立了测定阿特拉津的酶联吸附分析竞争法，测定性范围为０．０５－５．００μｇ／Ｌ，最低检出限仅为０．０１８－０．０２２μｇ／Ｌ，且精密度高，特异性强。     

酶联免疫吸附分析法测定水中双氯芬酸钠

本研究报道一种高灵敏度的测定自来水和表面水中药物残留双氯芬酸钠含量的间接酶联吸附分析法(ELISA)。在包被抗原为20μg/L,抗体为1∶20000倍稀释,辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG为1∶20000倍稀释的优化条件下,双氯芬酸钠的检出限(LOD)为0.004μg/L~0.008μg/L,IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.03μg/L~0.12μg/L。双氯芬酸钠在自来水中和表面水中的回收率分别为96%和113%。表面水存在一定的基体效应,但仅需要简单过滤稀释就可以消除。     

直接竞争酶联免疫吸附-高效液相色谱法测定烯效唑

应用本实验室制备的对烯效唑具特异性亲和力的多克降抗体,采用包被抗体直接竞争模式建立烯效唑的酶联免疫吸附分析法。在优化条件下,对烯效唑标样检测的线性范围为1～10^-4mg/L,线性中浓度为1.31μg/L,5次重复测定的相对标准偏差（RSD）为8.4%;检出限为0.022μg/L。在苹果中分别添加烯效唑标样1 0,0.1和0 01 mg/kg;直接竞争E LISA法测定的回收率分别为84.6%～101.0%,99.6%～117 0%和80.8%～92.8%;RSD（n=5）分别为8.6%,6.9%和6.7%。ELISA法对苹果中烯效唑的检出限为0.024μg/kg。在同样前处理条件下,高效液相色谱-紫外检测（HPLC-UVD）法对苹果中烯效唑的检出限为0.25 mg/kg,苹果中添加1 00 mg/kg烯效唑,HPLC UVD法测定的回收率为92.6%。     

联苯菊酯酶联免疫吸附分析方法研究

建立了定量测定联苯菊酯的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。利用联苯菊酯的代谢物联苯醇合成了联苯菊酯的半抗原LBc(2-甲基-3-苯基苄基氧基羰基丙酸)和LBy(2-甲基-3-苯基苯甲酸)。通过碳二亚胺法将LBc交联于牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原(LBc-BSA),通过活泼酯法将LBc和LBy分别交联于卵清蛋白(OVA)作为包被抗原(LBc-OVA和LBy-OVA),LBc-BSA为免疫原制备了联苯菊酯的兔抗血清,间接非竞争酶联免疫吸附分析方法测得其效价达5.12×104。通过同源异源分析,发现异源分析的灵敏度较高,对pH值、离子强度、甲醇含量等影响因素进行了研究,0.3mol/L钠离子强度的磷酸缓冲液(pH7.5)和30%的甲醇确定为联苯菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法的最佳工作条件,该方法的IC50为2.16±0.32mg/L,检出限(LDL)为0.016±0.002mg/L。对大部分拟除虫菊酯,如三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯和拟除虫菊酯的代谢物3-苯氧基苯甲酸没有明显的交叉反应。     

食品中三唑酮的酶联免疫吸附分析

制备人血清白蛋白和三唑酮的结合物作为免疫原,免疫兔子获得了抗三唑酮的抗体,并建立了三唑酮的酶联免疫吸附分析法。此方法被成功的应用于黄瓜、梨等食品中三唑酮的分析,最低检出限为40ng/g样品,回收率为92.44％～98.18％。并与气相色谱分析结果有很好的一致性。     

酶联免疫吸附分析法测定环境水样中痕量药物吲哚美辛

将吲哚美辛与蛋白质载体结合,制成完全免疫抗原,经过多次动物免疫得到了性能优良的兔抗吲哚美辛抗体,在优化实验条件的基础上,建立了灵敏度高、特异性强、简便、稳定的测定水样中吲哚美辛的酶联免疫吸附分析方法(ELISA).IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.09μg/L～0.17 μg/L,最低检出限为 0.005μg/L～0.01 μg/L.真实水样中,均发现含有吲哚美辛,浓度在0.016 μg/L~0.083 μg/L之间,水样的加标回收率在84.4%～127.0%之间.     

