基于色谱法的超螺旋质粒DNA纯化与分析进展

质粒DNA含有独立复制的遗传结构,是基因工程的常用工具,广泛应用于分子生物学基础研究、农业转基因检测、医疗诊断与基因治疗等领域。质粒DNA的构型一般分为超螺旋、开口环状及线性3种。初步纯化的质粒DNA溶液中常混有3种构型,并且掺杂一定量的蛋白质、RNA、内毒素以及宿主基因组DNA,这些杂质会影响后续的应用,因此质粒DNA需要进一步精细纯化。该文对质粒DNA的新应用领域、基于色谱的精细纯化技术及产物质量分析体系进行了综述,并展望了高纯度质粒DNA精细纯化及产物分析的发展方向。     

亲和色谱纯化超螺旋质粒DNA的研究进展

非病毒载体质粒DNA已被广泛应用于基因治疗和DNA疫苗,目前迫切需要开发其大规模制备和分离纯化方法。亲和色谱是一种高分辨率、高选择性的分离技术,在蛋白质、抗体、核酸等生物大分子的分离纯化方面显示了良好的应用前景。本文综述了亲和色谱技术在超螺旋质粒DNA分离纯化中的研究进展,总结了各种亲和色谱方法分离超螺旋质粒DNA的机理和优缺点,并展望了亲和纯化技术在质粒DNA生产和制备中的应用前景。     

利用高效弱阴离子交换色谱法纯化超氧化物歧化酶

利用高软弱阴离子交换色谱法简化了超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的纯化手续。在丙酮沉淀后,仅用一步色谱分离就能使来自牛血的Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ达到电泳纯,活性回收率为８６．４％,比活为７７１１Ｕ／ｍｇ,纯化倍数提高至５２倍。此外,详尽讨论了色谱分离的条件。     

强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱纯化血清中免疫球蛋白和白蛋白

动物血清中免疫球蛋白和白蛋白的等电点分别约为7.8和4.8,根据它们等电点的较大差别,利用Q SepharoseTM-XL强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱同时分离纯化这2种蛋白。以0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液平衡离子交换色谱柱并将已稀释10倍的高免疫的兔血清上样,采用pH分段洗脱。在pH 6.0时以0.3 mL/min低流速洗脱得到高纯度的免疫球蛋白,继续在pH 4.0时洗脱,再辅以Sephadex G-75分子排阻色谱可获得纯度大于95%的白蛋白。对纯化后的蛋白进行活性检测,证明所纯化的免疫球蛋白和白蛋白都保持正常的生物活性。蛋白质含量测定说明免疫球蛋白的纯化回收率达到95%以上,而白蛋白的纯化回收率大于90%。该法简便快速,可同时从动物血清中纯化出保持生物活性的免疫球蛋白和白蛋白,纯化效率高。     

Co2+、Zn2+、Cd2+的阴离子交换色谱法分离研究

本文对钴与锌、镉等金属离子的阴离子交换色谱法分离进行了研究．采用201×7型阴离子交换树脂经氧化铵溶液饱和后,在pH＝4．0时,使钴与其它金属离子分离,然后分别用0．02mol／L的盐酸溶液及蒸馏水将锌、镉等金属离子从阴离子交换树脂上洗脱．此法分离效果好,操作简单方便．     

强阴离子色谱法从毕赤酵母培养液中分离纯化重组巴西日圆线虫乙酰胆碱酯酶

提出了一种从基因工程毕赤酵母(Pichia pastoris)培养液中分离纯化重组巴西日圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)乙酰胆碱酯酶(NbAChE)的方法。采用Q-Sepharose Fast Flow强阴离子交换色谱柱对重组NbAChE进行了分离纯化。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,纯化物的活性峰为单一蛋白质带,其相对分子质量约为66000。该方法的活性回收率为52.6%,纯化因子为3.87;纯化后AChE的比活为 2837 U/mg。结果表明,该法是一种理想的分离纯化重组NbAChE的方法。     

内毒素的去除策略

革兰氏阴性菌的致病性以及革兰氏阴性菌脓毒血症时出现的毒性表现是与牢固结合在其细菌外膜中的一种大分子物质即内毒素密切相关的,文章主要介绍了内毒素的本质和它的危害,并根据该课题组在此领域多年的研究经验,介绍了内毒素的去除策略。     

