酵母双杂交筛选抑癌基因SuFu相互作用蛋白

以Hedgehog信号通路关键负调控因子Suppressor of Fused(SuFu)蛋白作为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统从人均一化cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白质,共获得160个阳性克隆,包括Hedgehog信号通路蛋白Gli3和一些肿瘤蛋白如乙醛脱氢酶1(ALDH1A1)、激酶、转运蛋白、转录因子等.通过免疫共沉淀和免疫细胞化学实验证实,SuFu与ALDH1A1发生相互作用,后者可能参与Hedgehog信号通路的调控.     

一种与HBx蛋白相互作用未知蛋白抗体的制备及其应用

本研究构建UK蛋白的原核表达载体pET28-UK，转化BL21宿主菌，经过IPTG诱导、表达、纯化，获取UK蛋白，制备抗原，免疫杭州大耳白兔．经过3次免疫后心脏采血，吸取血清作为抗体．经过ELISA和免疫荧光试验验证，陔抗体町以识别机体UK蛋白．本研究为深入阐明HBx与UK蛋白的相互作用的功能性试验，以及完全阐明UK蛋白在细胞内的功能奠定了基础．     

用酵母双杂交系统系统发现HaNPV衣壳蛋白与棉铃虫肌动蛋白间的相互作用

成功的构建了棉铃虫细胞（Hz-AM1)的cDNA文库（Ha-cDNA）,然后以棉铃虫核型多角体病毒衣壳蛋白VP39（HaNPV-VP39)作为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system),在棉铃虫细胞cDNA文库中钓到了VP39的相互作用因子基因,通过DNA测序和氨基酸序列分析表明,该基因为棉铃虫的肌动蛋白（actin)基因,本实验从一个侧面反映了VP39蛋白与棉铃虫肌动蛋白间的相互作用。     

HBV X蛋白与宿主APOBEC3G蛋白之间的相互作用

将原核重组质粒双酶切后释放的χ基因与真核表达载体连接，构建真核重组质粒pcDNA3.1-X，然后与真核重组质粒pcDNA3.1-APOBEC3G共转染HepG2细胞，提取蛋白进行免疫共沉淀并用Western blot分析结果。免疫共沉淀后，HA-APOBEC3G融合蛋白能够在抗HBx的免疫沉淀物中检测出来，在抗HA标签的免疫沉淀物中也能检测到HBx。揭示了这两种蛋白能在受体细胞内形成复合物。结果表明乙肝病毒X蛋白与APOBEC3G蛋白在细胞内能发生相互作用，提示APOBEC3G抗HBV作用可能与乙肝病毒X蛋白有关。     

研究蛋白质相互作用的新系统——酵母双杂交系统

自酵母双杂交系统创建以来,已经成为研究蛋白质相互作用的重要手段,被广泛用于各个生物学研究领域,揭示了大量未知蛋白质之间的相互作用. 近来,在经典的酵母双杂交系统基础上,又相继提出许多新的研究方法,如:三杂交系统,单杂交系统,逆向双杂交系统,SOS富集系统等等. 酵母双杂交及其衍生系统已经成功地运用于蛋白质之间,蛋白质与DNA、RNA、配体之间的相互作用的研究     

抗IgG-Fc蛋白ssDNA适配体的筛选与鉴定

传统的抗IgG-Fc单克隆抗体制作过程繁琐、耗时长且批间差异大,极大的限制了其应用。因此寻找一种抗IgG-Fc单克隆抗体的替代元件是十分必要的。本研究基于微孔板指数富集的配体系统进化技术（微孔板-selex）,设计了针对抗IgG-Fc蛋白ssDNA适配体的筛选方案。交替包被5种IgG单克隆抗体于酶标孔作为筛选靶分子,将从靶分子上洗脱的核酸适配体作为模板进行PCR扩增,生物素-链霉亲和素ELISA测定第3,7,13,14,16,18轮筛选获得ssDNA文库与内酰胺酶单克隆抗体的结合能力,并将第19轮筛选获得的ssDNA文库进行TA克隆验证、高通量测序。经过19轮筛选,得到69796条抗IgG-Fc蛋白的适配体,选取出现频率最高的ap-1（178次）、ap-2（129次）、ap-3（58次）体外合成并在其5,端标记生物素,经ELISA鉴定3条适配体分别与5种IgG单克隆抗体有着较强的结合能力,并与3%BSA几乎不结合。Ap-1结合能力最强,被认为是本次筛选得到最佳抗IgG-Fc蛋白核酸适配体。实验结果表明本文筛选获得抗IgG-Fc蛋白的核酸适配体,具有成为抗IgG单克隆抗体替代元件的潜力。     

