单糖和寡糖的高效阴离子液相色谱分析

糖类化合物是动植物的结构物质和能量来源。随着分析检测技术和分子生物学的发展,近十几年来发现糖缀合物还具有细胞识别和受体功能。在目前已知的蛋白质中有80％是糖基化的,这些糖基的生物功能,正在引起人们的极大兴趣,目前人们推测它对维持蛋白质构象起着重要作用。由于糖链的这些重要生物功能,     

糖-蛋白质特异性识别在生物材料领域的应用

糖类不仅是组成生命体的基本物质之一,还是很多生理和病理过程中分子识别和细胞间相互作用的基础。糖的生物学功能可通过与蛋白质的相互作用来实现。这种可逆的特异性识别在信号传导、细胞粘附、增殖、分化、病菌感染和免疫应答等生命过程中具有重要意义。本文着重介绍了糖-蛋白质相互作用的种类和机理,综述了糖-蛋白质特异性识别作用在生物材料领域的应用进展,包括将糖类作为靶向分子修饰到纳米粒子或载体分子表面进行药物传递和基因转染,利用糖-蛋白质非共价作用力进行分子组装,以及制备糖基化表面用于调控蛋白粘附和细胞行为。由于糖类特殊的生物学性能和种类的多样性,基于糖-蛋白质特异性识别有望用于制备更加实用和智能的生物材料。     

葡萄糖发酵液D-核糖含量的高效液相色谱分析

D－核糖在生命科学研究领域十分重要,在医药、食品、饲料等工业部门广泛应用,近年来,D－核糖可通过D－葡萄糖在莽草酸营养缺陷型突变株菌种^[1]存在下,经发酵制得,目前国内葡萄糖发酵液中该糖含量分析仍采用苔黑酚光度法,此法没有对发酵液中种种上糖类化合物预先分离,选择性差,得到的是各种糖经合物总含量分析结果,糖类化合物测定的高效液相色谱法有衍生法[2] ,但比较繁琐,近年RI检测器应用于糖类分析日益增多[3,4],但用于葡萄糖发酵液中D－核糖分析尚未见报道,本文采用高效液相色谱法分析葡萄糖发酵液D－核糖含量,并获得良好结果。     

聚糖的合成及其在糖疫苗研究中的应用

糖类在各种生命活动过程中发挥着重要的作用,但聚糖的获得性问题和其相对较弱的免疫原性一直限制了糖化学生物学尤其是糖疫苗研究的发展.近年来,聚糖和糖复合物化学合成技术的进步很大程度上促进了糖疫苗(包括抗菌疫苗、抗肿瘤疫苗、抗HIV疫苗等)研究的兴盛.其中,寡糖一釜合成策略和固相合成策略大大提高了聚糖合成的效率;聚糖与载体蛋白偶联的复合物也成功提高了糖抗原的免疫原性.本文将结合本课题组的相关研究工作,简述糖类化合物化学合成的方法和策略方面的研究进展及其在糖疫苗研究中的应用,希望对更好地理解糖化学生物学特别是糖疫苗有所帮助.     

作为信息分子的糖类

糖生物学是生物化学中最后一个重大的研究前沿。糖类研究的复杂性在于其结构的复杂多变, 但是近年来对糖类结构, 特别是糖复合物中的糖部分的测定取得了很大进展。糖结构的复杂性, 也使糖类成为携带着最大信息量的生物分子。作为信息分子的糖类在生物体内发挥多方面的生物作用: 决定了分子的抗原性和细胞的表型; 在很多生理和病理过程中起了关键的识别作用; 也可作为动态和时空调节的信号。     

高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法分析糖类化合物影响因素的研究

研究了高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法分离测定糖类化合物的一些影响因素。这些因素包括NaOH淋洗液浓度、色谱柱温度和积分脉冲安培检测的采样电位。实验用AminoPac PA10阴离子交换柱分离糖类化合物。当NaOH淋洗液浓度增大时,糖类化合物的保留值减小,并有洗脱顺序的变化。糖的保留只表现为放热行为,但是每种糖的保留受温度的影响程度不同,即当温度改变时每种糖保留时间的变化程度不同。一般规律是随糖分子增大(依单糖、双糖、三糖、四糖顺序),其保留时间的变化程度增大。通过改变温度可以改善两种相近洗脱糖之间的分离状况。糖的范特霍夫(Van’t Hoff)曲线具有良好的线性关系。积分脉冲安培检测的采样电位增大,糖检测的峰面积增大。通过提高采样电位,可以改善糖的检测。     

与癌症相关的糖类抗原Globo-H六糖的全合成进展

Globo-H作为一种和乳腺癌、前列腺癌相关的复杂糖类抗原,其发现为糖类疫苗开发和癌症免疫治疗带来了机遇,但如何高效、高纯地获得合成糖类抗原,以供研究和临床应用,也向寡糖合成方法学提出了挑战.综述了1995年Danishefsky首次以糖烯组装策略全合成Globo-H以来的各种新方法,如:Schmidt的三氯乙酰亚胺酯法、Boons的双向糖苷化法、Wong的基于糖基给体活性差异的一锅煮策略、Seeberger的液相线性合成和固相自动组装法、Huang的多组份反复预活化一锅煮法和最新报道的酶法.就糖合成方法学而言,硫苷法依旧可称为"明星方法",糖烯、三氯乙酰亚胺酯和氟代糖也普遍采用,磷酸酯糖基给体在固相合成中的应用正显示出其新的活力.这些方法代表了当今糖化学的水平和发展趋势.     

