胶体金免疫层析法快速检测牛奶、奶粉、饲料中的三聚氰胺

建立了快速检测牛奶、奶粉、饲料样品中三聚氰胺的胶体金免疫层析分析法。将三聚氰胺进行分子修饰得到两种衍生物,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)相连制得免疫原和包被抗原。运用杂交瘤抗体制备技术得到抗三聚氰胺的单克隆抗体(mAb)。利用柠檬酸三钠还原法制得平均粒径18 nm的胶体金,将胶体金与抗三聚氰胺单克隆抗体相连,所形成的金标抗体(Au-mAb)包被在胶体金垫上,包被抗原和羊抗鼠二抗分别包被在硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T线)和质控线(C线)。将胶金垫、NC膜、样品垫和吸水纸组装成免疫层析快速检测试剂条。将标准溶液(或待测液)滴加到样品垫上,10 min后可在NC膜C线和T线位置上用肉眼观察到胶体金的颜色(红色),通过比对颜色的深浅判断样品中三聚氰胺的含量。结果表明,三聚氰胺的检出限为10μg/L;选用了其它10种物质对免疫层析试剂条进行了特异性实验,免疫层析试剂条与2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪和环丙氨嗪的交叉反应率约为1%,与其它8种物质没有交叉反应;加标样品用免疫层析试剂条和酶联免疫吸附分析法(ELISA)同时检查,结果一致。本方法适用于牛奶、奶粉、饲料样品中三聚氰胺的现场快速检测。     

胶体金免疫层析法对组织样品中磺胺甲噁唑残留的快速检测

研究了用于快速检测组织样品中磺胺甲噁唑残留的胶体金免疫层析检测试剂.采用免疫竞争法,将抗磺胺甲噁唑多克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,同时将人工合成的磺胺甲噁唑抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),将抗磺胺甲噁唑多克隆抗体的羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素薄膜表面作为质控线(C线).T线的人工抗原与待测样品中的磺胺甲噁唑竞争结合胶体金标记的磺胺甲噁唑多克隆抗体,通过T线与C线的显色对比读出结果.采用该检测试剂检测组织试样时,定量下限可达20 μg/L,整个检测过程只需3 ～5 min,且与磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、盐酸克伦特罗、四环素、青霉素、链霉素无交叉反应.检测试剂具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为组织中磺胺甲噁唑残留现场监控的有效筛检手段.     

氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法的建立

利用生物素-链霉亲和素的高亲和作用,研制了一种简便、快速、高灵敏的氯噻啉胶体金增强免疫层析分析方法(Gold immunochromatographic assay,GICA).将氯噻啉抗体和生物素化DNA与13 nm胶体金双标记,将链霉亲和素与41 nm胶体金标记,制备了氯噻啉胶体金增强免疫层析试纸条.系统优化了试纸条的工作条件,并通过交叉反应、添加回收和高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)验证评价GICA的敏感性、特异性、精确性和准确性.在最优条件下,试纸条可在10 min内实现可视化判读,检出限(LOD)为25 ng/mL,除与毗虫啉有较大交叉反应外,与其它类似化合物无交叉反应.氯噻啉在河水、大米、黄瓜、番茄、梨、甘蓝和苹果样品中的添加浓度为0.05,0.5和5μg/g时,GICA的检测结果均符合添加水平.在未知浓度河水和梨样品的检测中,GICA的检测结果与HPLC方法相符.     

猪肉中1-氨基乙内酰脲的胶体金免疫层析法快速检测

基于免疫竞争胶体金免疫层析原理,研制了检测食用肉中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(AHD)的免疫试纸条。用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗1-氨基乙内酰脲的衍生物(CPAHD)的单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,CPAHD-BSA(Bovine serum albumin)抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成AHD胶体金免疫层析快速检测试纸条。在5 min内肉眼观察结果,该试纸条对AHD的最低检测限为2.33μg/L,除与呋喃妥因有弱交叉反应外,与其他同类物均无交叉反应,用该试纸条和ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay)检测猪肉中添加的AHD,结果呈现很好的相关性。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,可作为呋喃妥因残留批量检测的筛选方法。     

五氯酚免疫层析检测试纸条的研究

利用胶体金免疫层析技术建立了一种快速检测五氯酚(PCP)残留的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备大小一致、分布均匀、粒径为20 nm的胶体金颗粒,以此标记五氯酚抗体,制备金标抗体。将五氯酚包被抗原和羊抗鼠二抗分别结合于硝酸纤维膜上,依次将型号Millipore135硝酸纤维膜、型号VL78金标垫、型号SB06样品垫及吸水纸组装于PVC底板上,组装成胶体金免疫层析检测试纸条。通过试纸条上颜色的深浅,检测样品中PCP的残留量。试纸条检出限为10 ng/mL,检测时间为5 min。该方法检测所需试剂已预先包被在试纸条上,操作简单、重复性好、成本低廉,可用于五氯酚的现场快速检测。     