一个新的调控人类细胞死亡基因的发现

ａｓｙ基因是最近发现的一个凋亡诱发基因［１］,但诱发细胞凋亡的机制仍不清楚为研究ａｓｙ基因诱发凋亡的机制,本文以ＡＳＹ为诱饵蛋白（Ｂａｉｔ）,采用酵母双杂交系统从人肺细胞系（ＷＩ３８）ｃＤＮＡ文库中筛选ＡＳＹ结合蛋白基因从１×１０６个共转化子中,分离鉴定了３个Ｈｉｓ＋ＬａｃＺ＋克隆,其中一个克隆的插入片段与Ｇｅｎｂａｎｋ全序列比较没有发现同源基因,推测为一个新基因,命名为ａｓｙ相互作用蛋白基因ａｓｙｉｐ（ａｓｙｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）ａｓｙｉｐ基因在人的各种组织中均组成性转…     

栀子苷与热处理大豆分离蛋白相互作用机理

为探究栀子苷与不同热处理大豆分离蛋白的相互作用的机理,以Zeta电位、粒径及微观样貌观察(SEM)为指标对栀子苷-热处理大豆分离蛋白复合物进行表征,并采用荧光光谱法探究栀子苷与不同热处理大豆分离蛋白之间的淬灭方式、结合位点数、结合作用力类型。结果表明,栀子苷会使热处理大豆分离蛋白的Zeta电位绝对值增大,粒径减小,且栀子苷与80℃热处理大豆分离蛋白的复合物Zeta电位绝对值最大,粒径最小;栀子苷与热处理大豆分离蛋白之间淬灭过程是自发的,机制为静态淬灭,相互作用类型为范德华力和氢键,并形成了结合位点数近似于1的复合物。     

拟南芥高盐耐受突变体的筛选与鉴定

采用floral dip方法，将雌激素诱导激活标签系统PER16ACT转入拟南芥中，最终获得了18000株T-DNA插入株系．通过挑取能够在250mmol／L NaCl条件下萌发的拟南芥突变体，从200000粒该突变体库T2代种子中筛选到一株高盐耐受性突变体hst1(highs salt tolerant 1)，进一步分析表明hst1在种子萌发阶段和幼苗生长阶段都对NaCl具有耐受性，在没有盐胁迫的条件下，hst1同野生型没有明显的区别。     

基于光谱学技术结合分子模拟研究芹菜素与大豆分离蛋白的相互作用

以大豆分离蛋白(SPI)与芹菜素(API)为研究对象,通过采用荧光光谱法、紫外-可见吸收光谱法和圆二色光谱法并结合分子模拟技术研究芹菜素与大豆分离蛋白之间的相互作用。荧光滴定结果表明,芹菜素对大豆分离蛋白的荧光有较强的猝灭作用,为静态猝灭机制。获得的热力学参数熵变与焓变均为负值,表明芹菜素与大豆分离蛋白间的相互作用力主要为氢键和范德华力。同步荧光实验表明,芹菜素与大豆分离蛋白结合导致酪氨酸残基周围微环境疏水性增加和色氨酸残基周围微环境极性增加。三维荧光光谱和圆二色光谱实验表明,芹菜素与大豆分离蛋白作用使得蛋白质多肽链部分伸展,蛋白质表面疏水性下降,巯基含量增加,进一步的分子模拟显示芹菜素分子分别插入到大豆分离蛋白的SPI-7s和SPI-11s的疏水空腔中,与LEU226,GLN77,THR75,HIS76,ASN74以及THR353,THR328,MET329,LEU354,ASP342,LYS113,THR358,LYS330等氨基酸残基发生相互作用,并与HIS76,ANS74以及ARG340,LYS330,THR358,THR328和SER339氨基酸残基形成氢键。     

过氧亚硝酸的细胞生物学效应及其分析方法研究进展

对过氧亚硝酸的细胞生物学效应做了简单阐述，全面回顾和总结了近年来用于过氧亚硝酸测定的各种分析方法，并对各种方法的优缺点及其适用范围进行了比较．过氧亚硝酸的相关研究已取得很大进展，但其在线准确检测仍存在一定困难．     

基于混沌细胞自动机的DWT域数字音频水印算法

主要提出了基于混沌细胞自动机的小波域数字音频水印算法.首先由Logistic混沌序列模型产生序列,其次产生的序列通过细胞自动机产生要嵌入的数字水印.同时将原始音频信号通过小波表变换,提取出其低频系数,并将水印信号嵌入其中.实验证明:由混沌细胞自动机产生的数字水印具有很好的掩蔽性和鲁棒性,在各种攻击下(包括白噪声、低通滤波、重量化、有色噪声等)仍然能够很好的检测出来.     

