Preparative enantioseparation of (±)-N-(3,4-cis-3-decyl-1,2,3,4-tetrahydrophenanthren-4-yl)-3,5-dinitrobenzamide by centrifugal partition chromatography

The racemic compound (±)-N-(3,4-cis-3-decyl-1,2,3,4-tetrahydrophenanthren-4-yl)-3,5-dinitrobenzamide ((±)-1), an analogue of increased lipophilicity of the chiral selector (CS) contained in the Whelk-O^® HPLC chiral stationary phase (CSP) has been resolved into its enantiomers by applying centrifugal partition chromatography (CPC). Considering the known enantioselectivity of the Whelk-O^® CS for naproxen, and the reciprocity concept in enantioseparation, (S)-naproxen related compounds were tested as CSs. In the search for an adequate solvent system, the partition behaviour of the two solutes, CS and racemate, has been studied using several biphasic solvent mixtures. The optimal CS concentration and sample loading capacity were determined in the chosen solvent system. The search for an appropriate CS and solvent system, the scale-up and optimization of the enantiomer separation by CPC, as well as the rationale for the unexpected elution order of enantiomers, are here described. The comparison of the preparative CPC separation achieved with that in HPLC, using a CSP containing an analogous CS, resulted favourable to the former in terms of loading capacity, solvent consumption and throughput.     

Chiral separations in microemulsion electrokinetic chromatography. Use of micelle polymers and microemulsion polymers

In this study, microemulsions of the chiral surfactant polysodium N-undecenoyl-D-valinate (poly-D-SUV) was utilized for enantiomeric separation by investigating two approaches using polymeric chiral surfactant in microemulsion electrokinetic chromatography (MEEKC). In the first approach, poly-D-SUV was used as an emulsifier surfactant along with 1-butanol and n-heptane. Enantioseparation of anionic or partially anionic binaphthyl derivatives, anionic barbiturates, and cationic paveroline derivatives were achieved by varying the mass fraction of 1-butanol, n-heptane and poly-D-SUV. For anionic or partially anionic analytes, relatively lower mass fractions of n-heptane, and poly-D-SUV were found to give optimum chiral separations as compared to that for cationic solutes. In the second approach, the chiral microemulsion polymer was prepared by polymerizing mixtures of 3.50% (w/w) of sodium N-undecenoyl-D-valinate (D-SUV) and 0.82% (w/w) of n-heptane (core phase) at varying concentration of 1-butanol. After polymerization, the n-heptane and 1-butanol were removed to yield solvent free microemulsion polymers (MPs) which were then utilized for the separation of anionic binaphthyl derivatives and anionic barbiturates. When MPs of D-SUV were utilized for chiral separation, 1.00% (w/w) 1-butanol and 3.50% (w/w) 1-butanol was optimum for enantioseparation of (+/-)-BNP and (+/-)-BOH, respectively. On the other hand, for anionic (+/-)-barbiturates very low concentration of butanol (0.25%, w/w) provided optimum resolution. Compared with micellar electrokinetic chromatography (MEKC), the use of micelle polymers or microemulsion polymers in MEEKC showed dramatic enhancement for resolution of (+/-)-BNP, while this enhancement was less dramatic for other binaphthyls [(+/-)-BOH, (+/-)-BNA] as well as for (+/-)-barbiturates and (+/-)-paveroline derivatives. However, higher separation efficiency of the enantiomers was always observed with MEEKC than in MEKC.     

高效逆流色谱法制备苏木中的氧化巴西木素

氧化巴西木素是苏木的主要化学成分之一,具有广泛的药理活性且常作为染色剂应用于各行各业。采用传统柱色谱法进行分离,不仅会造成色谱柱材料的污染,也会造成活性成分的损失。故采用高效逆流色谱(HPCCC)对苏木中的活性化合物氧化巴西木素进行分离纯化。苏木乙醇提取物经乙酸乙酯萃取后直接进行高效逆流色谱分离。首先利用基于薄层色谱的常用溶剂体系估算法和摇瓶法结合高效逆流色谱分析模式进行溶剂体系筛选。结果表明,最佳溶剂体系为氯仿-甲醇-水(4∶3∶2, v/v/v)。高效逆流色谱以反相模式为洗脱模式,主机转速为1600 r/min,流速为10 mL/min,分离温度为25 ℃,检测波长为285 nm,在氯仿-甲醇-水(4∶3∶2, v/v/v)溶剂体系下,从500 mg苏木乙酸乙酯萃取物中一次性分离制备得到15.2 mg纯度为95.6%的氧化巴西木素及一微量成分caesappanin C。采用高效逆流色谱分离制备氧化巴西木素,可避免苏木中的活性成分氧化巴西木素对色谱柱中的固体填充材料染色和难以洗脱等问题,并缩短分离纯化工作时间,提高工作效率。故可将高效逆流色谱应用到苏木中其他色素化合物或其他染料植物的分离制备工艺研究中。     

