固定化对恶臭假单胞菌腈水合酶催化特性的影响

酶法代替铜催化法使丙烯腈转化制内烯酰胺的研究,70年代起在国外开始进行.近年来,国内也相继开展了这方面的工作.他们筛选得到的恶臭假单胞菌JP-1具有较高腈水合酶活力,其完整细胞的腈水合酶催化特性也已进行了研究.本文研究了采用海藻酸钙包埋法制备的恶臭假单胞菌固定化细胞的酶学性质.     

紫外光谱法实时测定腈水合酶的催化动力学

采用紫外光谱法研究了腈水合酶催化丙烯腈水合的过程,在不同丙烯腈初始浓度下,测定了催化过程中275nm紫外吸光度的变化,计算出丙烯酰胺的生成速率.用Michaelis-Menten方程对不同丙烯腈浓度下的Nocardiasp.腈水合酶催化速率进行了拟合,得到该酶以丙烯腈为底物的米氏常数(K_m)为8.46mmol/L,单位质量腈水合酶的催化速率常数(k_cat)为2398μmol/(min·mg).     

腈水合酶的发酵及酶学性质

红球菌Rhodococceus rhodochrous J1在含有脲和钴的培养基中发酵产生腈水合酶,可以催化丙烯腈水合为丙烯酰胺。调节培养条件使发酵液的酶活力达到6150u／ml。温度30℃,反应体系呈中性酶活性很高并且稳定。底物浓度,酶浓度,反应时间的正交实验表明,底物丙烯腈是显著因子,最佳浓度7％,超过此浓度酶会失活;1min内,水合反应转化率可达80％。浓度超过15％的丙烯酰胺会抑制酶的活性。     

腈水合酶及其在丙烯酰胺生产中应用的研究进展

对近年来国内外腈水合酶的研究进行了回顾,就腈水合酶的种类、分布、生理合成调节、结构特点、反应机理、光敏性、热稳定性等方面及影响酶活性的几个主要因素做了具体的阐述.并进一步探讨了其在工业中的应用和发展,提出了一些建议和设想.     

基于虚拟筛选从中药中发现抗铜绿假单胞菌的活性成分

针对铜绿假单胞菌的耐药性问题,采用虚拟筛选技术快速筛选出具有抗铜绿假单胞菌活性的中药成分.采用AutoDock Vina程序对铜绿假单胞菌LasR信号受体蛋白的2UV0、3IX3和6MVM三个共晶结构进行方法学研究,然后利用Lipinsky规则对陶术中药数据库进行初步筛选,通过分子对接进行再次筛选,并对满足Lip-in...     

微生物腈水合酶的研究进展

腈水合酶 ( Nitrile Hydratase E C4.2 .1 .84,简称 NHase)是一种微生物酶 ,它可催化多种腈化合物水解生成酰胺[1] ,酰胺在酰胺酶 ( Amidase)的作用下 ,进一步转化生成羧酸及氨气 .这与腈水解酶( Nitrilase)催化腈水解一步生成羧酸的途径有所不同 .微生物 NHase可广泛地应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物的合成 . 1 980年 ,Asano等人[2 ] 首次发现微生物 Rhodocococcus sp. N- 774NHase可降解有毒的乙腈 ,不久即被成功地应用于工业生产丙烯酰胺 .近来 ,NHase也被用于制备手性药物 ,如 Gilligan 等 [3 ]成功地用 Rhodocococcus equ…     

大孔吸附树脂分离提取羟丙腈的研究

本文考察了三种大孔吸附树脂对羟丙腈（HPN）的吸附能力，其中NKA－Ⅱ效果较好，表态吸附容量的82.5mg/mL，甲醇是较适宜的洗脱剂。并用动态实验研究了HPN浓度、流速、盐浓度对NKA－Ⅱ树脂吸附能力的影响，将NKA－Ⅱ树脂直接用于丙烯腈水合反应液中羟丙腈的分离提取，回收率高于90％。     

游离细胞法制备丙烯酰胺

采用新工艺游离细胞法半连续操作制备丙烯酰胺,探讨了反应的最佳条件。结果表明,在温度高于20℃时酶易失活,底物丙烯腈体积分数高于4％和产物丙烯酰胺质量浓度高于300g／L时,将对酶活性产生强烈的抑制作用;在较低温度下,采用底物流加及酶流加方法能保持较高的酶活性。当菌悬液体积分数为10％、反应温度为20℃、流动加入时,最终生成丙烯酰胺的质量浓度为366g/L,与菌悬液一次性加入相比,丙烯酰胺质量浓度提高23％。     

曲利本蓝与阿米卡星相互作用的共振瑞利散射光谱及其应用

硫酸阿米卡星(AMK)是一种氨基糖苷类抗生素,对多数肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌及其他假单胞菌、不动杆菌属、产碱杆菌属等有良好作用,虽然其抗菌活性较庆大霉素略低,但其突出的优点是对许多肠道革兰阴性杆菌所产生的氨基糖苷类钝化酶稳定,不会为此类酶钝化而失去抗菌活性.     

