乳腺癌肿瘤抑制候选基因5基因启动子甲基化水平研究

探讨人正常乳腺细胞株及不同乳腺癌细胞株肿瘤抑制候选基因5启动子甲基化状态,并分析其与雌激素受体、孕激素受体、人类表皮生长因子受体2的表达相关性。运用焦磷酸测序分析4种乳腺癌细胞株和1种人类正常乳腺细胞株中TUSC5基因启动子甲基化状态,以及实时荧光定量逆转录聚合酶反应和Western印迹来检测这些细胞株中TUSC5基因mRNA和蛋白的表达。结果表明：正常人类乳腺细胞株存在TUSC5基因启动子低甲基化,而4种乳腺癌细胞株存在不同程度高甲基化;在4种乳腺癌细胞株中,激素受体及 HER-2表达阴性即三阴性乳腺癌细胞TUSC5基因启动子甲基化水平较非三阴性乳腺癌细胞低;并且乳腺癌的发生可能与TUSC5基因启动子高甲基化有关,乳腺癌TUSC5基因启动子甲基化水平与激素受体、HER-2表达具有一定相关性,其发生的机制需进一步研究探讨。     

高尿酸血症和痛风易感基因单核苷酸多态性研究新进展及应用

尿酸盐转运子基因是近年全基因组扫描锁定的高尿酸血症和痛风易感基因, 如SLC22A12、SLC2A9、ABCG2基因等, 其编码肾尿酸盐转运系统相关蛋白质, 参与肾脏对尿酸的重吸收和分泌. 目前锁定的尿酸盐转运子基因可解释约7%的血尿酸水平变异, 有影响力的位点期待被发现. 已有研究将这些易感基因应用到药物基因组学及孟德尔随机化研究领域, 是未来新的发展方向.     

常见蔬菜醇提物对黄嘌呤氧化酶的抑制作用

体内尿酸浓度过高将导致高尿酸血症,会引起痛风的发作。黄嘌呤氧化酶既能催化次黄嘌呤生成黄嘌呤,又能催化黄嘌呤生成尿酸。为了提供健康的饮食依据,减少或预防痛风疾病的发生,文中研究了40种常见蔬菜的乙醇提取物对黄嘌呤氧化酶活性的体外抑制作用,结果表明在500mg·L-1用量下,24种蔬菜醇提物对黄嘌呤氧化酶有不同程度抑制作用;醇提物抑制效果最好的4种蔬菜分别是藜蒿、香菜、荷兰豆、红辣椒,抑制率依次为(65.7±0.26)%、(44.2±0.1)%、(40.1±0.12)%、(36.6±0.35)%。体内动物实验表明此4种醇提物在由氧嗪酸钾引起的高尿酸血症模型小鼠体内均具有较强降尿酸作用,并能抑制肝脏黄嘌呤氧化酶的活性,其中藜蒿醇提物效果最显著。     

维生素D受体基因Fok Ⅰ多态性与2型糖尿病的关系

探讨湖南地区汉族人群维生素D受体（VDR）基因FokⅠ位点多态性与2型糖尿病（T2DM）的关系。研究对象为853例，其中T2DM组473例和正常对照组380例。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态（PCR—RFLP）法检测VDR基因FokⅠ位点基因型。比较两组VDR基因FokⅠ位点基因型分布和等位基因频率，分析VDR基因FokⅠ位点多态性与胰岛β细胞功能的关系。T2DM组f等位基因频率高于正常对照组（P〈0．05），T2DM组Ff和ff基因型分布频率高于正常对照组（P〈0．05）。T2DM组FBG、PBG水平高于正常对照组（P〈0．05）。T2DM组ff基因型组的口服葡萄糖耐量后2h胰岛素低于FF基因型组（P〈0．05）。VDR基因FokⅠ多态性与中国湖南地区汉族人群T2DM发病相关，VDR基因ff基因型和Ff基因型可能是T2DM的发病风险因素。     

车前草降血尿酸有效成分提取工艺的研究

建立小鼠急性高尿酸血症模型,通过灌胃给药考察车前草的降血尿酸作用.采用正交试验设计,以车前草所含大车前苷为指标,考察乙醇浓度、提取时间、提取次数和乙醇用量4种因素对提取结果的影响.大车前苷和血尿酸的含量均用HPLC法测定.结果表明,车前草醇提组的小鼠血清尿酸水平明显低于模型组(P0.05).乙醇浓度、提取时间、提取次数和乙醇用量4种因素对车前草乙醇提取物中的大车前苷含量均有显著影响.最佳提取工艺为用10倍药材量的60%乙醇提取2次,每次2 h.     

