在有机介质中固定化脂肪酶反应特性及其动力学研究

采用酶工程固定化技术,研究了固定化脂肪酶在生物反应器的有机介质中的反应特性及其催化动力学,探讨了脂肪酶水解植物油脂制备脂肪酸反应中的最适固定化载体、底物和反应条件.结果表明最适酶为酵母脂肪酶;最适固定化脂肪酶载体为硅藻土Celite545;最适底物为樟核油和棕榈油;最适反应条件是500 r/min,pH6.5,35℃,底物浓度60%.动力学研究结果表明Km2.35×10-2mol/L,Vm=0.75mol/L.min.     

硅烷化磁铁粉固定胰蛋白酶的研究

分别以硅烷化磁铁粉、硅烷磁化脱乙酰几丁质及脱乙酰几丁质作载体,甲醛或戊二醛为交联剂,对胰蛋白酶的固定化条件及所制备的固定化酶的性质进行了研究．研究了载体种类、交联剂和ｐＨ值以及载体与酶比例等因素对胰蛋白酶固定化的影响．研究了不同载体固定胰蛋白酶的特点,证明以硅烷化试剂和甲醛作交联剂的硅烷化磁铁粉作胰蛋白酶固定化的载体具有明显优点,所制备的硅烷化磁铁粉固定化胰蛋白酶酶学性质明显优于可溶性胰蛋白酶     

三种形态的壳聚糖固定化脲酶的研究

以戊二醛为交联剂制备了3种固定化载体，即粉末状(I)，凝胶状(Ⅱ)，海棉状(Ⅲ)，并测定了固定化酶的特性．结果显示：固定化脲酶I，Ⅱ，Ⅲ的最适pH都是6，而游离酶的最适pH为7；固定化腮酶I，Ⅱ，Ⅲ的最适温度分别为55，55，45℃，游离酶为50℃；固定化酶I，Ⅱ，Ⅲ的表观米氏常数Km分别为2．78，14．5，34．5mmo1／L，游离酶的Km为55．5mmol/L．以上结果并结合固定化酶pH耐受性及贮存稳定性可知，凝胶状(Ⅱ)固定化载体更适于酶的固定化．     

氨基功能化大孔SiO2固定化漆酶

在溶剂热条件下,采用后嫁接法对新型大尺寸Si O2大孔材料进行氨基化改性,以氨基修饰的Si O2大孔材料为载体,借助交联剂戊二醛(GA)使诺维信工业漆酶固定化.研究结果表明:在GA质量分数为3%,p H值为5,漆酶质量浓度为30 mg·m L-1条件下固定化4 h制备得到的固定化漆酶最优,活力达到111.4 U·g-1;比较固定化漆酶和游离漆酶的性质发现,固定化漆酶p H稳定性和热稳定性均优于游离漆酶,固定化漆酶重复使用性好,与底物反复操作10次后,相对活性仍保持70.8%.     

固定化藻菌共生体处理畜禽养殖废水效果优化

针对固定化藻菌共生体处理畜禽养殖废水中废水处理效果及微生物生长量等问题。在实际废水中,拟通过正交试验和多指标全概率分析法,研究固定化参数对固定化小球强度、微生物生长情况、碳氮磷去除效果的影响,优化固定化参数;并通过实验对比,探究固定化对藻菌共生体的影响。结果表明：海藻酸钠浓度为4%、氯化钙浓度为1%、固定化时间为12 h时是最适合畜禽养殖废水的固定化参数;固定化藻菌体系明显拥有更高的生物量,固定化藻菌体系的COD、TN、TP去除率分别为92.63%,53.04%,91.58%,除COD去除率略低于悬浮性体系外,其他项目较悬浮性藻菌体系均有明显优势。该结果可为固定化藻菌共生体在畜禽养殖废水处理中的应用提供一定参考。     

固定化假单胞菌产L-多巴

选择海藻酸钙和聚乙烯醇凝胶为固定化载体包埋假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．），以提高该菌以Ｌ－酪氨酸为底物生产Ｌ－多巴的效率．海藻酸钙和聚乙烯醇固定的假单胞菌分别将发酵周期缩短了８和１４ｈ．半连续发酵的结果表明，海藻酸钙和聚乙烯醇固定化细胞分别能重复使用５次和１４次，Ｌ－多巴生产效率比游离细胞分别提高了１６％和１６０％．聚乙烯醇固定化细胞经过热处理和在生理盐水中振荡处理可明显提高Ｌ－多巴的生产效率和产量，过高的底物加入量不利于固定化细胞的重复使用     

