几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较

常规的农杆菌质粒DNA提取常采用碱裂解和酚、氯仿提纯方法，得率较低，一般在50ng／uL以下。就经典的碱裂解法(方法一)和在碱裂解法的基础上改进的方法二(去除了酚、氯仿提取过程，减少了提取过程中对人的伤害，且缩短了提取时间)以及改进的方法三进行了比较，实验结果表明：改进的方法二更适宜于做PCR检测，而方法三则适合于重组质粒DNA的酶切、PCR鉴定等。     

农杆菌质粒DNA高效提取方法研究

以EHA105菌株为实验材料,通过优化质粒扩增条件、加大菌液使用量、改良提取纯化过程中所用试剂等,简化了操作流程,给出了一种高效提取农杆菌中质粒DNA的方法。结果表明,选择LB＋KANA为培养基、抗生素质量浓度为50 mg/L,细菌培养至OD600=0.634～0.714时,以5 mL/次用量取菌液裂解;以改进方法提取试剂,得率与常规方法相当。该方法在满足PCR检测条件的前提下既减少了酚、氯仿等有毒试剂的用量,又省时、经济、方便,为植物转基因工程中目的物DNA的检测提供了技术支持。     

一种快速的重组农杆菌PCR鉴定方法

建立一种快速的重组农杆菌PCR扩增鉴定方法,采用煮沸法处理重组农杆菌,使农杆菌高温裂解,释放质粒DNA,直接进行PCR扩增反应,检测目的基因片段.结果表明,重组质粒PCR扩增效果较好,目标条带较为明显.通过煮沸重组农杆菌,进行PCR扩增反应鉴定质粒DNA,不仅实验操作简单安全,缩短实验时间,并且避免了酚、氯仿试剂在提取质粒DNA过程中的残留对后续分子鉴定质量的影响.     

一种快速提取质粒DNA鉴别重组克隆的方法

依据快检缓冲液筛选重组子克隆的方法,结合碱裂解法提取质粒DNA的原理,经过试验摸索,应用了快检缓冲液直接裂解菌液,电泳后筛选重组质粒的方法,避免了提取质粒鉴定等繁琐步骤,其结果与菌液PCR、质粒酶切鉴定结果一致,可快速筛选出重组克隆.     

提取大肠杆菌(E.coli)质粒DNA的一种简便方法

在重组DNA或遗传工程的研究工作中,如果有一种快速而简便的提取质粒DNA的方法,这将使工作的开展方便得多,而且工作速度也可以大大加快。下面叙述的是根据一个微量鉴定转化子质粒DNA的方法,加以改进而成为较大量提取质粒DNA的新方法。     

一种快速简单的质粒DNA纯化方法

文中介绍一种快速获取高纯度质粒ＤＮＡ的方法，这种称之为万能微量制备（ＴｈｃＭａｇｉｃＭｉｎｉｐｒｅｐｓ）ＤＮＡ纯化系统在质粒ＤＮＡ纯化过程中不用有机溶剂抽提和乙醇沉淀，而用一万能微柱吸附质粒ＤＮＡ，吸附上的质粒ＤＮＡ可用于水或ＴＥ缓冲液洗脱出来，且不含任何盐或主同分子杂质，纯化的质普ＤＮＡ不需进一步处理即可直接进行ＤＮＡ顺序测定和限制性内切酶消化，整个过程可在１５ｍｉｎ内完成，不失为一种简单可靠的     

一种适合芽孢杆菌质粒DNA提取的改良碱裂解法

以Birnboim和Doly的质粒提取方法为基础,通过缩短菌体培养时间,增加菌体收集量,并对提取过程中所用的三种主要溶液的用量进行适当调整等,摸索出质粒提取的一种改良碱法.用改良后的碱法对浸麻芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌进行质粒提取,均获成功.     

一种高效安全提取质粒DNA方法的建立

在碱裂解法提取质粒DNA的基础上做了改进,将NaOH浓度从0.20 mol/L降低为0.10 mol/L,使得超螺旋DNA的得率进一步提高.采用silica法纯化质粒DNA,避免了使用有毒性和挥发性气味的饱和酚和氯仿,使得操作更安全简单.电泳结果表明,提取的质粒DNA质量好,得率高,并且可以直接进行下一步的酶切、连接及转化等实验.同时,该方法中使用的硅胶可以回收再生进行重复利用,节省了实验费用.     