TEAD4与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系及分子机制探讨

探讨TEAD4表达与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系。用免疫组化MaxVision法结合光密度分析检测目标蛋白的组织表达。通过真核表达质粒pCMV3-TEAD4转染子宫颈鳞癌SiHa细胞以获得TEAD4基因过表达;应用Western blotting法检测细胞中目标蛋白的表达。分别利用CCK-8实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖和侵袭能力。子宫颈鳞癌组织中TEAD4平均表达水平(0.186±0.0355)显著高于正常宫颈上皮组(0.0494±0.0105,P<0.001),且TEAD4的表达与子宫颈鳞癌的淋巴结转移、脉管浸润和宫旁浸润有关(P<0.05),与子宫颈鳞癌的患者年龄、肿瘤大小、和分化程度无关。TEAD4的表达与MMP9的表达呈正相关关系(r=0.394,P<0.01)。TEAD4基因转染后的宫颈鳞癌细胞的增殖能力和侵袭能力显著增强。TEAD4基因转染诱导宫颈鳞癌细胞P-ERK1/2和MMP9蛋白表达上调,而ERK抑制剂(U0126)能显著抑制TEAD4诱导的MMP9上调。TEAD4高表达于子宫颈鳞癌,促进子宫颈鳞癌增殖和侵袭能力,其机制可能与TEAD4激活ERK1/2-MMP9信号通路有关。     

基于SPSS的教职工健康体检数据分析研究——以宁波大学为例

为尽早预防疾病, 开展健康管理, 改善教职工的健康现状, 对2018—2021年期间宁波大学教职工的健康体检资料采用SPSS 23.0软件进行统计分析. 结果表明 2018—2021年检出前10种疾病略有不同, 4年间检出率均位于前10位的疾病有甲状腺结节、肺结节、血脂异常、高尿酸血症、心电图异常、乳腺异常. 其中每年血脂异常、肺结节及高尿酸血症检出率男性高于女性(P< 0.05), 甲状腺结节的检出率则是女性高于男性(P<0.05); 甲状腺结节、肺结节和高尿酸血症的检出率呈现逐年升高趋势(P<0.05); 每年检出的疾病随年龄变化的态势各不相同, 其中血脂异常、甲状腺结节、肺结节、心电图异常、前列腺异常的检出率随着年龄的增长而增加(P<0.05). 表明慢性非传染性疾病已成为影响教职工健康的首要危险因素. 因此, 应倡导科学的生活方式, 积极进行健康体检, 建立健康管理档案, 并进一步强化健康管理理念和教职工的健康意识, 尽可能改善教职工的健康状况.     

对虾白斑综合征病毒VP28免疫后克氏原螯虾血清酶活性及中和活性

利用原核表达的对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)结构蛋白VP28口服免疫克氏原螯虾,以酚氧化酶和溶菌酶指标来监测机体的免疫反应,并检测免疫后的螯虾血清对WSSV的中和能力.结果表明VP28能有效激起机体的免疫反应,酚氧化酶活性始终处于较低的水平,低于GST对照组和健康组,溶菌酶活性则高于GST对照组和健康组.中和实验表明免疫血清具有一定的中和活性,但其保护作用不是通过VP28进入体内与细胞受体结合,来阻止病毒进入,而可能是通过病毒蛋白进入虾体后刺激机体产生或分泌某种中和因子,从而阻止病毒进入细胞或进入细胞后阻止进一步传播.     