固相萃取-衍生化-气相色谱/质谱测定水中类固醇类环境内分泌干扰物

建立了固相萃取-衍生化-气相色谱/质谱联用同时测定水中4种类固醇类环境内分泌干扰物雌酮(E1)、17β-雌二醇(E2)、17α-乙炔基雌二醇(EE2)、雌三醇(E3)的分析方法.通过对比衍生化试剂 N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)和N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺(MSTFA)的衍生化条件及效果,解释了文...     

氯嘧磺隆胶体金免疫检测试纸条的制备与应用

利用胶体金标记的经亲和层析纯化的氯嘧磺隆单克隆抗体,氯嘧磺隆-牛血清白蛋白,羊抗鼠IgG制备了氯嘧磺隆胶体金免疫检测试纸条。该试纸条的最低检测极限为100μg/L,检测时间10 m in。8个土壤样品分别添加0~2000μg/L的氯嘧磺隆标样,用0.15 mol/L NaHCO3提取2 h后用气相色谱和试纸条进行检测,如果以100μg/L作为阳性与阴性样品的区分标准,气相色谱和试纸条检测结果完全一致。所制备的胶体金免疫检测试纸条可以用于土壤中氯嘧磺隆残留的筛选。     

新雌激素衍生物的合成及抗辐射升白生物活性

以17α-炔雌二醇和17β-雌二醇为原料,分别与烯丙基溴、溴代异戊烯反应,通过一步反应合成了4个新雌激素衍生物,分别是17α-炔雌二醇-3-烯丙基醚(ES-1),17β-雌二醇-3-烯丙基醚(ES-2),17α-炔雌二醇-3-异戊烯基醚(ES-3)和17β-雌二醇-3-异戊烯基醚(ES-4),产率分别为92.2%,73.7%,65.9%和67.6%.化合物通过1HNMR,13CNMR,IR,MS及元素分析确证了结构,4个化合物均未见文献报道.初步的抗辐射升白生物活性研究表明,4个化合物对137Csγ-射线引起的小鼠白细胞低下及造血系统功能损伤有一定的保护作用.其中ES-3的升白作用最佳,经统计学处理,3个给药剂量组与对照组比,升白作用均有非常显著性差异(P0.001).     

GC-MS测定水产品中雌二醇残留量

建立了具有复杂本底基质的水产品中β-雌二醇残留量的气相色谱.质谱检测方法.实验对酶解条件、提取试剂、净化方法等前处理步骤和色谱质谱条件及β-雌二醇衍生物的质谱行为进行研究.样品经β-葡糖苷酸酶酶解后,用乙酸乙酯提取,正己烷去除脂肪和色素等杂质,乙酸乙酯反萃,浓缩吹干,用MSTFA-DTE-TMIS混合液衍生后,经气相色谱-质谱检测,雌二醇-D2为内标定量.在5～500μg/L范围内线性关系良好,回收率为74.0%～99.2%,相对标准偏差(RSD)为5.63%～10.8%,最低检测限为0.5μg/kg.     

分子印迹固相萃取-气相色谱串联质谱测定动物源食品中雌二醇残留量

以新型化合物2-(甲基丙烯酰氧)乙基磷酸酯为功能单体,17β-雌二醇为模板分子,三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,乙腈-甲苯(3+1,V/V)为致孔剂,采用热聚合的方式制备雌二醇分子印迹聚合物,通过正交实验设计优化合成条件。分子印迹聚合物填充成分子印迹固相萃取柱并应用于猪肉、鸡肉和鳗鱼中17α-雌二醇和17β-雌二醇残留量检测。样品经乙酸钠缓冲溶液均质,β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶水解,甲醇提取,分子印迹固相萃取柱净化,硅烷化试剂衍生化后采用气相色谱-质谱/质谱仪测定,内标法定量。方法定量限为1μg/kg,线性范围2~100μg/L时相关系数大于0.999,添加浓度为1~10μg/kg时,猪肉样品回收率为76.5%~116.8%,相对标准偏差为5.2%~9.9%;鳗鱼样品回收率为77.7%~111.1%,相对标准偏差为3.8%~14%;鸡肉样品回收率为70.8%~112.4%,相对标准偏差为1.8%~15%,方法学指标满足残留检测的要求。