石杉碱甲类拟物的合成及药理研究1: (±)-14-氟石杉碱甲

用两种方法合成了(±)-14-氟石杉碱甲(6), 并测定了其抑制乙酰胆碱酯酶的生物活性。其抑制活性是(-)-石杉碱甲(1)的1/62。     

石杉碱甲类拟物的合成及药理研究1: (±)-14-氟石杉碱甲

用两种方法合成了(±)-14-氟石杉碱甲(6), 并测定了其抑制乙酰胆碱酯酶的生物活性。其抑制活性是(-)-石杉碱甲(1)的1/62。     

石杉碱甲-E2020拼合物的合成及药理研究

合成了石杉碱甲-E2020的拼合物(1),并测定了1和中间产物10和11抑制乙酰胆碱酯酶的生物活性,它们的活性均低于E2020。对E2020和其中活性最高的10的8个异构体分别进行了构象分析及与TcAChE分子对接研究,结果表明,10的各异构体中只有RRZ型与AChE的结合能比E2020高,其它异构体的结合能均远小于E2020,这可能是10的活性比E2020低的原因。对异构体RRZ还进行了与TcAChE作用方式的研究,对接结果和结合能都说明10的RRZ型异构体的活性可能比E2020高。     

高效毛细管电泳法测定石杉碱甲片中石杉碱甲含量

提出了毛细管电泳法分离测定石杉碱甲片中石杉碱甲含量的方法。以pH为4.6的乙酸盐溶液为电解质溶液,运行电压13kV,于波长310nm处进行紫外检测。石杉碱甲的质量浓度在5.0～60mg.L-1范围内与峰面积呈线性关系。采用该方法对石杉碱甲片样品中石杉碱甲的浓度进行了测定,所得加标回收率在97.8%～98.7%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)在0.53%～0.85%之间。     

石杉碱甲-AChE复合物中石杉碱甲的结构特征: 量子化学研究

在运用量子化学从头计算方法(HF/4-31G)结合点电荷模型方法对AChE-HupA复合物活性位点的410个原子和1929个点电荷进行理论计算的基础上, 比较了石杉碱甲分子在形成复合物前后的结构变化特征。发现复合物中石杉碱甲分子构象并非能量最低构象, 它的能量比HF/4-31G全优化得到的构象的能量高91.8kj/mol。和单分子状态相比, 形成复合物后季铵基和内酰胺基的N-H, C=O键的键长变长、键强减弱, 其总原子净电荷也发生了明显的变化。且这些基团的空间取向都有不同程度的改变, C(8)-N(21)键的旋转达20ⅲ。这些信息将有益于设计新的AChE抑制剂。     

石杉碱甲的合成及结构改造研究进展*

石杉碱甲是一高效、高选择性乙酰胆碱酯酶抑制剂, 由于其独特的药理特征和低毒性, 引起了人们的广泛注意。本文系统地综述了石杉碱甲的全合成方法、结构改造工作及构效关系的研究。     

石墨烯-壳聚糖修饰电极构建石杉碱甲免疫传感器

通过将石杉碱甲抗体(anti-HupA)固定到由还原态氧化石墨烯/壳聚糖(r GO/CS)复合膜修饰的玻碳电极表面,制备高灵敏度的电化学免疫传感器,利用石杉碱甲抗原抗体特异性反应可阻断[Fe(CN)6]3-/4-氧化还原反应体系电子转移的特点,建立了检测石杉碱甲(Hup A)的电化学免疫传感器分析方法。采用循环伏安法(CV)、交流阻抗法(EIS)及差示脉冲伏安法(DPV)研究Hup A在[Fe(CN)6]3-/4-氧化还原体系的电化学行为,利用DPV法测定Hup A浓度。在优化条件下,15 mmol/L K3[Fe(CN)6]+0. 1 mol/L KCl+0. 1 mol/L PBS(pH 6. 5)测试体系中,Hup A浓度的对数与峰电流差值在1. 0×10-13~1. 0×10-10mol/L范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)为1. 000 0,检出限为3. 0×10-14mol/L,回收率为99. 4%~102%。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单、绿色环保等特点,可用于中药材中石杉碱甲浓度的快速检测。     

评估石杉碱甲杂合体衍生物作为AD症药物活性顺序的简单方法

为了合理化设计、指导具有高活性、低毒性的石杉碱甲杂合体(Huprine X)衍生物的合成, 建立了一个计算结合自由能的新方案, 以实现对该类衍生物活性排列顺序的预测. 该结合自由能由三部分组成: 抑制剂和靶酶的相互作用能; 活性位点残基在结合前后的构象绝对自由能的变化; 抑制剂从稳定构象变为活性构象的自由能增加值. 通过计算已合成的14个杂合体衍生物的结合自由能, 结果显示理论值和实验测定的生物活性值有很好的等级相关性, 其斯皮尔曼相关系数为0.85, 证明了该方法的可行性.     