高效液相色谱用于生物催化法生产对苯二甲酸过程中菌种的筛选

在生物催化法生产对苯二甲酸(PTA)菌种的筛选过程中,建立了高效液相色谱法测定某些假单胞菌的发酵液中对苯二甲酸及中间产物对羧基苯甲醛(4-CBA)、对甲基苯甲酸(p-TOL)的分析方法。优化了色谱条件,在6 min之内完全分离PTA及与其结构类似的4-CBA、p-TOL。本法测定PTA的线性范围为0.2~200μg/mL,线性相关系数为0.9998,相对标准偏差为1.52%。     

丙烯腈催化二聚反应的研究进展

丙烯腈是廉价易得的化工原料.丙烯腈的线性二聚可以构建己(烯)二腈分子骨架,经过进一步的加氢还原可制备己二胺.己二胺是重要的工业中间体,有着广泛的用途和广阔的市场,主要用于合成尼龙66.因此,丙烯腈的线性二聚是非常重要的有机化学反应.与已经实现工业化的电解法相比,催化二聚有着能耗低、装置要求低等优点.除此之外,丙烯腈催化二聚还可能生成非线性聚合产物2-亚甲基戊二腈.它是生产广谱抗菌剂溴菌腈的重要中间体.溴菌腈的市场需求量虽然不如尼龙66巨大,但也是重要的化工产品之一.然而,在丙烯腈的催化二聚领域,至今未有系统性的综述报导.对丙烯腈催化二聚反应的研究进展进行整理与系统性地阐述,按照催化剂种类,主要分为钌催化、其它金属催化以及膦催化二聚等三部分,供国内相关领域技术人员参考.     

丙烯腈和丙烯酰胺在浓硫氰酸钠水溶液中的共聚合

本文研究了丙烯腈和丙烯酰胺在52％NaSCN水溶液中的共聚合,主要就介质的pH值对共聚合反应的影响做了初步的探讨. 实验采用克分子比为15:85的丙烯酰胺(AAm)和丙烯腈(AN)的单体组成以偶氮二异丁腈(ABN)作为引发剂.在52％NaSCN水溶液中配成8%的溶液,用硫酸、氢氧化钠、醋酸调至所要的pH值,pH值是用雷磁24型酸度计测量的.在聚合管中,通氮除掉体     

2,3,4,6-四-O-苄基井冈霉烯胺的合成

1972年,Kameda Y等人[1]从脱氮假单胞菌Pseudomonas denitrificans的降解产物中分离得到井冈霉烯胺(valienamine),其半椅式构象能模拟酶催化糖苷键水解的氧碳鎓正离子中间体(见图1),是a-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖、伏格列波糖的药效必需结构团.     

细菌胞外液生物合成纳米硒的理化性质及抗菌活性研究

本文以一株海洋菌株Bacillus sp.Q72的胞外液为还原体系,实现了Se(Ⅳ)到纳米硒(SeNPs)的生物转化。利用FTIR、UV-Vis、XRD、SEM、TEM、XPS、拉曼光谱、粒度分析等对生物合成SeNPs的理化性质进行了研究,随后考察了SeNPs的抗菌活性和细胞毒性。结果表明,菌株Bacillus sp.Q72胞外液生物合成的SeNPs为球型,平均粒径为187.6nm,其表面包覆着蛋白质、核酸等生物大分子。SeNPs对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌均表现出较好的抑菌活性,同时具有较低的细胞毒性。利用细菌胞外液生物合成纳米硒,避免了利用菌体直接还原在分离过程中的繁琐操作,为SeNPs的生物合成提供了新方法。     

光合细菌氢支持固氮活性的天然电子载体

本文证明整体英膜红假单孢光合菌Rhodospseudomonas Capsulata的氢酶有再循环利用分子氢,支持固氮活性的功能。从这个菌分离的铁氧还蛋白若以分子氢为电子供体,可被细菌自身的氢酶催化还原。分子氢-氢酶系统产生的还原力经Fd可偶联于固氮酶的乙炔还原反应。从荚膜红假单孢菌的粗提液分离到一个天然分部,具有电子载件的功能,参与分子氢-氢酶系统和固氮酶乙炔还原活性之间的电子传递。在这一天然分部内分离提取了一个低电位的细胞色素C_3,并检测出了NADPH专一、偶联甲基紫精的黄递酶活性。本文对Fd-细胞色素C_3复合体作为荚膜红假单孢菌的电子载体系统参与氢代谢和光合固氮间的联系的可能机理进行了讨论。     

