高效液相色谱-电喷雾质谱法用于茶多糖蛋白的纯度和相对分子质量的测定

应用Sephadex G100凝胶色谱方法从江西产粗老茶叶中提取纯化得到茶多糖蛋白(TGC)。通过高效液相色谱法对其纯度进行了分析,表明其为均一组分,进而应用凝胶法和高效液相色谱 电喷雾质谱法测得该茶多糖蛋白的相对分子质量为51 500。     

碱溶性茶多糖的提取及其分析

在煎煮后的低档绿茶茶渣中提取碱溶性茶多糖,经HPGPC-ELSD法分析其含有3种均一性多糖组分,依出峰顺序其质量分数约为5.96%、78.99%和15.05%;GC-MS法测得组成碱溶性茶多糖的6种单糖:鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,并分析了其摩尔比例.紫外-可见吸收光谱分析显示,碱溶性茶多糖在250～290 nm区段有"波浪状"吸收.红外光谱表征了碱溶性茶多糖的特征,圆二色谱分析了其水溶液的cotton效应.结果表明,在190 nm有正cotton效应,在203 nm有负cotton效应.     

热水提取与超声提取的麦冬多糖结构与构象特征的比较研究

利用热水与超声提取麦冬粗多糖,DEAE-cellulose52纤维素与Sephacryl S-300凝胶柱层析对其进行分离纯化,得到热水提取的麦冬多糖均一组分WPOJ-DS与超声提取的麦冬多糖均一组分UPOJ-DS。采用高效液相色谱法、气相色谱法、红外光谱法、部分酸水解、甲基化分析及核磁共振对WPOJ-DS与UPOJDS的结构进行表征;利用刚果红实验、圆二色谱实验及原子力显微镜对其溶液构象进行了比较研究。结果表明,超声提取对麦冬多糖的分子量、单糖组成摩尔比及构型会产生影响,WPOJ-DS与UPOJ-DS的主链均主要由→6)-D-Glcp(1→和→3,6)-D-Glcf(1→组成,但WPOJ-DS中存在→6)-β-D-Glcp(1→,而UPOJDS中没有;刚果红实验、圆二色谱实验与原子力显微镜结果显示UPOJ-DS存在螺旋结构,而WPOJ-DS没有;且在不同溶液环境中,WPOJ-DS与UPOJ-DS的溶液构象不同。     

铁皮石斛原球茎多糖DCPP3c-1的分离纯化及结构初步分析

铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-2)和凝胶柱(Sephadex G-200)依次层析,分离纯化得灰色多糖DCPP3c-1.其纯度经比旋光度法、柱层析、紫外扫描检测,组分和结构经薄层层析、高效液相色谱、红外光谱及高碘酸钠氧化等试验分析.结果显示DCPP3c-1为均一组分,相对分子质量为72.4 ku.由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其分子物质的量之比为1.120 4:1:1.046:23.354:3.828:1.046.分子中1→6残基占14%,1→2或1→4残基占40.7%,1→3键占45.3%.红外光谱显示其具有多糖特征吸收峰,并存在吡喃糖苷键.DCPP3c-1是首次从液体悬浮培养的原球茎中分离得到的新型酸性杂多糖组分.     

乌龙茶多糖OTPS 2-1的光谱特性、形貌特征及热特性研究

采用纤维素和葡聚糖凝胶柱层析法分离纯化,获得乌龙茶多糖主要组分OTPS2-1.经GC,HPLC,UV,IR和GPC-LLS证实OTPS2-1是富含糖醛酸和少量蛋白质的三元糖复合物,相对重均分子量为8.877×10⁴,糖基由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖和鼠李糖组成,其摩尔比为7.58:2.14:7.05:1.76:1.02.利用AFM,QELS及LSCM观察OTPS2-1在溶液中的形貌特征,结果表明,OTSP2-1在溶液中呈直径0.2～0.5μm、高度0.3～0.6μm的短棒形不均一聚集体,并具有强烈的荧光,溶液的pH值显著影响其聚集行为.pH值、离子强度和络合物等环境因素的改变,均导致多糖立体构象和非对称性的变化.OTPS2-1在SEM低倍镜下呈折叠卷曲形貌,在高倍镜下呈现平整的图像.综合热分析结果表明,在加热过程中,多糖有3次大的质量损失过程,出现3次吸热峰和放热峰.提示茶叶经过半发酵处理后,多糖组成、分子质量分布以及分子间相互作用可引起微观形貌、链构象和聚集行为的变化,有利于提高生物活性.     

