蛹虫草多糖分离纯化及性质的研究

以蛹虫草菌丝体粗多糖为材料进行分离纯化及性质的研究.提取液浓缩用3倍体积乙醇沉淀,等电点Sevag法除蛋白,10%H2O2脱色,得到的粗多糖经DEAE-DE52纤维素柱层析,用0～0.2mol/L的NaCl洗脱,可以得到未完全分离的多糖.将此多糖经Sephadex-G200柱层析,用蒸馏水洗脱.将多糖用Sepharose CL-6B柱层析进行纯度鉴定,经验证是单一多糖.对多糖进行纸层析,证明组分是D-葡萄糖和D-半乳糖.用高效液相色谱法测定多糖分子质量为3.76×104ku.以昆明种小鼠对多糖进行生物活性研究,多糖对小鼠S180肉瘤抑制率达到71.92%.     

高产D-甘露醇虫草菌种分离纯化的研究

本试验系用生物工程技术分离纯化虫草菌种的研究。先用组织分离法从野生虫草整体组织上分离出虫草菌种 ,再用平板稀释法将菌种纯化 ,获得一株高产D -甘露醇 (虫草酸 )的优良菌种。该菌种被鉴定为蝙蝠蛾拟青霉。使用该菌种经一级种子培养和发酵培养 ,获得含D -甘露醇 9 9% (野生虫草约 7% )、总氮 5 1% (野生虫草约 4% )的虫草菌丝体。原种斜面培养基组成 (% ) :琼脂 2、葡萄糖 2、蛋白胨 0 2、磷酸二氢钾 0 1、硫酸镁 0 0 3、麦麸 5。种子培养基组成 (% ) ;葡萄糖 2、蛋白胨 0 5、磷酸二氢钾 0 1、硫酸镁 0 0 3、麦麸 5。原种培养温度 2 3- 2 4℃、培养时间 4- 5天 ;平均稀释纯化所用稀释菌液为 10 -1、 10 -2 、 10 -3 、 10 -4 、 10 -5、 10 -6,挑菌培养温度分别为 2 3- 2 4℃、 2 8℃、 37℃。种子培养条件 :一级种子培养 :摇床转速 180r/min ,培养温度 2 4- 2 5℃ ,时间 2 - 3天 ;二级种子培养 ;摇床转速 90r/min ,培养温度 2 4- 2 5℃ ,时间 2天。发酵培养条件 ;接种量 5 - 10 % ,温度 2 4- 2 6℃ ,搅拌速度 15 0 - 180r/min ,通气培养 ,时间 5 - 6天 ,PH4 5 ,残糖量降至 0 3%。     

优化条件对蛹虫草菌丝体与胞外多糖得率研究

采用摇瓶法对蛹虫草无性型菌种(ACCC 50383)菌丝体发酵培养,以菌丝体与胞外多糖得率为指标,通过单因素方差分析、S-N-K多重比较和回归方程分析,分别考察6种碳源和6种氮源,确定最适碳源为蔗糖,最适氮源为大豆蛋白胨;对发酵条件的研究表明,获得较高产率的发酵时间为6 d,最适发酵温度为(26.3±0.9)℃,发酵液初始pH值对发酵产率无影响,获得最大发酵产量时装液量为(208±28)mL。     

蛹虫草发酵罐培养生产虫草多糖和虫草素条件的研究

采用摇瓶培养法通过单因素试验和正交设计试验初步拟定蛹虫草的发酵罐培养条件.基本上罐条件为初始pH6.5,温度21℃,转速150rpm,培养时间5d.在此基础上分别以菌量、多糖和虫草素为指标,调整通气量和装液量.当以获得菌量和多糖为目的时,通气量为0.9m3/h、装液量70%.若以得到虫草素为目的,通气量调整为0.7m3/h、装液量70%.     

蜜环菌胞外多糖的分离纯化及其性质研究

从蜜环菌发酵液提取粗多糖,经分离纯化得到多糖-A和多糖-B两个组分,快速纯化系统(FPLC)和电泳法鉴定各自为均一的组分。FPLC法测定A组分的分子量分别为2.0×105,苯酚-硫酸法测得其总糖含量为86.6%,考马斯亮蓝法测其蛋白含量为12.92%,硫酸-咔唑法测其酸性多糖含量为28%,红外光谱呈现多糖吸收特征峰,含有吡喃糖苷键。β-消去反应初步证明所提取的多糖-A存在O-糖肽键。     

富硒虫草菌丝体的发酵培养及其生物学功能研究

采用菌种Cordyceps Sinensis进行液体发酵,在发酵培养基中添加微量Na2SeO3,虫草菌丝体收得率达2.52%,其中硒含量达7.90 mg/kg;经动物试验结果证明发酵法生产的富硒虫草菌丝体安全无毒,并具有延缓衰老之功能;其他生物功能比较研究结果表明,发酵生产的富硒虫草菌丝体在耐缺氧、抗疲劳等功能方面均优于天然虫草,因此完全可以替代天然野生虫草应用.     

包心芥菜多糖的分离纯化及理化性质分析

研究包心芥菜多糖的提取、分离和纯化技术,并对得到的多糖进行初步的鉴定.经醋酸纤维薄膜电泳和高效液相色谱分析证明,所得到的包心芥菜多糖WLP-2为纯品,不含蛋白质、核酸,为非淀粉类均一多糖,其相对分子质量为433048.WLP-2完全酸水解后,经高效液相色谱分析确定其糖基的组成为鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal),摩尔比为3.21∶1.00∶1.66∶1.90∶4.03.     

