细胞色素b5Glu44,Glu56的定点突变和蛋白质结构比较

用寡聚核苷酸定点突变的方法将牛肝细胞色素ｂ５基因上第４４位和５６位谷氨酸的密码子ＧＡＡ变成氨酸的密码子ＧＣＴ，获得突变体Ｅ４４Ａ，Ｅ５６Ａ和Ｅ４４／５６Ａ的基因。 它们分别克隆于ＰＵＣ１９上，转化大肠杆菌ＪＭ８３后，突变基因得到成功的表达。     

细胞色素b5突变体V45H NMR初步研究

通过分析在H2O和D2O中采集,DQF-COSY,TOCSY和NOESY等二维核磁共振波谱鉴定了细胞色素b5定点突变体V45H(残基Val^45突变为His^45)的大多数氨基酸残基的质子自旋系统,通过解析NOESY谱中的dNN(i,i+1),dαN(i,i+1),dαN(i,i+2),dαN(i,i+3),dαβ(i,i+3)和dβN(i,i+1)等NOE相关,完成了其序列特异性归属以及主链和侧链质子共振信号的全归属。突变体V45H的二级结构分析表明残基Val^45突变为His^45对分子的整体折叠影响不大。但是,与野生型细胞色素b5相比较,突变体V45H主链酰胺质子的化学位移指数提示突变使其血红素疏水腔的微环境受到扰动。以上实验结果为进一步测定V45H的溶液结构和分析残基Val^45在蛋白质中的作用提供了基础。     

表面带负电荷氨基酸残基的突变对细胞色素b5与细胞色素c结合和识别的影响

利用核磁共振方法研究表面带不同负电荷氨基酸残基突变后的细胞色素b₅与细胞色素c的结合与识别.结果表明,静电作用在细胞色素b₅与细胞色素c的结合过程中有着重要的贡献,而且这些静电贡献在一定程度上具有累加性,E48的贡献略大于E44.同时还证明Browniandynamicssimulations优化出的Glu48-Lys13,Glu56-Lys₈₇,Asp60-Lys86和heme6-propionate-Tml₇₂(细胞色素b₅的残基排在前面)的结合方式在溶液中的确存在.细胞色素b₅突变体(E48,E56/A,D60/A)及[Cr(oxalate)₃]^3-对细胞色素c的表面结合竞争实验表明,细胞色素c表面结合区Site仍然同细胞色素b₅突变体(E48,E56/A,D60/A)有结合作用,只是结合强度上相对于野生细胞色素b₅同细胞色素c的结合有所降低.这表明除上述的Brownian dynamics simulations模型外,尚有其它如Salemme模型等的结合方式,这也揭示出细胞色素b₅和细胞色素c之间的结合是比较动态的.     

细胞色素b5突变体P40V血红素微环境核磁共振研究

细胞色素b5是一个具有多种重要生理功能的低自旋金属蛋白, 作为呼吸链系统的主要电子传递体之一受到了广泛的重视. 为了研究细胞色素b5表面疏水斑区Pro⁴⁰在细胞色素b5结构与功能上的重要性, 本文利用定点突变技术把细胞色素b5中Pro⁴⁰突变为Val⁴⁰, 并采用1D与2D ¹H NMR的方法对其进行分析, 探讨了Pro⁴⁰突变为Val⁴⁰对细胞色素b5血红素微环境的影响.     

推荐一个综合化学教学实验——酰胺键缩合试剂DEPBT的合成

介绍一个多步有机合成的综合化学教学实验。该实验以邻氨基苯甲酸和三氯化磷为原料,经过4步反应合成酰胺键缩合试剂DEPBT。讨论了该实验在本科生综合化学实验教学工作中的实践效果。     

表面带负电荷氨基酸残基的突变对细胞色素bs与细胞色素c结合和识别的影响

利用核磁共振方法研究表面带不同负电荷氨基酸残基突变后的细胞色素b5与细胞色素c的结合与识别，结果表明，静电作用在细胞色素b5与细胞色素c的结合过程中有着重要的贡献，而且这些静电贡献在一定程度上具有 加性，E48的贡献略大于E44。同时还证明Brownian dyanmics simulations优化出的Glu48-Lys13,Clu56-Lys87,Asp60-Lys86和heme 6-propionate-Tml72（细胞色素b5的残基排在前面）的结合方式在溶液中的确存在，细胞色素b5突变体9E48，E56／A，D60／A）及[Cr(oxalate)3]^3－对细胞色素c的表面竞争实验表明，细胞色素c表面结合区SiteⅢ仍然同细胞色素b5突变体9E48，E56／A，D60／A）有结合作用，只是结合强度上相对于野生细胞色素b5同细胞色素c的结合有所降低，这表明除上述的Browni-an dynamics simulations模型外，尚有其它如Salemme模型等的结合方式，这也揭示出细胞色素b5和细胞色素c之间的结合是比较动态的。     

