文山松毛虫质型多角体病毒(DpwCPV)多角体蛋白基因的cDNA克隆及序列分析

通过对文山松毛虫质型多角体病毒的增殖 ,纯化 ,获得一株单一类型的质型多角体病毒 提纯的病毒粒子经SDS 酚抽提 ,琼脂糖凝胶电泳分离基因组dsRNA ,低熔点琼脂糖电泳法回收纯化编码多角体蛋白的第十片段S10 S10经DMSO变性 ,逆转录合成cDNA第一条链 ,PCR扩增后 ,克隆在PMD18 T载体上 ,克隆片段全长 76 3bp 起始密码AUG位于第 3～ 5位碱基 ,终止密码UGA位于第 74 7～ 74 9位碱基 推测DpwCPV多角体蛋白基因编码一段由 2 4 9个氨基酸组成的多肽 ,分子质量为 2 84 39.4 4× 10 3 与舞毒蛾质型多角体病毒 (LdCPV)多角体蛋白基因比较 ,两者核苷酸序列的同源性为 97% ,它们各自编码的多角体蛋白的氨基酸同源性为 99% ;与家蚕质型多角体病毒(BmCPV)多角体蛋白基因相比较 ,两者核苷酸序列的同源性为 88% ,它们各自编码的多角体蛋白的氨基酸同源性为 97%     

粘虫核型多角体病毒p35基因抑制细胞凋亡的功能研究

利用去血清方法建立Ls细胞凋亡的实验体系,证明LsNPV p35基因在Ls细胞中瞬时表达可以抑制Ls细胞由于无血清造成的凋亡,构建了在哺乳动物中高效表达LsNPV p35基因的载体pRc/RSV-L p35,并导入Vero细胞瞬时表达,发现LsNPV p35基因产物也可以抑制Vero细胞由于病毒感造成的凋亡,用含LsNPVp35的质粒与vAcAnb(AcNPV p35基因缺失病毒）DNA共转浸Sf-9细胞,可以使vAcAnhDNA在St-9细胞中形成多角体,并且传代后多角体不扩增,表明LsNPV p35基因与AcNPVp35基因具有功能互补性。     

蓖麻蚕核型多角体病毒包涵体蛋白的提纯及SDS—PAGE分析

对蓖麻蚕核型多角体病毒（Philosamia cynthia ricini Nuclear Polyhedrosis Viruses）的多角体蛋白polyhedrin的碱解性质以及分子量等进行了分析。结果发现：多角体加热灭活和碱解后,经等电点沉淀的polhedrin通过凝胶电泳仍存在较多的小分了量蛋白带,表明通常的70℃加热不能完全灭活碱性蛋白酶;在电泳图谱的主带polyhedrin-侧尚有一伴随的卫星带,可能提示包涵体的外膜蛋白。Sephadex-G200柱层析纯化的polyhedrin经SDS-PAGE分析,多角体蛋白有4条带,其中主带分子量约为30kd,另有一带处于61KD位置,推测为polyhedrin的二聚体,说明polyhedrin多聚体在杆状病毒包涵体中的普遍性。     

油桐尺蠖感染核型多角体病毒后血淋巴酯酶的变化

用核型多角体病毒（nuclear polybedrosis virus）感染油桐尺蠖（Buzura suppressaria）四龄初幼虫，以染病后12，24，48，72h分别对幼虫血淋巴进行酯酶同工酶（EST）电泳分析（Native-PAGE),并用薄层扫描仪检测酶带的相对含量，染病幼虫血淋巴的一部分EST含量低于同期对照组，而另一部分却高于对照组；就谱带而言，某些样品酶带在感染后出现迁移率的变化，而有些则出现新的酶带，这二种变化均表现在某一特定的酶带上，提示该酶带在病毒感染的血淋巴病理生化方面可能具有特殊意义。     

新城疫病毒HB 92株M基因的克隆和序列分析

采用RT-PCR方法扩增了新城疫病毒(NDV)无毒耐热株(HB92株)M基因，将其克隆于pGEM-T载体，并进行了序列测定和分析．结果显示，测定的M基因长1223个核苷酸。包含一个1095个核苷酸的开放阅读框(ORF)，编码364个氨基酸．与已报道的10株NDVM基因比较，核苷酸同源性为88．4％～95．8％，氨基酸同源性为89．8％～95．3％。HB92株与V4株M基因核苷酸的同源性最高(达95．8％)．NDVM蛋白分子中有9对碱性氨基酸。在多肽的第117～120位有一个含4个氨基酸CKKS的特征性结构．这些结果为揭示NDV HB92株的分子生物学背景，了解NDV的分子进化和遗传变异机理，进而开发利用HB92株奠定了基础，也为将NDV另列为副粘病毒亚科的一个新属提供了理论支持．     

马尾松毛虫CPV基因组第7片段的cDNA克隆及序列分析

利用琼脂糖凝胶电泳分离马尾松毛虫质型多角体病毒(DpCPV)基因组dsRNA,并回收纯化第7片段(S7).经逆转录和PCR扩增,获得2个亚克隆片段并测序.再根据已测序列设计引物,利用RNA连接酶介导的RACE法得到S7两端克隆并测序.通过拼接可得到DpCPVS7全序列.经过序列分析发现,S7全长1502bp,5′端具有CPV 1型末端保守序列AGTAA,3′端具有保守序列GTTAGCC.起始密码子ATG位于25～27残基,终止密码子TAG位于1373～1375残基,推测S7片段编码448个氨基酸多肽,分子量约为5.0×107.与舞毒蛾质型多角体病毒(LdCPV 1)和家蚕质型多角体病毒(BmCPV)第7片段相比较,核苷酸同源性分别为99%和86%.