氯黄隆酶联免疫吸附分析技术研究

对邻氯苯磺酰胺进行衍生合成半抗原,并与载体蛋白质共价偶联制备突出氯黄隆分子特异性部分的合成抗原,以合成抗原免疫兔获得对氯黄隆具高亲合力的抗血清。采用硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ纤维素反相吸附法分离纯化抗体,用辣根过氧化物酶以改良的过碘酶钠法标记 混合酸酐法标记半抗原。在此基础上建立了对氯黄隆具高度特异性的同接竞争,包被抗体,包被抗原直接竞争酶联免疫吸附分析技术。在优化条件下,氯黄隆测定的线性浓度范围为１０＾０－１０＾３ｎｇ／ｍＬ,检出限〈０．１ｎｇ／ｍＬ。邻氯苯磺酰胺及与氯黄隆结构类似的常用磺酰脲类除草剂不干扰氯黄隆的分析。     

烯效唑酶联免疫吸附分析方法研究

合成了半抗原烯效唑琥珀酸半酯,分别将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了免疫抗原和包被抗原,并成功建立了水和土壤中烯效唑残留的酶联免疫吸附分析法。用免疫抗原免疫新西兰大白兔得到多克隆抗体,抗体的效价达到1.02×106。方法的线性范围为0.005～10mg/L,检出限为1.82±0.83μg/L。除烯唑醇有一定的交叉反应外,与大部分三唑类杀菌剂都没有明显的交叉反应。在水和土壤中添加不同浓度的烯效唑,回收率分别在82.40%～105.92%和92.42%～100.08%之间。     

酶联免疫吸附法测定血浆中芍药苷浓度

建立了间接竞争酶联免疫吸附法测定血浆中芍药苷浓度.在10～200 μg/L浓度范围内,线性关系良好,线性回归方程为y=-0.1721 logC 1.9645,相关系数0.9927;回收率为89%～102%.运用本方法测定了大鼠一次灌胃后血浆中的芍药苷浓度.比较了分别给药芍药苷单体及中药复方四逆散提取物后,血浆中的芍药苷浓度.研究结果表明:四逆散配伍组方后,芍药苷的生物利用度较低.     

蓖麻毒素的间接酶联免疫快速检测

建立了间接酶联免疫法快速检测蓖麻毒素的方法。方法的线性范围在0.08~1.25 mg/L之间,相关系数r=0.992 3,检出限为0.02 mg/L。将该法用于检测实际水样、土壤、奶粉和血液蓖麻毒素加标样品,回收率在60%~98%范围。该方法简单、快速、假阳性率低,非常适合蓖麻毒素的快速筛选、定性和半定量分析。     

酶联免疫分析技术研究进展

酶联免疫吸附分析(ELISA)由于检测性能上的优越性使得其在医疗卫生、环境污染控制、食品安全监测等领域得以广泛应用,并且随着其他学科新技术的引进以及ELISA本身关键技术上的突破,ELISA的分析能力较以前有了巨大进步。本文综述了近年来在提高ELISA分析的敏感性、特异性以及稳定性等方面所采取的改进策略和方法,并对其发展方向进行了展望。     

S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法研究

合成了S,S-氰戊菊酯的半抗原S-2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸-α-S-(N-丁酸基)-甲酰氨-(3-苯氧基)苄酯(Efvb).半抗原通过混合酸酐法与卵清蛋白(OVA)偶联作为包被抗原,活泼酯法与牛血清蛋白(BSA)偶联作为免疫抗原.用免疫抗原免疫新西兰大白兔,得到抗S,S-氰戊菊酯多克隆抗体.通过异源分析及检测条件优化,确立了间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件为pH 7.4,0.4 mol/L Na+、40％甲醇-PBS溶液,建立了S,S-氰戊菊酯酶联免疫分析方法.方法的抑制中浓度(IC50)值为(3.16±0.01)mg/L;检出限(IC10)为(0.0053±0.0012) mg/L.对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯及其代谢物戊菊酸没有明显交叉反应.在自来水、河水和土壤样品中添加S,S-氰戊菊酯,其回收率分别为82.3％～108.2％,83.1％～109.2％和72.0％～91.2％.     