糖的痕量分析——化学衍生-高效液相色谱法

应用高效液相色谱法分离糖类化合物已日见普遍,但痕量糖类的检测问题尚待解决。目前多数采用的示差折光检测器灵敏度低,且不够稳定,有的转而应用化学衍生法提高糖类的检测灵敏度,但手续繁复,反应条件苛刻。Mooper等用丹酰肼(Dns-hydra-zine)与糖类反应生成丹酰糖类衍生物荧光检测的方法,检出限量可达2—5pmol。我们则选用和比较了几种容易得到的化学衍生试剂与糖反应,研究了它们的反应条件和产物的色谱性能,最后确定以3-羟基-2-萘甲酰肼为化学衍生试剂,最小检出量可达10pmol(葡萄糖)。     

糖类的高效毛细管电泳

高效毛细管电泳以其快速、高效、简便、高分辨率、样品和溶剂消耗少及易于仪器化等优点正成为生物活性分子分离和分析工作中的一个重要工具。介绍了作为四大基本生命物质之一的糖类化合物的高效毛细管电泳研究进展，包括CZE、CGE、MECC和CITP等四种分离模式以及直接紫外/荧光法、间接紫外/荧光法、示差法、电化学法和质谱法等五种检测方式。并简要介绍HPCE在单糖、寡糖和多糖分离与分析中的应用，展望了HPCE用于单个细胞中糖类组分的研究前景。     

用高效液相色谱法快速测定甜菊糖甙

本文介绍了用高效液相色谱法分离测定甜菊糖甙的四种成分,测定了各成分的相对百分含量及甜菊饮料制品中各糖甙成分及糖类的含量,并做了精密度和回收率的验证。该法简便快速,效果良好。色谱条件为:μ-Bondapak NH_2往,柱前加Bondapak AX/Corasil预柱;乙腈:0.02M(NH_4))2 HPO_4水溶液=75:25作流动相,流速为2.0ml·min~(-1);示差折光检测。     

高效液相色谱-蒸发光散射法同时测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖

<正>蜂蜜是一种营养丰富的天然保健食品,具有一定的药用价值。蜂蜜成分极为复杂,含各种糖类、酸类及矿物质等。其中糖类为主要成分,含量占60%~75%,包括果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖等。国家标准GB 14963-2011《食品安全国家标准蜂蜜》[1]中将各种糖含量作为判断蜂蜜产品质量的重要指标。欧盟2001/110/EC指令等其他国家法规也明确规定了进口蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量     

致病菌与糖的特异性识别及其分析应用研究

致病菌往往通过凝集素-糖特异性识别来实现对宿主细胞的粘附,进而感染宿主组织,引起病变。因此,研究致病菌与糖的特异性识别有利于进一步了解感染性疾病的致病机制,为致病菌的特异性检测和感染性疾病的治疗提供新的策略。该文总结了致病菌-糖特异性识别的相关机制机理;介绍了目前主要的研究方法和技术,特别评述了荧光光谱、表面等离子体共振、电化学阻抗谱及石英晶体微天平等技术在该研究中的应用现状,并对这4种技术与微流控芯片平台的结合进行了探讨;针对致病菌检测特异性差、耐药性严重等难题,重点综述了致病菌-糖的特异性识别在细菌分离、富集、检测、鉴别、生物膜抑制及抗菌糖类药物筛选方面的应用。最后对致病菌-糖特异性识别基础和应用研究进行了展望。     

用高效液相色谱法快速测定甜菊糖甙

本文用高效液相色谱法快速分离甜菊糖甙的四种成份的方法,并测定了几种甜菊饮料制品中这四种糖甙及其中糖类的含量。色谱条件为:μ-Bondapak NH_2柱,柱前加Bondapak AX/Corasil(4×22mm)预柱;乙腈:0.02M(NH_4)_2HPO_4水溶液(75:25)作流动相,流速为2.0ml/min;示差折光检测(RI)。所有样品都须用乙腈:水(75:25)溶解,才能保证有良好的分离效果。     

