中药配伍的统-分析方法研究I.单味药与复方的分离、特征组分的识别以及指纹对比

中药配伍是传统中药理论之一,其物质分析是中药基础理论现代化研究的重点.中药配伍的特点是物质组分复杂、多变和整体性强,因此单一或少量组分的分析结果很难表征药物的性质.采用反相液相色谱模式,以黄芪、当归以及自制的"当归补血汤”的分离、特征组分识别以及指纹对比的实例分析,介绍了中药配伍分析的多模式多柱色谱系统以及统一分析方法的研究思路.     

中药配伍的统一分析方法研究 Ⅱ.拟合定量

 配伍过程中物质组分的浓度变化需要进行定量 ,但复方中大量的重叠色谱峰影响定量的准确性。而在色谱理论基础上发展起来的拟合定量技术 ,可以对重叠色谱峰进行拟合定量。在统一分离和复方中单味药的特征物质组分得到识别的基础上 ,以黄芪、当归用量变化时 ,复方“当归补血汤”中黄芪、当归的特征物质组分的拟合定量为实例 ,介绍了中药配伍过程中定量的手段和研究方法     

联用色谱及多组分光谱相关色谱用于当归补血汤与单味药成分的比较研究

摘要利用HPLC-DAD提供的二维化学数据信息, 通过多组分光谱相关色谱方法及化学计量学分辨技术, 对相同试验条件下所得的当归补血汤及其单味药的色谱组分进行了比较和归属分析. 结果表明， 在当归补血汤色谱响应值较高的21个色谱峰中, 8个色谱峰的组分来自当归, 6个色谱峰的组分来自黄芪, 7个色谱峰的组分同时来源于当归和黄芪. 其中一些色谱峰簇中的其它组分发生了消长变化， 既有新物质的产生, 又有原有化学成分的消失， 说明中药复方配伍的药效物质基础不仅是各单味药化学成分的总和, 还有单味药在复方配伍过程中各种成分的相互作用. 本方法为中药复方与单味药化学组分的比较及归属分析, 尤其对重叠色谱峰簇的组分比较分析提供了方便、 快捷及可行的研究方法.     

液相色谱指纹图谱在当归、黄芪及其复方有效成分分析中的应用

将液相色谱指纹图谱与正辛醇-水分配体系模拟中药在人体内的吸收情况相结合分析中药活性成分,分析比较了当归、黄芪单煎液及合煎液在不同靶位酸度下化学成分种类、含量的变化情况,探讨了配伍及酸度变化对中药中各成分的形态分布及在人体中吸收情况的影响.发现不同靶位环境的酸度及不同配伍对中药中的有效物质组分、含量及各组分的吸收都有很大的影响.     

当归特征组分的识别与定量对比

 将高效液相色谱模式 /二极管阵列检测与自编紫外光谱库管理软件结合 ,用液相色谱 /紫外光谱以及特征参数研究同种当归多个特征组分的识别及快速定量对比。色谱 /光谱及其特征参数共同表达同种当归 2 3个特征组分 ;探讨定量对比的关键技术 ;定量比较两个同种当归相同组分的浓度差异。多指标表达当归特征组分 ,可用于它们的识别 ;定量手段的建立 ,可对比当归特征组分定量结果的差异性。不用化学对照品 ,便能识别和定量比较当归样品中的多组分。方法简便易行、快速 ,结果的代表性强、重现性良好。     

多羟基化合物键合亲水色谱固定相的制备及其分离性能

用硅胶与氨丙基三甲氧基硅烷反应,再与δ-葡萄糖酸内酯反应,制备了一种多羟基化合物键合的新型亲水色谱固定相。以水-有机溶剂(乙醇、乙腈、四氢呋喃)为流动相,通过改变流动相中有机溶剂的种类及浓度、缓冲盐浓度和柱温,考察了该固定相对6种强极性中药组分的保留行为和保留机理。当水的比例在0～40%(v/v)范围时,溶质的保留随着流动相中水的比例的增大而减小,属于典型的亲水色谱分离模式;而当流动相中水的比例在0～100%(v/v)范围内变化时,溶质的保留随着水的比例变化呈“U”形曲线,属于亲水色谱和反相色谱的混合保留机理。缓冲盐的浓度和pH效应说明,所选用的中药组分与所制备的固定相间还存在弱的静电作用。该固定相对6种中药组分以及丹参注射液具有良好的分离性能,表明其在强极性中药有效成分的分离及其他强极性物质的分离分析中具有一定的应用前景。     

高效液相色谱法研究黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍时成分含量的变化

为了研究中药配伍过程中是否发生化学反应,先从单味药材中提取不同的组分或大类化合物,然后对其进行配伍，用高效液相色谱法（HPLC）测定其在配伍前后的成分变化。实验采用HPLC对黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍后的各色谱峰进行检测和分析，结果表明黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍后色谱峰具有加和性,各成分的相对峰面积未见明显变化,且未见新的色谱峰产生，说明黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍后没有发生化学反应。     