石杉碱甲引湿性的研究

分析和比较石杉碱甲干燥前和干燥后的引湿性。使用动态水分吸附分析法（Dynamic Vapor Sorption,DVS）对石杉碱甲的引湿性进行研究。采用卡式水分测定方法测定了石杉碱甲干燥前和干燥后的水分。石杉碱甲干燥前与干燥后均有引湿性,导致含量结果测定存在误差。DVS结果显示引湿增重7%即可达到平衡。将样品置于相对湿度75%、温度15℃恒温恒湿箱中15天引湿后测得水分为7.30%,经DVS考察不再引湿,能准确地测定石杉碱甲的含量。并用高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量的均一性。     

石杉碱甲分子印迹聚合物的制备、表征及其吸附性能

以硅胶为牺牲载体,石杉碱甲为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,二乙烯基苯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,首次制备了石杉碱甲分子印迹聚合物,并用红外光谱、扫描电子显微镜和热重分析研究了印迹聚合物的结构特征,用静态吸附法和Scatchard分析法研究了印迹聚合物的识别效能和表面位点分布特征。 结果表明,石杉碱甲印迹聚合物对模板分子具有较好的选择吸附性能,选择系数为1.399。Scatchard分析表明,印迹聚合物基体中主要存有两类吸附位点,对高亲和位点：平衡离解常数Kd1=0.776 g/L,最大表观结合量Qmax1=0.213 mg/g;对低亲和位点：平衡离解常数Kd2=0.169 g/L,最大表观结合量Qmax2=0.832 mg/g。 当该聚合物用于微固相萃取蛇足石杉粗提液中的石杉碱甲时,石杉碱甲回收率为93.5%,显示了较好的富集效果。     

高效液相色谱法定量测定中药千层塔提取物中的石杉碱甲

建立了高效液相色谱快速定量测定中药千层塔提取物中石杉碱甲含量的分析方法。千层塔提取物经甲醇/水/甲酸(10/90/0.2, v/v/v)提取并定容后,过滤膜后直接分析。色谱分离选用XCharge C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm),以水(含0.1%三氟乙酸)和乙腈(含0.09%三氟乙酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为2 mL/min,于310 nm波长下检测,可在10 min内完成石杉碱甲的快速分离分析。结果表明,石杉碱甲在2.12～106 mg/L范围内线性关系良好(相关系数为0.9999);平均加标回收率为102.34%,相对标准偏差(RSD)为0.46%;日内及日间精密度均小于2%,满足定量要求。该方法简便、快速,结果可靠,重现性好,可作为千层塔提取物质量评价的依据。     

DNA-纳米金探针法检测蛇足石杉内生真菌发酵液中石杉碱甲的含量

本研究将DNA、酶和抗体修饰于纳米金颗粒表面制备纳米金探针,建立了DNA-纳米金探针检测石杉碱甲(HupA)的方法。以磁珠作为载体,将石杉碱甲完全抗原(HupA-OVA)标记在磁珠上,采用竞争免疫分析模式,发现HupA浓度在0.008～16 ng/mL范围内,抑制率(I)与HupA浓度的对数值(lgc)呈良好的线性关系,线性方程为I=0.3006 lgc+0.6142,线性相关系数为0.9952,检测限为19.41 pg/mL。应用该方法对蛇足石杉内生真菌发酵液中HupA进行了检测,加标回收率为99.33%～103.73%,相对标准偏差(RSD,n=3)为1.70%～4.67%。该方法灵敏度高、特异性强、操作简单,可用于蛇足石杉内生真菌发酵液中HupA含量的检测。     

抗早老性痴呆症天然产物石杉碱甲的红外光谱与简正分析——量子化学密度函数理论(DFT)研究

运用量子化学密度函数理论B3LYP/ 6 31G 方法计算了石杉碱甲的电子结构和红外光谱 ,得到了与实验结果的谱图特征基本一致的红外振动光谱 .通过对振动模式的分析 ,指认了 1 0 2个振动模式中分离得比较完全的 45个振动模式 ,结果表明其吡啶酮CO伸缩振动的红外活性最强 ,吡啶酮NH键的伸缩振动的频率最高 .涉及可形成氢键的石杉碱甲氨基氢及吡啶酮内酰胺氢的红外振动吸收的理论值与实验值差异较大 ,其原因是在晶体中存在分子间氢键 ,这不仅改变了这些氢在空间的取向 ,而且也改变了键的力学性质 ,导致红外振动吸收频率发生改变     