酶联免疫吸附分析法检测花生过敏原的研究

本文利用自己研制的花生过敏原免疫新西兰大耳兔,获得效价为200 000的抗花生过敏原特异性抗体,建立了花生过敏原蛋白的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测方法.结果表明:花生抗原在0.01～100 ng/mL范围内具有较好的线性关系,其竞争标准曲线为v=-0.1212x+0.9285(r=0.9819),IC50为34....     

氨基甲酸酯类杀虫剂速灭威酶联免疫吸附分析方法研究

利用间-甲酚和β-丙氨酸合成了速灭威半抗原β-(间-甲基苯氧基羰基)氨基丙酸(HOM)。通过活泼酯法将HOM交联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上;HOM-BSA为免疫原制备了速灭威的兔抗血清,ELISA法测得其效价高达1.28×106,交叉反应测定表明抗体方法特异性识别速灭威。对离子强度等影响因素进行了研究,确定了速灭威酶联免疫吸附分析方法(ELISA)的最佳工作条件,建立了定量测定速灭威的间接竞争ELISA方法,结果表明,该方法检测线性范围为1~10000μg/L;IC50为40.74μg/L;检出限为0.08~0.10μg/L;批内相对标准偏差为2.9%;批间相对标准偏差4.6%。土壤、稻谷和水中的平均添加回收率分别为80%、93.4%和107%。本研究建立了一种快速检测环境和农产品中速灭威残留的有效方法。     

Characterization of Anti-Chloramphenicol Antibodies by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

Polyclonal antibodies against conjugates of chloramphenicol succinate and chloramphenicol base with proteins were obtained and characterized in direct ELISA. Antiserum against a conjugate of chloramphenicol (CAP) base with BSA (direct coupling) was very specific and showed cross-reactivity only with CAP succinate (11.3%) and CAP base (4.6%); whereas, antisera against a conjugate of CAP succinate with a protein recognized CAP succinate strongly as an initial compound. In direct ELISA, antisera against a conjugate of CAP succinate with KLH (homologous assay) and CAP base with BSA (heterologous assay) showed similar sensitivity: IC₅₀ were 1.3 and 1.5 ng mL^?1, respectively. Applicability of the immunoreagents obtained was shown in the analysis of CAP residues in milk (3.5% fat content). Detection limit of 0.3 ng mL^?1 was obtained for milk diluted 5 times.     

酶联免疫分析法探测Cry1Ab蛋白在不同介质中的构象变化

采用酶联免疫分析（ELISA）方法,根据构象变化后的蛋白与抗体结合能力下降从而导致ELISA测定值降低的原理,探测了转cry1Ab基因水稻表达的Cry1Ab蛋白在不同溶液介质中的热致构象变化行为,以及不同有机溶剂及溶液pH值对该蛋白构象变化的影响程度。实验表明,Cry1Ab蛋白在不同条件下的构象变化程度可以灵敏地通过ELISA方法检测。在不同的介质中,CrylAb蛋白的热致构象变化程度不同。在Na2SO4介质中,该蛋白具有较高的热稳定性;SDS的存在,可以促进该蛋白的构象变化。常温下,25％（V／V）的有机溶剂乙腈、异丙醇、甲醇、乙醇均能使该蛋白的构象发生转变,其中以乙腈最为显著。醇类溶剂对Cry1Ab蛋白的构象影响程度随疏水性增大而增大;溶液pH值也对该蛋白的构象变化产生影响。pH在8-10之间,该蛋白构象能保持稳定;酸或过碱性的溶液均能使蛋白构象偏离原始状态,从而引起ELISA测定值的降低。另外,腐殖酸能在一定时间内保持Cry1Ab蛋白构象的稳定性。