一种应用斑马鱼毒性和代谢同步进程分析中药毒性作用新方法

本发明涉及一种用模式生物斑马鱼毒性评价和斑马鱼代谢同步进程法分析中药毒性作用的新方法,即用斑马鱼评价中药成分、组分或提取物的毒性过程中,同步动态分析代谢产物,评价中药及中药配伍毒性作用的同时,分析毒性的产生与成分变化的相关性,可发现中药中毒及配伍减毒的相关物质或原因。本发明克服现有斑马鱼毒性评价仅限于发现测试药对鱼形态、行为、死亡等毒性作用而未能同步分析测试药成分动态变化的缺陷,是一种操作方便、成本低、样品用量少、劳动强度低,且仅需在一般实验室就可完成的分析方法,可简单高效评价中药毒性,同时发现代谢成分变化及致毒相关物质,亦可揭示中药配伍减毒的作用机制。     

多组分光谱相关色谱及其在中药色谱指纺图谱分析中的应用

基于正交投影理论和相关色谱方法提出多组分光色谱方法提出多组分光谱相关 色谱。为克服联用色谱仪器的不等性噪声影响，采用目标组分投影前后的光谱夹角 余弦判据，判断不同的中药色谱指纹图谱的相关组分色谱峰簇。该方法为中药指纹 图谱的数据处理、合理评价以及中药谱效学的基本理论研究提供一种实用的工具。     

多组分光谱相关色谱及其在中药色谱指纺图谱分析中的应用

基于正交投影理论和相关色谱方法提出多组分光色谱方法提出多组分光谱相关 色谱。为克服联用色谱仪器的不等性噪声影响，采用目标组分投影前后的光谱夹角 余弦判据，判断不同的中药色谱指纹图谱的相关组分色谱峰簇。该方法为中药指纹 图谱的数据处理、合理评价以及中药谱效学的基本理论研究提供一种实用的工具。     

现代分析技术在中药药效成分检测中的应用进展

介绍近10年来现代分析技术在中药药效成分检出中的研究进展情况，为中药药效基础研究提供现代分析技术的方法与思路。以高效液相色谱、气相色谱为代表的色谱分析技术具有选择性好、灵敏度高、分离效能优等特点，在中药药效成分检出中应用甚为广泛，但是由于缺少物质结构分析功能，检出的中药药效成分中有很多未知物质；以高效液相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法为代表的色谱-质谱联用技术既可以实现对中药药效组分的检出，也可以对未知药效物质进行结构分析和确认，是未来中药药效成分检出的有效手段和必然趋势；光谱技术和核磁共振波谱技术具有定性和定量功能，同时也可以进行结构分析，但是同毛细管电泳法、高速逆流色谱法等现代分析技术一样，应用成果较少。     

固定化脂质体色谱研究中药复方的细胞膜通透性成分及其质量控制

提出了固定化脂质体色谱(immobilized liposome chromatography,ILC)研究中药复方的细胞膜通透性成分及其质量控制的方法。以当归补血汤及其组分为例,考察了它们在ILC色谱柱上的分离效果;当归补血汤水提取液和75％乙醇提取液在ILC色谱柱上各有8个保留峰,当归水提取液、甲醇提取液和75％乙醇提取液在ILC色谱柱上分别有3、6、9个保留峰,黄芪水提取液、甲醇提取液和75％乙醇提取液在ILC色谱柱上各有7个保留峰;建立了当归补血汤及其组分中阿魏酸和蒿本内酯的定量分析方法,当归补血汤水提取液和75％乙醇提取液中阿魏酸的含量分别为0．0743％和0．0688％,蒿本内酯的含量分别为0．0472％和0．457％,当归水提取液和75％乙醇提取液中阿魏酸的含量分别为0．0694％和0．0691％,蒿本内酯的含量分别为0．0781％和0．455％。     

正交投影用于多波长色谱重叠峰分析

 将正交投影分辨 (OPR)技术用于多波长色谱重叠峰分辨 ,当色谱峰中最大重叠度小于或等于波长数时 ,用这一方法能从多波长色谱重叠峰中获得完全真解。基于双波长色谱分析 ,提出了一种新的色谱重叠峰中背景校正、组分数和纯组分信号区确定以及各组分重叠情况的分析方法 ,即双波长特征信息分析 (DWCI)。该法被成功的用于三组分双峰和双组分单峰重叠色谱的分析。     

透析-高效液相色谱法在当归补血汤药效物质基础研究中的应用

将脂质体作为模拟生物膜,采用平衡透析与液相色谱联用技术,建立了一种研究中药成分与模拟生物具有相互作用的新方法。应用该方法对当归补血汤进行了分析,同时考察了模拟生物膜的浓度、pH值、缓冲系统和胆固醇的加入等因素对当归补血汤与模拟生物膜相互作用的影响。结果表明:当归补血汤中有7个组分与模拟生物膜相互作用明显;模拟生物膜的浓度影响最大,pH值对酸性组分阿魏酸的作用影响较大,其它因素的影响较小。该方法可用于预测药物在体内的吸收情况,进而研究中草药及复方的药效物质基础。     