基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱的寡糖轮廓分析用于蜂蜜中淀粉糖浆的掺假鉴别研究

采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱(HPLC-Q/Orbitrap MS)建立了寡糖轮廓分析的方法。通过对纯天然蜂蜜和淀粉类糖浆中的麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖进行定性定量分析,发现淀粉类糖浆中含有未被酶解完全的微量麦芽类寡糖,且麦芽七糖在所有检测样本中干扰小,对结果的定量无影响,而其他寡糖类物质的定性和定量结果会存在干扰。最终选择麦芽七糖作为蜂蜜中掺入淀粉糖浆的典型标志物。在实际样品分析中,根据麦芽七糖的保留时间和离子对的相对丰度比可以定性判断蜂蜜中是否掺有淀粉糖浆;通过标准曲线法可以定量测定样液中麦芽七糖的含量。在20,50,100 mg/kg 3个加标水平下,麦芽七糖的平均回收率为75%~82%,相对标准偏差(RSD,n=5)为3.1%~6.7%,方法检出限为0.1μg/m L。应用该方法可在10 min内完成整个分析过程,且样品前处理简单,结果可靠,灵敏度高,可用于纯天然蜂蜜中掺入淀粉糖浆的快速确证和检测。     

超高效液相色谱-轨道阱高分辨质谱法对人参寡糖提取物与蓖麻凝集素120相互作用的研究

利用超高效液相色谱-轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Orbitrap-MS)结合链霉亲和素包被的96孔板的方法筛选人参复杂体系中蓖麻凝集素120 (RCA 120)的寡糖结合剂。将RCA 120修饰的96孔板与溶菌酶修饰的96孔板分别与寡糖标准品孵育,对未结合的寡糖利用UHPLC-Orbitrap-MS进行分析,利用峰面积的变化表征寡糖是否与RCA 120发生相互作用。对影响亲和力的因素包括孵育时间、孵育温度和缓冲液等进行了优化。在优化条件下,对生晒参、红参和西洋参的寡糖提取物进行RCA 120结合剂的筛选,从生晒参中筛选出3种二糖化合物和2种三糖化合物,从西洋参中筛选出2种二糖化合物和2种三糖化合物,发现生晒参和西洋参中具有相同单糖残基的寡糖与RCA 120的结合强度均具有显著性差异。但是,从红参中未筛选到RCA 120结合剂,推测这是由红参炮制工艺导致的差异。本方法简单、快速、准确,可高通量地识别和筛选复杂体系中多个糖类组分与蛋白质的相互作用,为糖和蛋白质相互作用的研究提供了新方法。     

烟草中糖类物质的高效毛细管电泳-安培检测研究

将高效毛细管电泳－安培检测技术（ＨＰＣＥ－ＡＤ）用于不同烟草样品中糖类物质的测定。在 １×１０－６ｍｏｌ／Ｌ～１×１０－３ ｍｏｌ／Ｌ范围内,存在良好的线性关系,葡萄糖、果糖、蔗糖和麦牙糖的检测限均小于 ５．０ ×１０－７ｍｏｌ／Ｌ,结果令人满意。     

高效液相色谱法在双酶协同作用酶解淀粉制取麦芽低聚糖工艺研究中的应用

介绍了高效液相色谱在双酶协同作用酶解制取麦芽低聚糖工艺研究中的应用。以C18柱为分离柱,水作流动相,利用折光检测器来检测麦芽低聚糖产品中的7种糖,同时评估了补加酶量与麦芽低聚糖中麦芽三糖至六糖含量的关系,并测定了二次确认实验中麦芽低聚糖产品中各糖的含量。     

亲水作用色谱在糖类化合物分析中的应用

糖类化合物的结构和组成分析对于探究糖的结构与功能的关系具有重要作用。亲水作用色谱(HILIC)对糖类等极性化合物具有良好的分离效果。该文介绍了适合糖类分析的常用HILIC柱固定相及其分离机制,论述了强洗脱溶剂比例、流动相p H值、缓冲盐浓度和色谱柱温度对HILIC分离效果的影响,并举例说明了HILIC法在单糖组成、糖胺聚糖二糖组成、寡糖聚合度、糖苷、糖脂、糖醇以及N-/O-糖链分析中的应用。     

非糖类化合物合成碳环糖

碳环糖是一类呋喃或吡喃糖环中的氧原子被亚甲基取代后形成的糖类似物。碳环糖作为糖类化合物的类似物,和糖类化合物有着不同的活性和稳定性,已经引起了人们的广泛关注。本文综述了从非糖类化合物合成五元及六元碳环糖研究的最新进展。重点介绍了以环二烯基硅烷、奎宁酸、降冰片烯等碳环化合物为原料合成碳环糖的进展。     

锡类络合物在糖衍生物合成中的区域选择性

锡类化合物在选择性糖衍生物合成中应用得相当广泛,亚甲锡烷基方法在吡喃糖衍生物合成中体现了高区域选择性。本文从三丁基锡醚和二丁基锡缩醛与糖类形成的络合物结构出发,揭示了其区域选择性的根本原因在于通过聚合作用使得处于不同位置的羟基显示不同的电负性和亲核性;还讨论了吡喃糖类中不同类型的多元醇系统和锡络合后所表现的区域选择性。