酿酒酵母rDNA的结构及其介导整合影响因素研究进展

为提高外源基因在酿酒酵母基因组中的拷贝数,将rDNA重复序列作为整合载体同源重组位点的研究日益被关注.本文介绍了酿酒酵母rDNA组成元件的结构,综述了以rDNA重复序列作为同源重组位点的研究进展.分析表明,hot1片段和一些蛋白因子(Fob1,RAD52和MRX,Sir2p,Sgs1和Mus81等)对rDNA单元的拷贝数目有调控作用,Smc5-Smc6复合体、RAD52的SUMO化和Mms21对rDNA的同源重组严格调控,对其稳定性有重要影响.以rDNA介导整合的外源基因在酿酒酵母细胞有丝分裂中的稳定性与整合位点在rDNA单元中的位置和性质以及整合载体的大小有重要关系.根据酿酒酵母较易发生同源重组的特点,使用rDNA重复序列作为整合载体同源重组位点可以通过提高外源基因在酿酒酵母基因组中拷贝数使外源基因在细胞中获得高效稳定表达.     

大蒜素对人卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖与凋亡的影响及机制

探讨大蒜素(DT)对人上皮性卵巢癌SKOV-3/DDP细胞的增殖抑制及诱导其细胞凋亡的分子机制。用人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:①正常对照组;②DT组:于培养基中加入DT(终浓度分别为5、10、20、40μg·mL-1)分别作用细胞24、48和72h;③顺铂(DDP)组(5μg·mL-1);④DT+DDP组(20μg·mL-1 DT和5μg·mL-1 DDP)。MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测基因bax、bcl-2的mRNA和蛋白表达。与正常对照组比较,DT组SKOV-3/DDP细胞增殖抑制率与凋亡率均有显著的增加(P0.05),且作用呈剂量和时间依赖性,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调(P0.05);与DT或DDP组比较,DDP+DT组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P0.05),且Bax mRNA及蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调的程度大于单用组(P0.05)。大蒜素对SKOV-3/DDP细胞有显著的抑制增殖和促凋亡的作用,增加SKOV-3/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与大蒜素调控Bax/Bcl-2蛋白表达有关。     

阿尔茨海默氏病大鼠模型的建立及行为学评价

探讨了采用寡聚型β-淀粉样蛋白（寡聚型Aβ）建立早期阿尔茨海默病（AD）大鼠模型的可能性.实验方法为给SD大鼠双侧海马CA1区定向注射寡聚型Aβ（模型组）或生理盐水（对照组）,或不做任何处理（正常组）,分别在第2周和第4周应用Morris水迷宫实验测试其学习记忆能力和评价记忆能力障碍程度.研究结果表明：模型组大鼠的定位航行试验的逃避潜伏期明显比对照组和正常组的延长（P〈0.01）,空间探索试验的穿越平台次数也明显减少（P〈0.05）.认为向大鼠双侧海马CA1区定向注射寡聚型Aβ可成功建立早期AD模型,并在短期内模拟AD的神经元损伤和学习记忆功能障碍等行为学特征.     

肠道微生态失调对小鼠海马星形胶质细胞的影响

精神分裂症是一种多病因的精神疾病。流行病学研究表明,肠道微生物与精神分裂症发生有关。繁育了精神分裂症易感基因Nrg1基因敲除(Nrg1-/-)小鼠,用抗生素破坏野生型和(Nrg1-/-)小鼠的肠道微生物系统,通过观察肠道微生态失调对小鼠大脑海马区星形胶质细胞的影响,来研究肠道微生态与精神分裂症发生的关系。将20d的C57BL/6雄性小鼠随机分成4组:对照组、肠道微生态失调组、易感基因Nrg1/敲除组、肠道微生态失调与易感基因互作组,每组12只。处理30d后,采用免疫荧光技术定量分析各组小鼠大脑海马区星形胶质细胞的分布与形态。结果显示,肠道微生态失调和敲除易感基因Nrg1都能激活星形胶质细胞,细胞膨大（P<0.05）,分支增多（P<0.01）。在一定程度上,肠道微生态失调与易感基因Nrg1交互作用加剧星形胶质细胞的活化（P<0.05）。     