球等鞭金藻生长抑制物的高效液相色谱分析

采用硅烷化键合相C18反相色谱柱,以V(乙腈)∶V(水)=63∶37为流动相,0.3mL/min恒流洗脱,检测波长UV-235nm等条件,建立了一种利用反相高效液相色谱分析球等鞭金藻生长抑制物的粗提物、Sepha-dexG-15凝胶柱层析分离获得的3个组分、硅胶G薄层层析分离获得的4个组分等8个分离纯化产物中具有抑制活性组分的方法,并确定了具有抑制活性组分的保留时间。通过乙酸乙酯萃取球等鞭金藻老化培养液,得到了具有抑制活性的粗提物;粗提物经SephadexG-15凝胶柱层析分离后,获得3个具有抑制活性的组分;通过硅胶G薄层层析对此3个组分进行分离,在获得的4个组分中,仅有一个组分具有抑制活性。将粗提物与SephadexG-15凝胶柱层析分离获得组分的高效液相色谱进行对比,确定具有抑制活性组分的保留时间在3.827~6.002min范围内;通过与硅胶G薄层层析分离获得组分的高效液相色谱的再次对比,发现仅具有抑制活性的组分Ⅱ(Rf为0.637)中出现保留时间为4.875min的峰,并且相同保留时间的峰同样出现在具有抑制活性的粗提物以及SephadexG-15凝胶柱层析分离获得的3个组分的高效液相色谱中。结果表明:在优化的实验条件下,高效液相色谱中保留时间为(4.872±0.005)min的峰对应的组分正是具有抑制活性的组分。     

淫羊藿多糖的分子特征及免疫活性研究

用超声复合酶提取、离子交换凝胶分离、分子筛凝胶纯化得到3个淫羊藿叶多糖组分(EPs-1,EPs-2和EPs-3).3个多糖组分的分子特征通过气相色谱、高效凝胶渗透色谱进行了表征,并采用体外淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬活性实验对多糖的免疫活性进行了评价.3个多糖组分EPs-1,EPs-2和EPs-3的总糖含量分别为90.36%,94.51%和89.19%.EPs-1,EPs-2和EPs-3主要由半乳糖醛酸(GalA)、半乳糖(Gal)、鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖(Ara)和甘露糖(Man)组成,其平均相对分子质量分别为81.64×10~3,60.53×10~3,21.85×103;3个多糖都能够促进脾淋巴细胞增殖和激活巨噬细胞活性.这些结果说明淫羊藿多糖可以作为天然的免疫活性调节剂应用于医药和功能食品.     

防风多糖化学成分的研究

从中药防风Saposhnikovia divaricata（Turcz．）Schichk中分离得到两种酸性杂多糖SPSa和SPSb,经凝胶渗透色谱证实为均一组分．UV-Vis光谱证实两种多糖中不含蛋白质．采用薄层色谱和毛细管电泳色谱确定了SPSa和SPSb中单糖的组成及摩尔比,SPSa：半乳糖：阿拉伯糖：鼠李糖：半乳糖醛酸=1：2．3：0．15：4．8;SPSb：半乳糖：阿拉伯糖：鼠李糖：木糖：半乳糖醛酸=1：1．5：0．8：0．2：10．2．采用IR光谱对多糖进行了初步结构研究．与现有的防风多糖的组成相比较,确定出SPSa和SPSb为新的防风多糖．     

羧甲基牛膝多糖的制备、结构及生物活性研究

在NaOH水溶液中,以ClCH_2COOH为羧甲基化试剂,对牛膝多糖(AbPS)进行了羧 甲基化,粗产物经DEAE-Cellulose及Sephadex G-25两次柱层析纯化,得到羧甲基 牛膝多糖(CM-AbPS)纯品,经高效液相法（HPLC）及毛细管电泳法（CE）检测表明 具有较好的均一性,并通过样品甲基化和GC-MS分析,对羧甲基牛膝多糖链中羧甲 基的分布进行了研究,结果表明羧甲基牛膝多糖中羧甲基主要取代的糖链中呋喃果 糖的4-位上。该产物具有抗肿瘤活性。     