溶解-沉淀可逆的酶载体的合成及其应用

由丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯和顺丁烯二酸酐共聚，合成了ｐＨ敏感的溶解－沉淀可逆的共聚物，并测试了共聚物溶解－沉淀相分离的临界ｐＨ值．以这种共聚物为载体，进行了木瓜蛋白酶的固定化．     

硒酵母对鱼酱油品质的影响

以鱼蛋白为原料，在酶解与曲酶发酵相结合的基础上，于后熟阶段加入硒酵母作为有机硒的载体和增香工具，生产品质优良的富硒营养鱼酱油。试验结果表明：采用后熟温度35℃，酵母液量10％，酱醅盐度8％和12％，后熟发酵周期12d的工艺条件，可生产出优质的富硒鱼酱油。产品的氨基氮、有机酸等营养成分均高于国家标准，有机硒的含量达到国内专用硒保健品的水平。     

2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶在毕赤酵母中的分泌表达

为实现2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶基因(DERA)在毕赤酵母中分泌表达。通过PCR从E.coli BL21基因组中扩增获得DERA序列,并且与毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K进行连接,构建得到重组质粒pPIC9K-DERA。重组载体经salⅠ单酶切线性化后电击转化至毕赤酵母GS115感受态细胞,用MD/MM平板筛选阳性株并在含G418的YDP培养基中筛选多拷贝插入菌株。经PCR鉴定获得一株插入pPIC9K-DERA的多拷贝嗜甲醇重组毕赤酵母菌株。用甲醇诱导该重组菌株,分泌得到具有活性的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶,且72 h时酶活为2.4 U·mg-1。结果表明,2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶可实现在毕赤酵母中分泌表达。     

纳米复合载体固定酪氨酸酶合成左旋多巴

利用模板法制备大孔SiO₂材料,而后借助水热合成法在孔道中生长ZnO纳米线,得到新型纳米复合材料(SiO₂/Zn ONWs).采用静电吸附法将酪氨酸酶(TYR)固定在纳米复合载体上,用于L-多巴合成.从扫描电子显微镜中观察到ZnO纳米线在孔道中呈现无规线团形貌,且分布均匀. TYR在SiO₂/ZnO NWs上的最大负载量高达162.3 mg·g^-1,约是纯大孔SiO₂载体3倍,且远高于其他固定化TYR系统.利用固定化TYR进行L-多巴合成,在最优反应条件(35℃、p H 6.0、L-抗坏血酸浓度10 mmol·L^-1)下催化1.5 h, L-多巴的产率可达70.2%.固定化TYR展现良好的储存稳定性,储存28 d仍保持78.6%的相对活性,远高于游离状态TYR,并可重复使用,经历10个循环后仍能保持42.1%的L-多巴产率.     

猪胃蛋白酶原A基因cDNA的克隆及其表达

根据GenBank中发表的猪胃蛋白酶原A（pepsinogen）基因序列设计引物，采用RTPCR技术，成功获得了猪胃蛋白酶原A基因，该基因全长1240bp，将该基因克隆到表达载体pPIC3．5K的EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点构建重组表达质粒，通过电转化方法将重组质粒转化毕赤酵母GS115，检测结果表明猪胃蛋白酶原A基因在毕赤酵母中得到了表达．     

pH敏感相分离的固定化酶的制备和性质

报道了一种新的制备溶解性可调节的固定化酶的方法．先将木瓜蛋白酶与Ｎ－羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯（ＮＡＳ）反应，再利用自由基溶液聚合反应，制备了ｐＨ敏感相分离的固定化木瓜蛋白酶．考察了固定化过程中的ｐＨ值、反应时间及给酶量对固定化木瓜蛋白酶活力的影响，同时还测定了单体配比对固定化酶临界ｐＨ值的影响．这些固定化酶均具有较敏感相分离的特性，兼有溶液酶和固相酶两者的优点．     

毕赤酵母对不同细菌抗原的差异性表达

利用毕赤酵母研究真核细胞对不同的原核细菌可溶性蛋白抗原的差异性表达。用PCR技术扩增3种不同的结核杆菌抗原基因Ag85a、ESAT6、以及rdESAT6和1种肺炎链球菌抗原基因PsaA。将它们分别连接到pPic9k载体中,在毕赤酵母中进行表达。然后采用离子交换柱或镍柱(Ni-NTA)分别纯化这4     