利用PCR-RFLP技术分析拟穴青蟹抗菌肽基因SCY2的SNP位点

本研究根据公布的锯缘青蟹SCY2基因序列设计引物SCY2-RFLPs和SCY2-RFLPa,利用PCR-RFLP技术分析了5个地理群体（宁德、汕头、万宁、东方、三亚）共计148个拟穴青蟹SCY2基因的多态性.结果表明,所扩增的SCY2基因片段含有2个StuⅠ内切酶识别位点,位于第一外显子的位点没有多态性,位于第一内含子的位点存在多态性.在148个个体中共检测到AA和AB两种基因型,等位基因B的出现频率非常低,只在三亚群体的1个个体中检测到,而在其他4个群体中均未检测到,其等位基因频率为0.003 4.序列分析结果表明,扩增片段长度为1 016 bp,包含部分5′非翻译区（282 bp）、第一外显子（131 bp）和部分第一内含子（603 bp）.AA基因型表现为3条带（从大到小依次为509,356,151 bp）,AB基因型表现为4条带（从大到小依次为660,509,356,151bp）.B等位基因是由于867 bp处发生了C→G的单碱基突变导致StuⅠ内切酶失去了1个识别位点而形成的.     

血栓性脑梗死患者血浆D二聚体、组织因子及内皮素的变化

目的 :探讨血栓性脑梗死患者血浆D二聚体 (D Dimer)、组织因子 (TF)、内皮素 (ET)水平的变化及其意义 .方法 :用双夹心ELISA法与均相竞争法检测 5 4例脑梗死患者血浆D Dimer、TF及ET水平 ,并与正常对照组比较 .结果 :脑梗死组急性期D Dimer、TF、ET水平均高于缓解期及正常对照组 (P <0 .0 1) ;缓解期D Dimer、TF、ET水平与正常对照组比较 ,其差异的显著意义分别为P <0 .0 1、P <0 .0 5及P >0 .0 5 ;与恢复期比较前二者差异均有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,而后者差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;恢复期D Dimer、TF及ET水平与正常对照组均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :ET是脑梗死急性期及预后评价的敏感指标 .同时检测血浆D Dimer、TF及ET水平变化可能对研究血栓性脑梗死的发病及作用机制具有意义     

血清Meprin A联合NT-proBNP对川崎病伴冠状动脉损害预测价值的研究

为了探讨血清Meprin A联合NT-proBNP对川崎病(KD)伴冠状动脉损害(CAL)的预测价值,选取宁波市妇女儿童医院住院KD患儿334例为实验组, 同期匹配的上呼吸道感染患儿201例为对照组, 实验组依据超生心动图结果分为冠状动脉损害组(CAL组n=64例)与无冠状动脉损害组(NCAL组n=270例), 所有KD患儿在急性期与恢复期分别检测血清Meprin A、NT-proBNP等相关实验室指标, 运用Logistic回归方程拟合Meprin A及NT-proBNP的联合诊断模型, 并绘制受试者工作特征曲线(ROC), 用DeLong检验两组之间曲线下面积. 结果发现: KD患儿急性期血清Meprin A、NT-proBNP水平均显著高于缓解期及对照组, 差异有统计学意义(P<0.001); CAL组患儿血清Meprin A、NT-proBNP水平均高于NCAL组(P<0.001); Spearman相关性分析显示KD患儿急性期血清Meprin A与NT-proBNP、CRP、ESR之间呈正相关性; ROC曲线分析当血清Meprin A>7.7ng?mL-1时, 预测KD患儿伴CAL的灵敏度为84.37%, 特异度为67.04%, 曲线下面积为0.809; NT-proBNP>966ng?L-1预测KD患儿伴CAL的灵敏度为84.37%, 特异度为79.63%, 曲线下面积为0.883; 联合检测诊断KD伴CAL的预测值>0.134, 灵敏度及特异度分别为75.00%、92.22%, 曲线下面积为0.874. DeLong检验表明二者联合检测及血清NT-proBNP诊断KD伴CAL的ROC曲线下面积均大于血清Meprin A, 差异有统计学意义, 而联合检测特异度为92.22%. 因此, Meprin A、NT-proBNP可能参与KD的致病过程, 且与KD伴冠状动脉损害密切相关, 可用于KD伴冠状动脉损害的辅助诊断. 二者联合检测的诊断特异度均高于单一检测, 可为其早期诊断提供可靠证据.     