6-羟基石松碱与乙酰胆碱酯酶的相互作用

目前治疗阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)的主要药物为乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI).为探讨石松碱类化合物对AChE的抑制作用,以6-羟基石松碱(6-hydroxylycopodine,HLD)为对象,应用核磁共振、分子对接、酶活性测定、分子动力学模拟及自由能分析,研究了HLD与AChE的相互作用.研究发现6-羟基石松碱对乙酰胆碱酯酶具有混合型抑制作用,其结合作用主要来自氢键和范德华作用.     

4-二甲氨基吡啶手性类似物2-[2-(4-二甲氨基吡啶基)]环己醇的合成

从2-[2-(4-氯吡啶基)]环己酮出发,经NaBH4还原,然后再与二甲胺水溶液反应得到消旋的2-[2-(4-二甲氨基吡啶基)]环己醇,采用(L)-DTTA(二对甲基苯甲酰基酒石酸)进行拆分得到对映纯的路易斯碱催化剂4-二甲氨基吡啶类似物(1R,2S)-2-[2-(4-二甲氨基吡啶基)]环己醇.     

查尔酮Mannich碱衍生物的合成与AChE抑制活性研究

以柚皮苷为原料,经酸催化水解、O-甲基化或O-异戊烯基化反应、碱催化的开环反应合成了天然查尔酮卡瓦胡椒素A(1)和查尔酮异戊烯基醚衍生物2;然后以查尔酮1和2为底物,分别通过Mannich反应对其3'位进行了胺甲基化修饰,合成了14个未见文献报道的新型查尔酮Mannich碱衍生物3~16.所合成化合物的结构已由核磁共振谱、红外光谱和质谱所证实,并对所合成的查尔酮及其Mannich碱衍生物进行了乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性测试,结果发现查尔酮Mannich碱衍生物3~5,9具有良好的AChE抑制活性.     

新型含取代哌嗪的5-(吡啶-3-基)-1,2,4-三唑Mannich碱和双Mannich碱的合成及生物活性

根据药物分子设计的活性基团组合原理,通过在1,2,4-三唑环的5位引入吡啶基,同时在4位芳基亚甲氨基的苯环上引入氟或三氟甲基,设计合成了一系列含氟、吡啶和哌嗪基团的1,2,4-三唑Mannich碱和双Mannich碱类化合物.通过核磁共振氢谱(~1H NMR)、碳谱(~(13)C NMR)和元素分析确证了目标化合物的结构.生物活性测试结果表明,部分化合物对油菜具有一定的除草活性;化合物2a,2d和2f(50 mg/L)对苹果轮纹病菌表现出较好的抑制活性,与对照药三唑酮活性相当;化合物2a,2b,2d和2i(180 mg/L)对酮醇酸还原异构酶(KARI酶)表现出了显著的离体抑制活性(抑制率51.7%~88.7%).     

基于AChE和BuChE靶标的查尔酮衍生物的合成及生物活性研究

为了探寻治疗阿尔茨海默症（AD）的潜在双靶标活性化合物,本研究设计合成了5个新的查尔酮衍生物,并对它们的生物活性进行了评价。酶活性测定结果表明,化合物C1～C5对乙酰胆碱酯酶（AChE）和丁酰胆碱酯酶（BuChE）均具有显著的抑制活性。其中,化合物C4对AChE和BuChE有明显的抑制作用,IC₅₀分别为6.00和2.63μmol/L。细胞实验表明,化合物C4对Glu、H₂O₂和Aβ_1-42诱导的神经母细胞瘤SH-SY5Y损伤具有显著的保护作用,且呈剂量依赖性。Y迷宫和Morris水迷宫研究表明,C4能改善东莨菪碱诱导的小鼠的认知障碍和背景记忆能力,且对小鼠自主活动无影响,具有毒副作用小的优点。此外,C4能显著降低小鼠皮层总胆碱酯酶和丙二醛含量,提高谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶含量。分子模拟显示,化合物C4能够结合AChE和BuChE的催化活性位点和外周阴离子位点。因此,化合物C4可能是一种很有前途的双靶向活性分子,值得做进一步的结构优化和活性评价,以期发现更安全高效的AD治疗药物。