离子色谱法测定蓝藻培养液中有机酸和无机阴离子

建立了一种利用阴离子交换色谱柱分离,电导检测器同时测定17种有机酸和7种阴离子的方法。采用Ionpac AS11-HC阴离子交换柱,KOH溶液作为淋洗液,梯度洗脱,流量为1.0mL/min,柱温为30℃,进样体积为25μL。24种分析物测定结果的相对标准偏差在0.31%~2.67%之间,线性相关系数均大于0.996,平均加标回收率在80.3%~108.5%之间。该方法可用于微生物培养液中有机酸和阴离子的同时测定。     

阴阳离子交换色谱串联分离纯化苦瓜籽核糖体失活蛋白

将阴阳离子交换色谱柱在灌注色谱工作站上串联,使苦瓜籽粗提液中未被阴离子色谱柱吸附的蛋白质直接在阳离子色谱柱上吸附,用盐线性梯度洗脱从阳离子色谱柱上分离出两个具有抗真菌活性的蛋白。两个抗真菌蛋白经鉴定都达到了电泳纯,相对分子质量均为30000左右,N-端氨基酸序列分别为DVSFRLSGADPRSYGMFI与DVNFDLSTATAK,表明所得到的两种蛋白为苦瓜籽中的2个Ⅰ型核糖体失活蛋白α-苦瓜素(α-MMC) 和β-苦瓜素(β-MMC)。抗菌实验表明,α-MMC对香蕉枯萎菌和果腐霉菌均具有较强的抑制作用,β     

双抑制在线基体去除-离子色谱法测定电池级碳酸锂中痕量阴离子

建立了一种测定电池级碳酸锂中痕量阴离子的方法。用超纯水超声辅助溶解碳酸锂,采用在线基体去除法去除碳酸锂基体,基体去除过程中,样品首先流入到ADRS600(4 mm)抑制器(抑制电流150 mA,抑制器再生液外接水流速2 mL/min)中,在抑制器内通过离子交换膜作用,碳酸锂中的锂离子与氢离子置换,碳酸锂变成碳酸;然后经过CRD 200(4 mm),碳酸以二氧化碳的形式排出离子色谱系统,从而达到去除碳酸锂基体的目的;最后待分析阴离子被自动富集在IonPac UTAC-LP2浓缩柱(35 mm×3 mm)上,通过阀切换技术将阴离子自动转移到色谱分析系统中。在色谱分析系统中,以IonPac AG18(50 mm×2 mm)为保护柱,IonPac AS18(250 mm×2 mm)为分析柱,柱温箱为30℃, KOH溶液为淋洗液进行梯度洗脱,泵流速0.30 mL/min,抑制器为ADRS600(2 mm),抑制电流25 mA,进样体积为250μL,检测器为电导检测器。结果显示：F^-、Cl^-、NO₂^-、Br     

Clouding Behavior and Thermodynamic Study of Nonionic Surfactants in Presence of Additives

The present study investigates the effect of different additives on the cloud point (CP) of nonionic surfactants Triton X-100 (TX-100) and Triton X-114 (TX-114) in aqueous solutions. The thermodynamic parameters of these mixtures were calculated at different additive concentrations. The cloud point of nonionic surfactants TX-100 and TX-114 decreased with the increment of electrolyte concentrations and increased with alcohol concentrations. The standard Gibbs free energy was found to be positive for both the surfactants, whereas the enthalpy and the entropy of the clouding phenomenon were found to be positive with alcohols and negative with electrolytes. The overall clouding process was endothermic for alcohols and exothermic for electrolytes.     

Triton X-100增敏光度法测定铝土矿中的微量钪

研究了在HCl溶液中微量钪(Ⅲ)-偶氮氯膦Ⅲ(CPAⅢ)之间的配合反应。结果表明,在0.5mol/LHCl溶液中和TritonX 100的存在下,有色溶液的最大吸收波长为680nm,表观摩尔吸光系数为2.62×104L·mol-1·cm-1。钪(Ⅲ)质量浓度在0～0.45mg/L范围内符合比耳定律,钪(Ⅲ)的加标回收率在98.0%～105.1%之间,RSD(n=6)为2.1%～2.6%。可用于铝土矿中的微量钪的测定。     

浊点萃取预富集火焰原子吸收光谱法测定水样中痕量镍

以1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚为络合剂,在pH 7.0,用Triton X-100非离子表面活性剂浊点萃取水样中痕量镍.表面活性剂相用硝酸-甲醇(1 9)混合液0.5 mL分散,所得溶液直接引入仪器进行火焰原子吸收测定,方法的检出限(3σ)为3.77×10-3mg·L-1,应用所提出方法测定了河水样品,测定结果的相对标准偏差(n=6)为2.98%.     

