P53蛋白在胃肠道恶性肿瘤切缘组织中表达的临床研究

目的：探讨了以P53蛋白为代表的分子切缘与常规细胞病理切缘的关系以及切除肿瘤各边缘5．0cm的组织是否安全可靠,方法：对49例胃肠道恶性肿瘤的瘤中心组织及肿瘤边缘每隔0．5cm取材至上,下切缘5．0cm处,采用免疫组织化S－P法检测P53蛋白,并对应位点的病理切片相比较,结果：距肿瘤切缘愈远,P53蛋白表达率愈低,P53蛋白阳性表达与细胞病理切缘阳性在各位点上相一致,在胃癌中,上切缘阳性范围不超过2．5cm,下切缘不超过3．0cm;在大肠癌中,上切缘阳性不超过1．0cm,下切缘阳性不超过1．5cm,结论：以P53为代表的分子切缘的概念可补充细胞切缘的概念,两者结合有助于提高病理诊断的准确性和可信度,距胃肠道恶性肿瘤各边缘5．0cm的切缘范围是安全可靠的。     

人t-PA P区在大肠杆菌中表达及其活性研究

用PCR方法获得编码人组织型纤溶酶原激活物（tissure-typeplasminogenactivator,t-PA）C端P区肽段的DNA,并经测序证实,长810bp,含有全部的t-PA的丝氨酸蛋白酶编码序列.将这段序列克隆到表达载体pQE30中转化大肠杆菌JM109菌株,经SDS-PAGE检测转化菌株中表达出分子量约29×103的蛋白,用纤维平板法测定激活纤溶活性,结果表明表达的t-PA蛋白C端P区具有很强的激活纤溶蛋白酶原的活性.证实t-PA蛋白C端P区的酶结构区的功能是独立的,其生物活性不受其它区域影响．     

对虾肽Penaeidin-2在大肠杆菌中的融合表达及其抗细菌活性

采集南美白对虾血淋巴,从血细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增编码penaeidin-2成熟肽的开放阅读框cDNA序列,将其克隆至pGEM-T载体,进行序列测定,然后克隆至pET-32a(+)表达载体中,在E.coliOriga-mi B(DE3)pLysS中表达含6个His的重组对虾肽融合蛋白Pen-24,通过His Band resin Ni2+层析柱纯化获得Pen-24蛋白,采用纸片扩散法和液体生长抑制法检测该蛋白的抑菌活性.经SDS-PAGE分析,Pen-24蛋白的分子量为24.1×103.1μg对虾肽融合蛋白Pen-24与5 U的氨苄青霉素活性相当,对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和抗氨苄青霉素大肠杆菌均具有抑菌活性.     

昆虫细胞凋亡蛋白酶caspase-1的表达纯化及活性分析

依赖于天冬氨酸的半胱氨酸蛋白酶(caspase)在细胞凋亡途径中起着不可替代的关键酶作用.本研究采用原核表达载体pET32a表达和纯化了家蚕细胞Bm-caspase-1及粉纹夜蛾细胞Tni-caspase-1蛋白酶,序列分析表明二者具有相同的内部剪切识别序列,且酶活性位点均为QACQ↓G.纯化获得大量可溶性蛋白酶,Western-blotting分析表明Bm-caspase-1在大肠杆菌中已自我剪切活化,而Tni-caspase-1没有自我剪切,无酶活性;活性Bm-caspase-1蛋白酶对caspase-3特异性底物Ac-DEVD-AMC的降解酶活性可被Z-VAD-FMK呈剂量依赖性抑制,半抑制浓度约20nmol/L.此外,活性Bm-caspase-1蛋白酶能够转活化无活性的Tni-caspase-1蛋白酶原.结果揭示了昆虫细胞caspase同样具有与哺乳动物细胞caspase相似的底物降解活性并可相互剪切激活,为进一步研究昆虫细胞凋亡的分子途径奠定了基础.     

黑虎虾Crustin的克隆表达纯化及抑菌活性测定

从黑虎虾血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增编码Crustin成熟肽的cDNA序列,将其克隆至pMD18-T载体进行扩增,然后克隆到pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coliOrigamiTM(DE3)中表达Crustin抗菌蛋白,后通过Ni2+亲和层析柱纯化获得Crustin蛋白,采用滤纸片扩散法检测该蛋白的抑菌活性     