铜绿假单胞菌PAO1Ⅲ型分泌系统新型抑制剂的合成和生物活性研究

铜绿假单胞菌PAO1是一种革兰氏阴性机会性人类病原菌,易感染免疫受损的人群.Ⅲ型分泌系统(Type threesecretion system,T3SS)是其主要的致病因子.T3SS抑制剂的策略是抑制铜绿假单胞菌表达及分泌毒力蛋白,阻止其对宿主细胞的侵染.在一种已知T3SS抑制剂的结构基础上,设计和合成了20种α-苯氧基酰胺新衍生物,系统研究了它们的构效关系,研究表明有5种新衍生物对铜绿假单胞菌的一个效应子编码基因exoS的表达具有明显抑制作用.其中N-(2-吡啶基甲基)-2-(2,4-二氯苯氧)-丁酰胺(5r)的活性强于已知的抑制剂MBX1641,并具有很好的水溶性.     

研究阐述尼古丁等环境毒物降解机制

<正>近期,上海交通大学生命科学技术学院教授许平团队在微生物分解代谢研究领域获得突破,进一步阐明尼古丁等环境毒物的降解机制。日前,相关研究成果以封面论文形式发表于《分子微生物学》。在烟草加工过程中会产生大量富含尼古丁等烟碱类化合物的固体和液体废弃物,这些物质易进入地下水,并对环境造成一定的影响,因此降低烟草废弃物中尼古丁含量对于保护环境有着重要的意义。恶臭假单胞菌S16能够以尼古丁作为底物生长并将其完全矿化,在降低烟草中尼古丁含量和处理烟草废物的过程中发挥重要作用。课题组成员在研究假单胞菌属中参与重要环境毒物尼古丁分解代谢     

胶体铜催化丙烯腈水合的高选择性及其活性中心结构的研究

研究了胶体铜催化丙烯腈水合制丙烯酰胺的高选择性与活性中心结构的关系. 在聚乙烯吡咯烷酮(PVP)保护下, 用肼和氢氧化钠混合液还原CuCl2制得胶体铜, 用其催化丙烯腈水合反应, 选择性达到100％, 产生高选择性的原因如下: (1) 胶体铜的活性中心不是胶粒表面的点缺陷, 而是胶体铜颗粒表面的位错端点. (2) 由于胶体铜具有高硬度和高强度的力学特性, 保证了活性中心结构的稳定性; 胶体铜颗粒的平均粒径(45 nm)超过晶粒的特征长度, 进一步保证了活性中心的稳定性.     

含三元环腈的生物转化反应与应用*

腈的对映选择性生物转化反应是合成高光学活性羧酸及其酰胺衍生物的有力手段。 本文介绍了在红球菌AJ270催化下,一系列含三元环结构的腈,包括环丙腈、环氧丙腈和氮杂环丙腈的生物转化反应。提出了腈水合酶和酰胺水解酶酶活中心的假设,即腈水合酶可能位于比较疏散的立体空间环境中,而酰胺水解酶则处于相对深埋的位置且空间大小有限。另外本文还探讨了腈的生物催化反应在天然产物及生物活性分子合成中的应用。     

内酯酶产生菌的筛选及其催化拆分手性内酯的性能

以γ-丁内酯系列化合物作为唯一碳源,通过富集培养从土壤中分离得到180株产内酯酶的菌株.经反复筛选,从中挑选出两株内酯水解活性和选择性均较高的菌株.经鉴定,这两株真菌皆为镰孢霉菌属,分别命名为Fusarium moniliformeECU2001和Fusarium prollyeratum ECU2002.对这两株菌的产酶特性进行了研究,发现ECU2001的内酯酶属于胞内酶,而ECU2002的内酯酶同时存在于胞内和胞外.选择戊二醛交联的方法对这两株菌进行了细胞固定化,结果表明,ECU2002固定化细胞的活力、选择性和稳定性都优于ECU2001.ECU2002固定化细胞反应的适宜温度和pH分别为50℃和7.0～7.5.考察了ECU2002固定化细胞的底物专一性,发现底物为α-羟基-γ-丁内酯时,固定化细胞的活性最高,其催化速率是γ-丁内酯的54.3倍.利用ECU2002固定化细胞催化α-羟基-γ-丁内酯的对映选择性水解,固定化细胞重复使用10批后活力仍保持为初始活力的92.8%,水解产物经内酯化后得到(R)-α-羟基-γ-丁内酯的光学纯度为92.8%～96.1?.