浊点萃取-火焰原子吸收光谱法测定催化剂中痕量钯的研究

研究了以1-（2-吡啶偶氮）-2-萘酚（PAN）为络合剂,以非离子型表面活性刺Triton X-100为萃取剂的浊点萃取分离富集-火焰原子吸收光谱法测定痕量钯的新方法。详细考察了溶液的pH、络合剂和表面活性剂浓度、平衡温度和时间等条件对浊点萃取效果的影响。该方法对钯的检出限为30．8ng／mL,相对标准偏差（RSD）为2．1％（n=10）,回收率在97．8％-106．6％之间。可用于催化剂中Pd（Ⅱ）的测定。     

AOT/Triton X-100混合反胶束体系中假丝酵母脂肪酶催化蓖麻油水解的活性

研究了二(2-乙基己基)琥珀酸磺酸钠(AOT)/Triton X-100混合反胶束体系中假丝酵母脂肪酶(candida rugosa lipase)催化蓖麻油水解的反应. 考察了Triton X-100占总表面活性剂的摩尔分数(x(Triton X-100))、水与总体表面活性剂的摩尔比(ω0)、pH值、反应温度以及底物蓖麻油的浓度等因素对酶活性的影响. 研究结果表明, 加入非离子表面活性剂Triton X-100可以使假丝酵母脂肪酶的活性得到显著提高, 但是当底物蓖麻油的浓度大于0.24 mol·L-1时, 会对假丝酵母脂肪酶产生抑制作用.     

TritonX-100-5-Br-PADAP光度法测定发样中铁

在表面活性剂Triton X-100存在下,以5－Br-PADAP作显色剂,光度法测定发样中铁,结果在所选浓度范围内线性关系良好,稳定时间长,回收率平均为98．14％。     

The effects of various foreign substances on the cloud point of Triton X 100 and Triton X 114

The nonionic surfactants Triton X 100 and Triton X 114 form isotropic micellar solutions around 25°C. One of the characteristic features of these solutions is the fact that at higher temperatures they undergo clouding and liquid-liquid phase separation. Addition of various additives to the surfactant solutions does change the temperature at which the clouding phenomenon occurs. In this paper such effect of additives on the clouding phenomenon of Triton X 100 and Triton X 114 are discussed.     

聚氧乙烯型非离子表面活性剂Triton X-100和Tween-60的毛细管超临界流体色谱分析

对辛基苯酚惭烯型非离子表面活性剂ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪?酯型非离子表面活性剂Ｔｗｅｅｎ－６０进行毛细管超临界流体色谱法（ＣＳＦＣ）分析条件的研究，用ＣＳＦＣ连接通用型ＦＩＤ检测器研究了二种表面活性剂的组成和分子量，实验结果表明，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００中含量最多的低聚物的ＥＯ数（聚合的环氧乙烷数目）为９－１０，分子量约６００，Ｔｗｅｅｎ－６０的分子量约为１５００，与理论计算值     

Triton X—100—DPSA法测定血铅

着重研究了在微分电位溶出法测定血铅中加入ＴｒｉｔｉｏｎＸ－１００非离子型表面活性剂的效果，发现它能改善溶出峰形，减少误差，明显地提高分析的灵敏度，铅溶出峰与浓度在０．００２～０．０１ｍｇ／Ｌ范围呈线性关系，回归方程式和相关系数为ｙ＝１４．５７＋７５７．１４ｘ，ｒ＝１，其相关系数比原法稍有提高，变异系数７．１％，回收率９６．８％～１０３．９％，本法取血量少，血样经微汉消解即可测定，简便快速准确，便基     

Triton X－100－（NH_4）_2SO_4－H_2O液－固萃取体系中以N

ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的盐水溶液会分成聚合物固相和盐水相。这是一种新的非有机溶剂液－固萃取体系。研究了在该萃取体系中用ＮＨ４Ｉ作萃取剂，Ｐｄ（Ⅱ）、Ｂｉ（Ⅲ）、Ｚｎ（Ⅱ）和Ｆｅ（Ⅲ）等金属离子的萃取行为。实现了Ｂｉ（Ⅲ）—Ｆｅ（Ⅲ）和Ｐｄ（Ⅱ）—Ｚｎ（Ⅱ）间的定量萃取分离与测定。实验结果表明，金属离子与Ｉ－形成络阴离子被萃入聚合物固相。