吡喹酮对日本血吸虫病肝组织中c-fos、c-jun mRNA和端粒酶逆转录酶表达的影响

为研究小鼠感染日本血吸虫时肝组织恶性变潜能以及吡喹酮对其的抑制作用，取120只小鼠随机分为4个组。第1、2组分别在感染日本血吸虫尾蚴6、12周时，以吡喹酮500mg·kg^-1·d^-1治疗2天；第3组为实验对照组，感染后不作任何治疗；第4组为正常对照组。应用HE染色、免疫组化染色及RT-PCR方法，观察和分析各组小鼠肝组织病理改变及产， c-fos和c-jun mRNA、端粒酶逆转录酶（TERT）的表达变化。结果表明病变早期予吡喹酮治疗后肝脏病理损伤减轻，肝组织中产，c-fos、c-jun mRNA以及端粒酶逆转录酶的表达均明显低于实验对照组（p〈0.01）但仍高于正常组（p〈0.01）；病变晚期予吡喹酮治疗后，与实验对照组比较，c-jun mRNA、端粒酶逆转录酶含量无显著差异（p〉0.05），仅c-fos mRNA表达降低（p〈0.05）。吡喹酮早期治疗组肝组织中上述3指标表达水平明显低于晚期治疗组。因此血吸虫病时肝硬化组织可存在恶性变潜能，早期吡喹酮治疗可显著降低肝组织这种恶性变潜能。     

动物细胞凋亡相关基因p53和c-myc在大麦中的染色体定位

以人的原癌基因c myc和抑癌基因p53的cDNA为探针,经Southern杂交证明,它们在大麦基因组中存在同源序列.利用荧光原位杂交技术(FISH)进一步对大麦进行了染色体定位.在大麦有丝分裂中期染色体上p53有3个位点被检出,分别位于2L(第二染色体长臂)、2S(第二染色体短臂)和6L上,相应百分距离为84.27±0.75、46.24±15.44和19.23±0.53;c myc有2个位点被检出,分别位于5L和3S上,百分距离相应为75.90±6.62和47.63±5.20.利用改进的荧光原位杂交技术,使异源单拷贝或低拷贝基因在大麦姐妹染色单体上,同时出现信号的检出率达到了30%以上.     

生物组织非线性光学二次谐波及其层析成像分析

对生物组织中的二次谐波进行了理论分析，通过求解耦合波方程得到高散射介质中二次谐波的表达式，得出了具有高散射性的生物组织中的二次谐波理论模型，给出了散射因子的具体形式并作出了初步分析。并用蒙特卡罗方法分析了紧聚焦高斯光对生物组织进行二次谐波层析成像过程，得出了在探测生物组织不同深度时，探测点附近二次谐波的空间纵向分布及二次谐波信号光的强度变化。     

美国红鱼(Sciaenops ocellatus)鳍条组织的同工酶表达

通过用垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的方法,对美国红鱼（Sciaenops ocellatus）鳍条组织的4种同工酶（LDH,POD,ATP,EST）的表达进行研究,并与眼睛、肌肉、心脏、肝脏、脾脏和肾脏等6种组织或器官的4种同工酶（LDH,POD,ATP,EST）表达进行比较．结果表明：在鳍条组织中共表达出12条酶带,与其他几种组织或器官相差不多,可以替代其他组织或器官作为同工酶检测的材料之一,从而避免杀死鱼类来作同工酶分析,大大减少了科研成本并明显简化了实验步骤．     

呋喃唑酮在凡纳滨对虾组织中代谢动力学研究

运用液相色谱-串联质谱法研究了呋喃唑酮药饵多次给药后在凡纳滨对虾体内的药物代谢动力学.研究结果表明：呋喃唑酮代谢物在血淋巴、肝胰脏、肌肉组织中的代谢过程均符合二室模型,其动力学方程分别为C血液=414.107×e^-0.092t＋124.451×e^-0.005t,C肝胰腺=1625.563×e^-0.019t＋125.700,C肌肉=120.434×e^-0.019t＋71.579×e^-0.001t.凡纳滨对虾血淋巴和肝胰腺中呋喃唑酮代谢物浓度在4h达到高峰,肌肉中药物浓度在2h达到最大值;最高峰时血淋巴、肝胰腺和肌肉中药物浓度平均为570.6μg·L^-1、1948.6μg·kg-1和210.0μg·kg-1.在血淋巴、肝胰腺和肌肉组织中呋喃唑酮代谢物浓度的吸收半衰期（t1/2α）分别为7.497h、36.206h和36.484h,消除半衰期（t1/2β）分别为132.525 h、1 000 479.217 h和505.637 h,总表观分布容积（V1/F）分别为55.775 L·kg^-1、17.16 L·kg^-1和161.574L·kg^-1.说明给药后呋喃唑酮代谢物在凡纳滨对虾体内消除缓慢,残留严重,尤其以肝胰脏残留最为明显.     

岱衢族大黄鱼不同组织的同工酶谱

于2006年11月,在象山港采集30尾网养岱衢族大黄鱼,采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳方法,研究分析了岱衢族大黄鱼眼睛、肌肉、肝脏、肾脏、脾脏、心脏、胸鳍、鳃和脑9种组织中16种同工酶（LDH、ADH、MDH、ME、SOD、POD、EST、GAD、ALP、ATP、FDH、SCD、IDH、GDH、ACP、GcDH）的表达情况,发现除IDH、GDH、ACP、GcDH 4种酶只显示微弱且不稳定的区带外,其他酶类在各组织中都显示出清晰稳定的酶谱,且这些酶在表型、分布和活性上均表现出高度的组织特异性,与各组织的生理功能相一致.