鲜花香皂的制备——推荐一个大学化学综合教学实验

介绍了一个综合化学实验,涉及丰产天然产物有效成分的提取、皂化反应、添加搅拌制备日化产品。该实验将大学有机化学的基础知识、基本实验技能与日常生活相结合,制备出鲜花香皂,具有趣味性、系统性和连贯性。大大激发了学生学习的兴趣,加深了学生对有机化学基础知识的理解,培养和提高了学生的创新能力和综合实践能力。     

推荐一个综合化学实验——酵母中RNA的提取和鉴定

介绍一个结合食盐法与超声波技术提取酵母中核糖核酸,并通过紫外分光光度法和颜色反应测定RNA的含量及鉴定其组分的教学实验。使学生掌握常规的生物分子提取、分离与鉴定技术,熟悉常用生物大分子的定性定量分析法,为进一步学习和掌握复杂的、综合性的生物化学技术打下扎实的基础。     

细胞色素b5突变体(E44A/E48A/E56A/D60A)的溶液结构研究

电子传递反应是光合作用和生物氧化等一系列重要生物过程的基本反应[1],为阐明细胞色素b5和c的静电结合模型,1993年Northrup等[3]用Brownian动态模拟预言的这两个蛋白结合模型有两种几何形态,根据以下模型设计了许多实验,但对两种模型都至关重要的细胞色素b5血红素暴霞棱周围的4个残基E44,48,56T D60对蛋白质复合物的稳定性以及在蛋白质识别中的作用仍然不清楚,为了阐明这4个带负电的残基对细胞色素b5结构的影响,正确地揭示蛋白质相互作用的本质和机理,本文对牛肝微粒体细胞色素b5胰蛋白酶切割后水溶性部分的突变体(E44A/E48A/E56A/D60A)深液结构进行了研究.     

光谱法研究Fe(Ⅲ)与细胞色素b5的相互作用

用荧光光谱、时间分辨荧光光谱、圆二色谱(CD)和紫外吸收光谱研究了细胞色素b5(cyt b5)与Fe(Ⅲ)的相互作用。结果表明,Fe(Ⅲ)对cyt b5有较强的荧光猝灭作用。用Stern-Volmer方程处理实验结果,并结合时间分辨荧光光谱证明,Fe(Ⅲ)对cyt b5的猝灭机制主要为静态猝灭;Fe(Ⅲ)与cyt b5发生分子内的非辐射能量转移,根据Frster非辐射能量转移理论确定了给体-受体间的结合距离r为5.13nm。同时,用圆二色谱及同步荧光光谱探讨了Fe(Ⅲ)对cyt b5构象的影响。     

板蓝根中提取靛蓝应用于扎染的创新实验教学——介绍一个大学化学综合教学实验

介绍一个应用型大学化学综合教学实验。从板蓝根中提取靛蓝并用于扎染,主要内容包括靛蓝的提取、鉴定和染色。该实验涉及天然产物提取、分析鉴定操作以及天然产物的综合应用,满足高校化学类专业实验教学需求,有利于提高学生的实验技能和创新能力,并激发学生的探索热情。实验寓教于乐,是基础操作结合生产应用的良好展现。     

饮用水实验——推荐一个针对非化学专业的生活化学实验

在非化学专业本科生生活化学实验课程中尝试开设饮用水实验,针对非化学专业学生的特点,重新设计实验的教学内容,通过贴近生活的实验内容,普及饮用水常识,培养学生的化学科学素养。     

构树叶中黄酮类化合物的提取及测定——介绍一个大学综合化学实验

A new comprehensive chemical experiment for college students is introduced. This experiment is from the achievements of scientific research. It includes obtaining absorption spectrum and calibration curve of Rutin, and ultrasonic-assisted ethanol extraction and spectrophotometric determination of flavonoids from Broussonetia papyrifera (L.) Vent. Leaves. The experiment involves several basic analytical chemistry procedures and the effective components in plant sample are analyzed. Through the experiment, the students' experimental skills, comprehensive and innovative abilities are improved; furthermore, the specialty requirements are satisfied in agriculture or forestry universities. Thus, it is recommended to be included in the comprehensive analytical chemistry laboratory for students of non-chemistry majors.     