VP-16诱导的鼻咽癌细胞亚系多药耐受表型的研究

经VP-16 大剂量短暂冲击加递增低浓度诱导方法建立了鼻咽癌耐药细胞亚系LCE/VP.用RT-PCR和FCM 免疫荧光法检测了耐药基因MRP和m dr1 在m RNA 水平和蛋白质水平的表达,并用MTT 法测定了LCE/VP对9 种化疗药物的敏感试验. 结果发现LCE/VP细胞MRP和m dr1 在m RNA水平均有表达,且前者明显高于后者,蛋白质水平的表达情况与m RNA 水平相一致;LCE/VP对9 种化疗药物中的6 种药物敏感程度均有不同倍数的增加. 这表明LCE/VP呈典型的MDR表型,并有耐药基因MRP和m dr1 的共表达,其中MRP起主要作用     

p16蛋白对B型流感病毒诱导HeLa细胞凋亡的影响

以流感病毒 B/沪防 93- 1株感染 He L a细胞 ,通过 Hoechst332 5 8荧光染色、琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡 ,并用免疫组化技术测定 p16蛋白的表达 ,探讨 p16蛋白表达对 He L a细胞凋亡的影响 .结果表明 ,B型流感病毒感染 He L a细胞可诱导其凋亡 ,感染 2 4h后 ,细胞凋亡数达 84.5 % ;He L a细胞凋亡伴随 p16蛋白的表达 ,2 4h达高峰 ,阳性率为 49.2 3± 1.70 .研究结果提示 ,B型流感病毒感染诱导 He L a细胞凋亡过程与 p16基因激活相关 ,p16蛋白可能是介导流感病毒诱导细胞凋亡的另一重要途径 .     

转录因子Skn-1a激活人乳头瘤病毒18 E6基因表达的分析

用脂质体介导真核表达质粒pcDNA3-skn-1a转染Hela细胞,实时定量PCR检测HPV18 E6基因的表达量,以探讨转录因子Skn-1a对HPV18 E6基因表达的调控.结果显示Skn-1a能够显著激活HPV18 E6基因表达,为高发宫颈癌E6基因调控的分子机理探讨提供理论依据.     

F-对小白鼠红血细胞代谢影响的微量热法研究

用LKB2277生物活性检测系统研究了用含不同量NaF饮水喂养的小白鼠红血细胞的代谢.实验结果表明,其代谢产热曲线形状相似,单个细胞发热功率和平均产热150×10-6g@mL-1组＞正常组＞50×10-6g@mL-1组;产热曲线测定完毕后的样品ATP浓度分析表明,系统中的ATP浓度随饮水中NaF浓度增加而减小,以正常组为最大.从理论上对上述实验结果进行了探讨.     

雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及其机制的研究

探讨雷公藤红素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用及其机制.采用台盼蓝染色法、透射电镜和流式细胞术,分别检测不同浓度和作用时间下,雷公藤红素诱导HL-60细胞凋亡以及对细胞Fas、FasL和NF-κBP65表达的影响.结果表明:0.5～2.5 μmol·L-1浓度雷公藤红素作用24 h,HL-60细胞凋亡率均明显高于不加药物的对照组(P<0.05).当雷公藤红素浓度为1.5 μmol·L-1时,细胞凋亡率最高并呈时间依赖效应.雷公藤红素作用的HL-60细胞,可呈现典型的细胞凋亡形态学改变.1.5 μmol·L-1雷公藤红素可明显提高Fas和FasL阳性HL-60细胞百分率(P<0.05),但抑制细胞NF-κBP65的表达(P<0.05).从而得出结论:雷公藤红素可有效地诱导HL-60细胞凋亡,其机制与雷公藤红素可上调Fas、FasL基因及下调NF-κB基因表达有关.