禹州漏芦均一多糖的结构分析及其硫酸化衍生物的抗补体活性

以禹州漏芦为原料,经沸水提取、乙醇沉淀、DEAE-Cellulose和SuperdexTM75凝胶柱层析分离纯化,得到一种水溶性的酸性均一多糖(EPS-2A).采用单糖组成、甲基化及绝对构型等方法对其进行了结构解析.结果表明,该均一多糖主要由D-半乳糖醛酸组成,并含有少量的Rha和Ara.该均一多糖经不同条件硫酸衍生化后的衍生物(Sul-2A-1和Sul-2A-2)与阳性药肝素[CH50=(103.0±9.0)μg/mL(mean±SD,n=3),CH50为出现50%溶血时的样品浓度]相比,均表现出很强的抗补体活性[Sul-2A-1的CH50=(74.1±4.6)μg/mL;Sul-2A-2的CH50=(35.7±2.8)μg/mL].     

Application of high-performance gel-permeation chromatography clean-up in the determination of hexaflumuron residues in soil

A high-performance gel-permeation chromatography (HPGPC) column (7.5 mm I.D.), packed with a divinylbenzene cross-linked polystyrene gel (10 μm particles and 5 nm pore size) was used to produce a simple, one-stage clean-up procedure for determination of the insecticide hexaflumuron in three typical agricultural soils.

Conventionally, hexaflumuron extracts are purified by a series of time-consuming liquid-liquid partitions and solid-phase purification prior to high-performance liquid chromatography. HPGPC allows isolation of hexaflumuron from soil matrices with improved sensitivity in a shorter analysis time.

The use of HPGPC methodology has been validated over the range 0.01–1.0 mg/kg with recoveries in the range 73–119% (mean 98%). HPGPC gave excellent separation of hexaflumuron from other extracted materials with significant reduction in clean-up time and solvent consumption. This methodology has been successfully applied to samples derived from field trials.     

具有温敏特性的光学活性嵌段聚合物Click合成与表征

以末端含有炔基的2-十二烷基三硫代碳酸酯-2-甲基-丙酸丙炔醇酯(DMPE)为链转移剂(CTA),2,2′偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,利用可逆加成-断裂链转移(RAFT)聚合反应制备了分子链末端带炔基的均聚物聚(N-丙烯酰基-L-缬氨酰甲胺)(PAVMA—C帒CH),然后与叠氮基封端的聚乙二醇单甲醚(MPEG-N3)进行"click"偶合反应,制备具有温敏特性的光学活性嵌段聚合物MPEG-b-PAVMA.利用1H-NMR和体积排阻色谱(SEC)等表征了所合成的均聚物和共聚物的结构和分子量分布.1H-NMR结果表明所合成的嵌段共聚物中MPEG和PAVMA链段的重复单元数分别为115和55.利用紫外分光光度计测试了均聚物及嵌段聚合物的温敏特性,结果表明均聚物和共聚物在水中的低临界溶解温度(LCST)分别为6.5℃和19.5℃.比旋光度测试结果表明,均聚物和共聚物具有旋光性,同时相比于单体,其旋光能力有所降低.圆二色谱法(CD)的测试结果显示,均聚物和嵌段共聚物在220nm和197nm附近分别有一个较弱的正Cotton效应峰和一个较强的负Cotton效应峰,并且在水溶液中主要以无规的二级构象结构存在。     