化学计量学-分光光度法测定饮料中的混合色素——推荐一个仪器分析实验

介绍一个将紫外-可见分光光度法与化学计量学法相结合的仪器分析实验,该实验在不经分离的情况下,同时测定市售饮料中柠檬黄、日落黄、胭脂红3种色素的含量。介绍了实验目的、原理、方法内容、教学效果,以及MATLAB软件的简单应用等。     

电喷雾质谱法研究细胞色素Tb5及其F35Y突变体蛋白肽链和辅基的相互作用

本文通过牛肝线粒体细胞色素Tb5和它的F35Y突变体蛋白相对分子质量的外标法测定,得到细胞色素Tb5全蛋白的相对分子质量为10077.5脱辅基蛋白的相对分子质量为9461.4F35Y突变体蛋白的相对分子质量为10093.6,它的脱辅基蛋白的相对分子质量为9477.5,不同nozzle电压下的电喷雾质谱结果表明,该电压的大小明显影响蛋白肽链与血红素辅基之间的非共价结合,随着电压的降低,全蛋白谱峰的强度逐渐增大,然而,过低的电压导致了Na^+,K^+离子加合峰相对强度的增加,而不利于谱图分析。同时,考察到细胞色素Tb5在甲醇溶液和酸性溶液中的变性行为,因此选择nozzle电压70V,10%的甲醇水溶液和pH=7为得到全蛋白质谱峰的最佳条件。相同实验条件下得到的野生型CytTb5和F35Y突变体全蛋白的质谱峰相比较,其相对丰度有悬殊的差异,表明F35Y突变体蛋白的血红素结合能力明显低于野生型蛋白。通过解离出的Hemeb的分子离子峰进行解析,证明铁仍以三价离子存在于血红素辅基中。     

推荐一个与生命科学有关的综合化学实验——牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定

通过调节牛奶的pH分离出酪蛋白和乳糖,并采用醋酸纤维薄膜电泳、颜色反应、TLC和旋光性测定等方法鉴定酪蛋白和乳糖。使学生掌握分离纯化生物大分子物质的一些方法和手段,为参加生命科学研究打下基础。     

电喷雾质谱法研究细胞色素Tb5及其F35Y突变体蛋白 肽链和辅基的相互作用

本文通过牛肝线粒体细胞色素Tb5和它的F35Y突变体蛋白相对分子质量的外标法测定,得到细胞色素Tb5全蛋白的相对分子质量为10077.5脱辅基蛋白的相对分子质量为9461.4F35Y突变体蛋白的相对分子质量为10093.6,它的脱辅基蛋白的相对分子质量为9477.5,不同nozzle电压下的电喷雾质谱结果表明,该电压的大小明显影响蛋白肽链与血红素辅基之间的非共价结合,随着电压的降低,全蛋白谱峰的强度逐渐增大,然而,过低的电压导致了Na^+,K^+离子加合峰相对强度的增加,而不利于谱图分析。同时,考察到细胞色素Tb5在甲醇溶液和酸性溶液中的变性行为,因此选择nozzle电压70V,10%的甲醇水溶液和pH=7为得到全蛋白质谱峰的最佳条件。相同实验条件下得到的野生型CytTb5和F35Y突变体全蛋白的质谱峰相比较,其相对丰度有悬殊的差异,表明F35Y突变体蛋白的血红素结合能力明显低于野生型蛋白。通过解离出的Hemeb的分子离子峰进行解析,证明铁仍以三价离子存在于血红素辅基中。     

推荐一个设计性综合化学实验——己二酸的绿色合成

设计了一个综合实验——己二酸的绿色合成。分别用H3PW12O40·nH2O、H6P2W18O62·nH2O、H3PW6Mo6O40·nH2O催化H2O2氧化环己酮半微量合成己二酸,用红外光谱分析了催化剂和产物的结构。     

新型电控荧光聚合物的合成与性能研究——推荐一个综合化学实验

介绍一个研究探索型大学化学综合性实验——新型电控荧光聚合物的合成与性能研究。内容包括电控荧光聚合物的合成及电控荧光性能的相关测试。通过本实验的实践,使学生在掌握基础理论和基本实验技能的同时,提高独立实验能力和创新意识。本实验的开展还可以使学生接触到学科的前沿领域,激发学生对科学研究的兴趣,培养学生的科研探究能力。