固定化单宁对酒类营养成分的吸附性能研究

采用固定化单宁对酒中可能存在的营养成分蛋白质、氨基酸、糖类、有机酸、乙醇和铁离子等进行吸咐试验。结果表明：固定化单宁对不同营养成分的吸附率差别明显，它通过氢键和疏水作用对蛋白质有较大的吸附率，通过多个酚羟基与中心铁离子形成螯合物而对其有较大的吸附率，对氨基酸、糖、有机酸和乙醇等营养成分或风味物质吸附率不大，固定化单宁可以作为一种较为理想的酒类处理剂。     

纳豆菌细胞包埋材料的选择

以海藻酸钠（SA）和聚乙烯醇（PVA）为包埋材料，采用固定化细胞技术对纳豆菌生产纳豆激酶进行了研究。研究发现，在PVA中加入SA进行细胞包埋可获得渗透性能好强度高的固定化细胞，通过正交试验进一步确定：当PVA的浓度为11％，SA的浓度为1％，硼酸的浓度为5％，CaCl2的浓度为6％时，固定化细胞的强度最好，可反复使用6批次，活性也很高，产生的纳豆激酶酶活溶纤圈直径积达88mm^2／15μL。     

陶瓷紫色高温颜料的研制

对紫色陶瓷颜料进行了大量试验研究,并在此基础上进行正交试验筛选,得到了一组呈色较好的紫罗兰和紫红色配方。     

蝎神经毒素AaIT的表达及功能分析

在不改变氨基酸编码序列的情况下，根据大肠杆菌密码子偏爱性，设计并人工合成了适合于大肠杆菌表达的蝎神经毒素AaIT基因．将该基因插入到大肠杆菌表达载体PET32a＋中，得到重组质粒PET32a-AaIT，将该质粒转入带有trxB／gor双突变的大肠杆菌Origami（DE3），重组菌株经IPTG诱导后，获得町溶性表达产物，但该表达产物没有生物学活性．把此基因插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC6αA构建重组质粒pPIC6αA-AalT，转化毕赤酵母（X-33），经甲醇诱导后，获得高水平的分泌表达（20mg／L）．表达产物喂食银纹夜蛾及甜菜夜蛾没有表现出生物活性，经注射有活性．     

与HBV X蛋白相互作用的细胞蛋白的筛选及其鉴定

参考GenBank核苷酸序列库中的HBV的核苷酸序列设计合成了一对对应于HBx基因的引物，从原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)患者的血清中提取HBV基因组DNA作为模板，扩增HBx编码区并测定了核苷酸序列．将该编码区克隆到酵母双杂交系统的诱饵蛋白表达载体pGBKT7中，转入酵母细胞AH109，进行表型鉴定．然后通过Mating实验从已制备好用于酵母双杂交系统的肝cDNA表达文库中筛选与HBx相互作用的细胞蛋白，并用体外免疫共沉淀实验进一步验证．研究表明，分离得到的与HBx基因编码的蛋白相互作用的4种新的细胞蛋白，分别是醛缩酶B、C8α亚基、一种丝氨酸蛋白酶Hepsin和一种未知蛋白．     

有机溶剂中固定化脂肪酶催化水解植物油脂的研究

研究了在有机溶剂中固定化脂肪酶对樟核油、棕油水解反应的催化作用,考察了有机溶剂／水、固定化酶量、反应时间等因素对水解反应的影响。实验结果表明：在３７℃时,水解樟核油的最佳条件是有机溶剂／水９８％、固定化酶量０．０２ｇ／ｇ油、反应时间６ｈ,而水解棕榈油的最佳条件是温度３５℃、有机溶剂／水９５％、固定化酶量０．０２ｇ／ｇ油、反应时间４ｈ。     

米曲霉菌体细胞固定化及DL-蛋氨酸的光学拆分

用亚硝基胍对产氨基酰化酶的米曲霉(Aspergillus oryzae)3042进行诱变,经过筛选获得诱变菌株3042-5,再进行自然分离后得到了一株高产菌株3042-5-5a,其自由酶活力提高了215-7％-采用此菌株进行了固定化细胞酶法拆分DL一蛋氨酸(DL-Met)的研究,得到了最好的固定化条件为8％明胶包埋,0-1％戊二醛交联12h-制得的固定化细胞酶活力为81-99u／g-固定化细胞酶的最适作用温度为65℃,最适作用pH为8-0-用固定化细胞装柱,将连续拆分得到的产物用离子交换法进行分离精制,L-蛋氨酸盐酸盐的得率为理论产值的69-4％。