一种快速提取BPSK载波的方法

本文提出了一种用倍频-滤波-自动频率微调(AFC)环路来提取TDMA载波的方案,给出了计算机模拟的结果。在分析环路时延对相位跟踪性能的影响时,给出了一种用线性微分方程进行时延分析的简便方法,并得到了与计算机模拟相一致的结果。实验结果与计算机模拟结果一致。     

介绍一种快速提取血红素的方法

本文与笔者在本刊第五期上发表的“从猪血中提取血红素技术”一文相比,方法更为简便、快速,而且避免了价格昂贵的冰醋酸的使用。因此,此法更适用于乡镇小企业及个体户。一、生产原理脊椎动物的血液(如猪、牛、羊等的血液)可分为血浆和血细胞两部分,血细胞约占全血容积的45％,血细胞中的主要成份是红细胞,红细胞中除含65％的水份外,主要成份是血红蛋白(约32％)。血红蛋白是由珠蛋白和血红素复合而成的。由于血红蛋白很容易纯化,而血色素和珠蛋白的相互作用     

酵母质粒的快速提取法

早期制备酵母2μm质粒的方法多是采用机械破碎细胞,所得到的质粒DNA中含染色体DNA碎片较多,得率也不高。Cameron和Devenish采取碱裂解法要求严格控制溶液pH值在12.45,因之不易操作,使此法运用受到限制。近年来,有人采用先提取酵母总DNA,再以酸酚法抽提质粒,仍然要求严格地保持提取液的pH值。用微量快速提     

一种简便快捷的植物线粒体质粒DNA的提取方法

介绍了一种从植物材料中提取线粒体质粒DNA的方法,该方法不需要密度梯度离心和有机溶剂油提,整个提取过程可在较短时间内完成,该方法简便,快捷,效果好,对拷贝数低的线粒体质粒DNA得率高。     

一种节肢动物模板DNA的快速提取方法

简要介绍一种高效、快速提取节肢动物模板DNA的方法,提取的DNA无污染物产生,完全能满足 RAPD等研究的需要.     

根癌土壤农杆菌Ti质粒毒蛋白基因VirD1的克隆及原核表达

根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1蛋白表现拓扑异构酶活性,能解除T-DNA边界处25bp重复序列的超螺旋状态,使外源基因的插入成为可能.本实验以C58菌株为模板,设计了一对含有BamHI和XhoI酶切位点的引物,成功克隆了VirD1基因,并构建了原核表达载体pET30a-VirD1,将其在宿主菌BL21中获得了表达,为将来构建含有VirD1基因的植物表达载体并协助目的基因转化奠定基础.     

根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1基因的克隆及序列分析

根据U．Washington报导的根癌土壤农杆菌(Agribacterium tumefaciens)C58Ti质粒基因序列，设计1对引物，利用PCR的方法扩增了c58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区VirD1基因。通过琼脂糖凝胶电泳，所得E1的片段略小于500bp，与引物设计跨幅片段476bp相吻合。将此片段连接到T载体，经蓝白斑筛选、PCR鉴定、测序及DNA序列分析，结果表明：克隆VirD1基因编码序列与报导的序列同源性达100％，说明通过PCR方法获得的VirD1基因片段是正确的，为进一步研究该基因的表达和活性奠定了基础。     

一种快速的目标边缘提取及跟踪方法

在光学跟踪测量系统对目标跟踪的过程中，需要随着目标的移动，始终知道目标的坐标。这就需要采用的算法能够准确、快速地找到目标所在位置。文中正是基于此种要求提出了一种快速的目标边缘提取及跟踪的方法。     

一种快速简单高效提取植物DNA的方法

在综合分析多种提取植物DNA方法的基础上,改良发展了一种快速简便高效的DNA抽提方法.以多种植物的子叶、叶片以及愈伤组织为材料,采用本方法进行抽提纯化,得到的DNA质量好、得率高,且提取过程简单,适合于大批量快速提取植物DNA.     

质粒DNA提取方法的研究进展

目前质粒DNA的提取方法有很多,本文综合阐述及比较了几种方法的利弊,试验证明异丙醇提取法所得质粒DNA浓度和纯度都很高,简便、快速,重复性好,能同时处理大量试样,所得DNA有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要,适合大多数实验室使用。     

一种快速提取酵母样真菌DNA方法的研究

对一种提取酵母样真菌染色体DNA方法进行实验,试图找到一种快速简便提取酵母样真菌的方法,并对提取结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增等方法的鉴定。结果表明:用此方法提取的酵母样真菌基因组DNA浓度为395.5ng/μL,OD260/OD280比值为1.58~1.66,可满足PCR特异性扩增捡验酵母样真菌的需要。     

一种新的线扫描快速成型工艺方法(英文)

一种新的线扫描选择性激光烧结快速成型 (SLSRP)方法可以提高对大工件的加工质量 .它与一般振镜点扫描完全不同 .它使用柱面透镜组将CO2 激光器输出的圆光束改变为扇形光束 ,从点 ( 0 .1 4mm)到最大线长 ( 40mm)实现无级变长以适应烧结层面的几何形状 .保证不同长度激光线上的功率密度恒定并满足在 3 0mm/s的扫描速度下对各种有机粉末材料进行有效烧结 .应用实践证明这种线扫描工艺的加工质量尤其是对大工件的加工质量优于振镜点扫描的工艺方法 ,可以很大地扩展SLSRP工艺的应用范围