耐高温酿酒酵母的选育Ⅱ菌株的选育及产酒发酵特性初探

本文报道了用紫外线(ultra violet raps)、氯化今里(LiCI})处理K字酵母(Sac-charomyces cerevisiae var. ellipsoideus)结合温度驯化等手段,选育适应高温生产高产酒率的酿酒酵母菌株,并模拟大生产的工艺条件对选育菌株进行初、复筛‘通过上述方法选有出了六株能在40℃正常生长,且发酵强度较好的菌株,其中E,-FE,-UV 1菌株发酵力比对照株K字酵母提高11.2%,劳萄糖利用率提高1300; E;一26-NS19-25菌株发酵力比对照株K字酵母提高8.7/,葡萄糖利用率提高17.5%,并且对选育株的某些发酵特性做了初步的探讨.     

一维细胞神经网络的完全稳定性分析

运用Lyapunov函数方法,讨论了一维细胞神经网络模型的完全稳定性问题,给出了四组使模型具有完全稳定的充分条件.     

带有变时滞的高阶模糊细胞神经网络的指数稳定性

研究了带有变时滞的高阶模糊细胞神经网络（HFCNNs）的全局指数稳定性.通过引入非奇异M-矩阵和使用Lyapunov泛函方法,得到了带有常时滞和变时滞的高阶模糊细胞神经网络全局指数稳定性的充分条件.     

具有可变时滞周期细胞神经网络系统周期解的存在性

使用拓扑度定理得到了具有可变时滞周期细胞神经网络系统周期解存在性的充分条件。     

杨树菇(Agerocybe aegerita)蛋白Yt对MCA诱发性大鼠肺癌作用的影响

检测了杨树菇活性蛋白组分Yt对甲基胆蒽(MCA)诱发性大鼠肺鳞状细胞癌的抑制效果,支持了在药用真菌中,除了多糖,蛋白是另一类重要的抗肿瘤物质这一观点.用MCA诱导大鼠肺鳞状细胞癌.在3个月内,对照组注射生理盐水,处理组注射蛋白组分Yt .3个月后取血并处死大鼠,计算诱癌率,检测10项生化指标和血常规指标,切片观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸骨骨髓、睾丸(雄鼠)及卵巢(雌鼠).结果表明MCA对于对照组的诱癌率为58.33%,而对于处理组的诱癌率为33.33%,对照组与处理组的诱癌率差异显著(p<0.05).10项生化指标中有5项指标与对照组比较有显著性改变天冬氨酸氨基转换酶含量显著升高(0.02<p<0.05),白蛋白含量显著降低(p<0.01),血糖含量显著升高(p<0.002),尿素氮含量显著降低(p<0.05), 胆固醇含量显著降低(p<0.01).在血常规的指标中,Yt处理组的白细胞,红细胞,血红蛋白,血色素,血小板及中性淋巴细胞与对照组比较有显著变化白细胞数量显著增加(p<0.02),红细胞数量显著降低(0.02<p<0.05),血红素含量,红细胞压积、体积、血红蛋白含量显著降低(p<0.001),中性淋巴细胞数量显著增多(0.01<p<0.02).但是这种变化都没有超过正常范围.各器官的石蜡切片表明,除雄性大鼠的睾丸和附睾外,各器官没有明显病变.     

降解焦化废水的微生物菌种的分离筛选鉴定

焦化废水是一种典型的含有难降解有机污染物的工业废水.本论文以南昌钢铁有限责任公司焦化厂的焦化废水为源水,对其进行微生物的培养、分离,以源水中CODcr降解率为指标筛选得到2个高效菌种,分别编号为W1、W3.对CODcr为290mg/l的源水进行48h降解,经测试W1的降解率为36.2%、W3的降解率为56.9%.并根据菌种的个体形态、菌落特征初步鉴定W1为链霉菌属,W3为酵母属.