基于共价有机框架材料TpPa-NH2-Glu的高效液相色谱固定相用于分离手性化合物

共价有机框架材料（COFs）是一类由多齿有机单元通过共价键连接而成的新兴孔晶体材料。通过合成后修饰所得到的COFs通常具有较高的结晶度与孔隙率,并且在手性拆分、不对称催化与色谱分析等领域具有良好的应用价值。该文用1,3,5-三甲醛间苯三酚与2-硝基-1,4-苯二胺合成TpPa-NO₂,对其还原得到TpPa-NH₂,然后通过合成后修饰策略将D-葡萄糖修饰到该材料上,得到手性材料TpPa-NH₂的D-葡萄糖衍生物（TpPa-NH₂-Glu）。利用“网包法”将其固载在球形硅胶表面用作高效液相色谱固定相并制备了液相色谱柱,分别以正己烷-异丙醇（9∶1, v/v）或甲醇-水（9∶1, v/v）为流动相,流速0.5 mL/min,成功拆分了16种包括多个手性药物的外消旋体和2种苯系位置异构体o,m,p-硝基苯胺和o,m,p-碘苯胺。在甲醇-水（9∶1, v/v）流动相条件下,拆分了5种外消旋体,其中盐酸普萘洛尔、华法林、美托洛尔达到了基线分离;在正己烷-异丙醇（9∶1, v/v）流动相条件下,拆分了11种外消旋体,其中2-溴丙酸乙酯、3-丁炔-2-醇达到了基线分离。此外还探究了温度对TpPa-NH₂-Glu液相色谱柱的影响以及TpPa-NH₂-Glu液相色谱柱的重复性,结果表明,温度对TpPa-NH₂-Glu所制备的高效液相色谱柱影响不大,且TpPa-NH₂-Glu所制备的高效液相色谱柱具有良好的重复性,其相对标准偏差（RSD）分别为1.55%和1.46%。实验结果表明,TpPa-NH₂-Glu对手性化合物有良好的拆分能力。     

含碗形CTV侧基的甲基丙烯酸酯类单体和聚合物

采用三聚法合成外围基团中含羟十一碳氧基的CTV衍生物(CTV-H),然后结合柱层析分离技术合成和分离出外围基团中含单甲基丙烯酸酯基团的CTV衍生物(CTV-M).以CTV-M为单体,本体聚合得到含碗形CTV侧基的甲基丙烯酸酯类聚合物(BPM).CTV-H和CTV-M都具有热致液晶性,是新的碗状液晶.SAXS和WAXD测定表明,液晶结构为六方柱相(Φh),柱直径为4.4 nm和4.8 nm,与理论计算结果相符.而BPM没有液晶性,呈非晶态.     

固相萃取-离子交换色谱法测定浓缩苹果汁中残留的苯菌灵、多菌灵、噻菌灵

建立固相萃取-离子交换色谱法测定浓缩苹果汁中苯菌灵、多菌灵和噻菌灵的残留量。样品直接用水稀释后,于80 ℃下将苯菌灵完全转化为多菌灵,再经SCX固相萃取柱富集,采用LC-SCX离子交换色谱柱(25 cm×4.6 mm,5 μm)分离,二极管阵列检测器检测,以0.1 mol/L KH2PO4溶液(pH 2.5)-乙腈(体积比为70 ∶30)为流动相,在1.0 mL/min下等度洗脱,于282 nm波长下检测。在0.02～2.0 mg/L范围内,多菌灵和噻菌灵的峰面积与其浓度呈良好的线性关系,最低检出限均可达到0.004 mg/kg,回收率为94.2%～100.4%,相对标准偏差低于4.2%。该方法简便、快速、灵敏、准确,可用于浓缩苹果汁中苯菌灵、多菌灵和噻菌灵残留量的检测。     

北虫草多糖的理化特征及抗氧化和免疫活性研究

采取超高压提取,DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-100柱层析分离纯化得到虫草多糖(CMP),通过高效凝胶色谱(HPGPC)、气相色谱(GC)和傅里叶红外光谱(FT-IR)对其理化特征进行了表征,并对CMP抗氧化及免疫调节活性进行了测定.结果显示CMP是纯度较高杂多糖,由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖4个单糖组成,结果表明超高压是一种高效的菌多糖提取技术,提取得到的CMP可以探索作为天然的抗氧化和免疫调节剂应用于功能食品和药品.     

高效液相色谱法快速同时检测全血中两种免疫抑制剂

环孢素A和西罗莫司是许多器官移植手术中广泛使用的免疫抑制剂,且一起使用时会产生协同效应,但这两种免疫抑制剂的治疗窗口都非常窄,仅在特定的血药浓度范围内有预期的治疗效果。因此,快速同时检测全血中这两种免疫抑制剂的浓度,可为患者器官移植手术后的给药方案提供有价值的信息。该工作首先考察了环孢素A和西罗莫司在生物液相色谱柱和传统液相色谱柱上的色谱行为,然后基于生物液相色谱柱,建立了可快速分离和检测全血中环孢素A和西罗莫司的高效液相色谱分析方法。全血样品经样品前处理后进样分析,采用ZORBAX 300SB C8柱（250 mm×4.6 mm, 5.0 μm）进行分离,以乙腈-水（70∶30, v/v）为流动相进行等度洗脱,柱温为60 ℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为205 nm和278 nm,进样量为20 μL。结果表明,环孢素A和西罗莫司在6 min内可实现较好的分离;环孢素A和西罗莫司在各自的浓度范围内具有良好的线性关系（r>0.997）,检出限（S/N=3）分别为10 ng/mL和1 ng/mL,定量限（S/N=10）分别为30 ng/mL和2 ng/mL, 3个水平的平均加标回收率分别为83.5%~89.7%和95.8%~97.8%,相对标准偏差（RSD）分别为3.2%~9.0%和3.4%~6.7%（n=5）。该方法操作简便,流动相简单,分析时间短,线性范围宽,灵敏度高,可用于全血中环孢素A和西罗莫司的含量检测。     