白阿魏菇菌丝体多糖分离纯化工艺的优化和结构分析

对白阿魏菇菌丝体多糖的提取和纯化进行了优化设计，粗多糖经DEAE—cellulose及SephadexG-100柱层析，纯化得纯多糖(PNMP)，该多糖经聚丙烯酰胺凝胶电泳，SephadexG-100柱层析和紫外光谱分析鉴定纯度；通过红外光谱，气相色谱对PNMP进行组分分析；再用高碘酸氧化，Smith降解和测硫酸基法来鉴定其化学结构．结果表明，白阿魏菇菌丝体多糖提取最佳工艺为，用水浸提3h，pH7．O，温度90℃，搅拌，料水比为1／15，浸提2次，醇析浓度70％；蛋白质去除中，V氯仿：V正丁醇=2：V样品：V氯仿-正丁醇=2：1，萃取时间为40min，得粗多糖CPNMP，纯度为59．2％；在结构分析中，纯多糖(PNMP)纯度为83．22％，硫酸基含量为7．5％；该多糖至少由半乳糖、甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖等组成，糖苷键连接方式为1→3，1→6。     

冬虫夏草与虫草菌丝有效成分分析比较

对冬虫夏草及其无性型（ＴｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍｓｉｎｅｎｓｅＣ．Ｌ．Ｌｉ．）的虫草多糖。红外光谱、甘露糖、氨基酸、微量元素等作了分析和比较。发现二者成分比较近似,通过急性毒性实验Ａｍｅｓ实验,微核实验表明虫草菌丝安全无毒。     

深层发酵生产灵芝菌丝体多糖研究

采用生物工程发酵技术进行灵芝菌730菌丝体多糖扩大生产,在500 L全自动不锈钢发酵罐中通过控制深层发酵工艺条件获得灵芝菌丝体、灵芝多糖。结果表明:发酵70 h,镜检菌丝壁上无明显的芽头和锁状联合,菌丝体有少许自溶,无杂菌。灵芝菌丝体的浓度达到30%左右,胞外灵芝多糖和胞内灵芝多糖分别达3.5g/L和4.8%。     

蛹虫草液体培养联产胞外多糖与菌丝虫草素的实验研究

通过对蛹虫草(Cordyceps militaris)液体发酵产胞外多糖和菌丝虫草素的初步实验研究,获得了蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的适宜参数.研究结果表明,蛹虫草液体发酵联产胞外多糖和菌丝虫草素的较适宜的氮源是豆粕粉和6%~8%玉米浆粉;较适宜的碳源是玉米面;维生素B1添加量以10 mg/100 m L、微量元素锰添加量以0.01%Mn SO4为宜、培养基初始p H值以5.5为宜;培养温度22~24℃,接种量1%,培养基装量50 m L和5~7 d的培养时间有利于胞外多糖和菌丝虫草素的产生.     

人工冬虫夏草多糖提取物对小鼠免疫功能的影响

 为研究人工冬虫夏草多糖提取物对小鼠免疫功能的影响,采用小鼠的体质量法,脾脏、胸腺质量法,迟发型变态反应试验法,及单核巨噬细胞吞噬功能试验法研究了多糖提取物对小鼠免疫影响。实验结果表明：人工虫草多糖提取物可以增加小鼠胸腺质量;改善DNFB诱发的小鼠迟发型变态反应;也能明显提高单核巨噬细胞的吞噬能力,但对小鼠体质量没有影响。因此人工冬虫夏草多糖具有增强小鼠免疫功能的作用。     

紫芝多糖的纯化及组分分析

紫芝（Ganoderma Sinense)多糖是紫芝抗肿瘤的主要成分，不同浓缩方法对多糖提取率及结构有较大影响。以超滤法浓缩为最佳，三氯乙酸法除蛋白比常用的Sevage法效果更好，利用DEAE纤维素离子交换层析和SephadexG－100凝胶层析对粗多糖多离纯化得到5种不同的多糖组分PW1，PW2，PJ，PW3，PS，并对各组分的组成，分子量和解性进行了测定。     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

植物花色苷定性定量研究方法

植物组织中是否有花色苷及其类型，可通过植物组织的颜色、抽提液的颜色、抽提液在pH梯度中的颜色等作大致的推断，但对植物组织中的花色苷进行较精确的定性还需做进一步分离、纯化和鉴定．定量分析要依据材料不同而选择不同的方法，本文对花色苷定性定量研究方法进行了综述。     

穿山龙多糖的提取与纯化工艺条件优化

通过单因素法,研究从穿山龙中提取水溶性多糖的工艺条件,以及分析原料质量与提取液体积的比(料液比)、浸提温度和提取时间3个主要因素对提取量的影响,并对热水浸提穿山龙多糖的工艺条件进行优化.实验表明,水提多糖最佳提取工艺条件:料液比(g∶mL)为1∶4,浸提温度为90℃,浸提时间为2.5 h.按最佳工艺条件水煮提,醇沉干燥得到粗多糖(CP),经柱层析分离纯化后,可得组分CP-Ⅰ,CP-Ⅱ.采用柱层析、纸电泳检测组分的纯度,并利用高效液相色谱法和纸层析法分析组成,结果表明,CP-Ⅱ为单一多糖,由鼠李糖(Rha)、果糖(Fru)和葡萄糖(Glu)3种单糖组成,其量比n(Rha)∶n(Fru)∶n(Glu)为1∶1.08∶48.6.