FAAS法分析当归、黄芪及当归补血汤中金属元素的形态

采用正辛醇-水分配体系模拟中药水煎液在人体肠胃中的分配情况,应用火焰原子吸收光谱法测定了当归、黄芪及当归补血汤中锌、铁、锰、铜、镁、钙、镍7种金属元素在药材中的总含量,以及水煎液中各金属元素的水溶态、醇溶态含量,探讨了配伍和酸度对水煎液中金属元素含量的影响。实验结果表明,中药中金属元素的形态与中药成分、配伍情况及作用靶位(肠胃)的酸度有关,配伍及酸度对中药中金属元素的溶出率及水煎液中金属元素的形态影响较大。     

浓缩当归丸及当归片的HPLC指纹图谱质量初步评价

应用当归药材HPLC指纹图谱技术并结合共有峰相似度、主成分分析(PCA)、聚类分析(HCA)等化学计量学手段,对部分市售当归单味药成方制剂——浓缩当归丸和当归片进行了质量一致性和稳定性,以及与当归药材相关性的初步评价。研究结果表明,浓缩当归丸与当归片之间因制备工艺不同,其化学物质的组成与含量具有明显的差异;不同厂家生产的同类药品具有比较一致的整体色谱形貌,浓缩当归丸与当归药材图谱的相似度略高于当归片,当归片的质量稳定性和一致性略优于浓缩当归丸;同厂家不同批次同种药品的质量差异较小。此外,通过浓缩当归丸和当归片与当归药材色谱指纹图谱的对比分析,进一步探究了当归药材色谱指纹图谱中可能的药效物质信息。     

反相高效液相色谱法测定关木通及配伍中药中马兜铃酸A

为了全面、系统、深入地研究有毒中药关木通,采用乙腈-酸水系统,用反相高效液相色谱法分析关木通及其配伍中药中马兜铃酸A的含量,与文献方法相比,缩短了测定时间,并从总体上降低了分析成本.色谱条件是C18柱,流速1 mL/min.检测波长250 nm.流动相乙腈(水+冰醋酸)=5842.该法精密度高,稳定性好,线性范围为0.07～0.42 μg,回归方程为Y=5.0×106X-32827,相关系数r=0.9999,加样回收率为99.12％.实验结果表明,关木通与生地、当归、大黄、生甘草等中药配伍后,AAⅠ含量均有不同程度的降低,其中以关木通配伍生地组和大黄组最为明显,分别降低了57％和56％.     

人工蚕蛹虫草和冬虫夏草水溶性成分的相对归属分析

为对相近中药的化学指纹图谱进行比较研究,充分利用联用色谱所得的光谱、色谱信息与光谱相关色谱方法,分析了蚕蛹虫草和冬虫夏草的水溶性成分的异同,实现了蚕蛹虫草和冬虫夏草水溶性成分化学指纹图谱中相应化学组分的归属分析。其中,蚕蛹虫草和冬虫夏草有5个共有组分,分别有4个和6个相异组分。实验表明：该方法可对复杂中药成分及其指纹图谱进行快速比较分析。     

二维液相色谱-质谱联用分离中药复方葛根芩连汤中的有效成分

建立了二维液相色谱-质谱联用方法分离中药复方葛根芩连汤的成分。以CN柱作第一维色谱柱,水和甲醇梯度洗脱分离;以ODS柱作第二维色谱柱,20 mmol/L乙酸铵缓冲液和乙腈梯度洗脱分离;质谱检测采用电喷雾电离/大气压化学电离（ESI/APCI）复合离子源,正负离子扫描。实验结果表明搭建的二维液相色谱的峰容量显著高于一维色谱,分离效率得到了明显的提高。以第一维色谱的第3个流分为例,对其二维分离进行仔细分析,发现质谱比紫外光谱检测到的组分多,质谱中采用负离子模式比正离子模式检测到的组分多。表明搭建的二维液相色谱-质谱分离平台分离效果好,提高了液相色谱的峰容量和分离效率。该方法操作简便,可作为中药等复杂体系分离分析的有效手段。     

生物色谱用于当归中活性成分筛选及分离研究

应用分子生物色谱技术研究了筛选和分离当归中的活性成分。以甲基丙烯酸缩水甘油酯为功能单体,通过原位聚合得到了整体柱基质,用二乙胺活化后,以吸附蛋白的方法得到了以牛血清白蛋白(BSA)为固定相的分子生物色谱柱。当归样品经甲醇提取,0.45μm膜过滤后,以BSA分子生物色谱柱为分离柱,以含2%(体积分数)甲醇的Tris-盐酸缓冲溶液为流动相进行分离,用二极管阵列检测器检测。结果表明:活性组分在BSA上的保留机理是疏水作用、静电作用和特定的与空间结构相关的多种因素的共同作用结果。将BSA柱上的保留组分进行了气相色谱-质谱分析,鉴定了8种成分,包括当归中的主要可挥发性成分(藁本内酯)。