二维超高效液相色谱-四极杆/飞行时间质谱法解析替考拉宁杂质

建立了二维超高效液相色谱-四极杆/飞行时间质谱法（2D-UPLC-Q/TOF-MS）对替考拉宁组分分离和杂质结构解析的分析方法,有效地解决了流动相中含不挥发性磷酸盐的色谱系统不适用于液相色谱-质谱快速鉴定替考拉宁杂质的难题。一维超高效液相色谱以Octadecyl silica （ODS） hypersil色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）进行色谱分离,以3.0 g/L磷酸二氢钠溶液（pH 6.0）/乙腈=9/1 （v/v）为流动相A、3.0 g/L磷酸二氢钠溶液（pH 6.0）/乙腈=3/7 （v/v）为流动相B进行梯度洗脱;二维超高效液相色谱以Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm, 1.7 μm）进行脱盐,以0.01 mol/L甲酸铵（pH 6.0）和乙腈为流动相进行梯度脱盐洗脱。质谱在电喷雾离子源、正离子模式下,采用全信息串联质谱（MS^E）模式采集质谱数据,锥孔气流速50 L/h,锥孔电压60 V,离子源温度120 ℃,雾化气流速900 L/h,雾化气温度500 ℃,毛细管电压2500 V,碰撞能量20~50 eV。根据杂质精确质量数及其二级质谱信息推导其结构,并对替考拉宁主要成分TA_2-2的裂解规律进行了推导,发现了2个母核特征离子;对《欧洲药典》10.0收录的10个组分及22个杂质组分进行二级质谱分析,发现了3个新杂质组分。采用该法既可以使用一维超高效液相色谱根据相对保留时间进行组分准确定位,也可以使用二维超高效液相色谱-四极杆/飞行时间质谱二级质谱信息快速、简便、灵敏地对杂质进行结构鉴定,为替考拉宁的质量控制和工艺优化提供了一种新思路。     

葛根药材指纹图谱分析方法研究

以安徽产葛根药材为分析对象,选择Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水梯度洗脱,流量为0.9 mL.min-1,检测波长为250 nm,柱温25℃,建立了葛根药材HPLC指纹图谱。结果表明,10批供试品的保留时间在60 min之内,共有18个典型的共有色谱峰。采用HPLC法获得的葛根药材指纹图谱稳定、可靠、重复性好,能较全面地反映葛根药材的内在质量,可用于葛根药材的质量控制。     

Partial purification of a specific inhibitor of the insulin-like growth factors by reversed-phase high-performance liquid chromatography

We report here preliminary data using reversed-phase high-performance liquid chromatography for the purification of a specific inhibitor (a molecular weight 16,000-18,000 protein) of the insulin-like growth factor (IGF) or somatomedin family. Crude inhibitor prepared from Cohn fraction IV-1 of human serum was first partially purified using an IGF/CH-Sepharose 4B affinity column. Following elution of the bound inhibitor and resuspension in 0.1% aqueous trifluoroacetic acid (mobile phase A), it was injected (100 microliter; 2.0 mg protein) onto a Brownlee Aquapore RP-300 column. Application of a linear gradient from 0% to 100% mobile phase B (45% isopropanol-0.1% trifluoroacetic acid) resulted in elution of two peaks of inhibitor activity between 31% and 34% isopropanol associated with a major homogeneous protein peak and a minor heterogeneous protein peak. No inhibitor was recovered when an acetonitrile gradient was used instead of isopropanol, indicating that the inhibitor is very hydrophobic. These data suggest that high-performance liquid chromatography offers a simple procedure for the potential purification of IGF inhibitor(s) from normal human serum.