水包油型微乳液相色谱分离激素类药物的影响因素

采用水包油型微乳液相色谱(MELC)分离了6种激素类药物(醋酸可的松、泼尼松龙、己烯雌酚、炔雌醇、醋酸氟轻松及黄体酮)。考察了微乳流动相的组成成分(包括表面活性剂的浓度、油相种类、有机添加剂种类)及固定相孔径等对分离的影响。实验得到的最佳分离条件: 色谱柱为Venusil ASB C18 (T)(粒径5 μm,孔径30 nm,250 mm×4.6 mm),微乳流动相为30 g/L十二烷基硫酸钠(SDS)-0.8%正辛烷-6.6%正丁醇,流速为0.8 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为35 ℃。该方法可用于甾体药物及其制剂的分离鉴别以及快速测定。     

Retention of fluorinated chiral selectors in biphasic fluorinated solvent systems and its application to the separation of enantiomers by countercurrent chromatography

Ethoxynonafluorobutane (ENFB) has been used as a component of new biphasic solvent mixtures. The suitability of several mixtures as solvent systems in countercurrent chromatography was tested. The applicability of the ENFB/2-PrOH/H₂O mixture to the separation of enantiomers, in combination with a fluorinated chiral selector (CS), was evaluated. N-Perfluoroundecanoyl-l-proline-3,5-dimethylanilide (2), analogous to the previously used N-dodecyl-l-proline-3,5-dimethylanilide (1), was synthesized for this purpose. The capacity of the new solvent system to retain the fluorinated CS in the fluorinated phase used as stationary was examined. Chiral selector 1 was applied in analogous conditions for comparative purposes. Additionally, MTBE/phosphate buffer solvent system was also used with the two CSs. The ENFB/2-PrOH/H₂O (25:35:40) mixture was found to be adequate in the enantioseparation of DNB-Leu and DNB-Leu-tBu. Enantioselectivity was maintained in the fluorinated solvent system without compromising eluting time. The complete separation of DNB-Leu-tBu was achieved and no leaks of CS to the mobile phase were detected.     

基于轻质萃取剂的溶剂去乳化分散液-液微萃取-气相色谱法测定水样中多环芳烃

以密度小于水的轻质溶剂为萃取剂,建立了无需离心步骤的溶剂去乳化分散液-液微萃取-气相色谱(SD-DLLME-GC)测定水样中多环芳烃的新方法。传统分散液-液微萃取技术一般采用密度大于水的有机溶剂为萃取剂,并需要通过离心步骤促进分相。而本方法以密度比水小的轻质溶剂甲苯为萃取剂,将其与丙酮(分散剂)混合并快速注入水样,获得雾化体系;然后注入乙腈作为去乳化剂,破坏该雾化体系,无需离心,溶液立即澄清、分相;取上层有机相(甲苯)进行GC分析。考察了萃取剂、分散剂、去乳化剂的种类及其体积等因素对萃取率的影响。以40 μL甲苯为萃取剂,500 μL丙酮为分散剂,800 μL乙腈为去乳化剂,方法在20～500 μg/L范围内呈现出良好的线性(r2=0.9942～0.9999),多环芳烃的检出限(S/N=3)为0.52～5.11 μg/L。用所建立的方法平行测定5份质量浓度为40 μg/L的多环芳烃标准水样,其含量的相对标准偏差为2.2%～13.6%。本法已成功用于实际水样中多环芳烃的分析,并测得其加标回收率为80.2%～115.1%。     

超声波提取-固相萃取-液相色谱-串联质谱法同时测定沉积物中24种皮质类固醇激素

沉积物中皮质类固醇激素(CSs)的痕量分析对探究其在环境多介质中的赋存状况和环境行为具有重要意义.然而目前相关研究主要集中在水样中糖皮质激素的测定,对基质更为复杂的环境固体样品中CSs的定量分析研究仍十分有限亦缺乏针对性、系统性,且目标物未能覆盖大多数常见常用的糖/盐CSs.本研究系统地优化了样品前处理过程和仪器分析中...     

高速逆流色谱法制备罗汉果根中葫芦素类化合物

葫芦素作为四环三萜类化合物广泛存在于葫芦科植物中,但其含量较低、结构相似,采用常规的柱层析分离法较难得到大量、高纯度的单体化合物,导致其活性的研究与应用受到限制.研究采用高速逆流色谱法(HSCCC),建立了一种从罗汉果根提取物中制备葫芦素类化合物的方法.罗汉果根乙醇提取物经HPD-100大孔树脂、MCI、RP-C18柱...     

高效液相色谱法分离和测定小麦中的5种内源激素

建立了高效液相色谱法(HPLC)用于分离和测定小麦中的吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA₃)、玉米素(ZT)和水杨酸(SA)5种植物内源激素。经过条件优化,选用甲醇作为样品提取溶剂。然后,经石油醚和乙酸乙酯萃取,经Sep-Pak C18小柱纯化。液相色谱的分离采用Eclipse XDB-C₁₈ (250 mm×4.6 mm, 5 μm)反相色谱柱;流速为1 mL/min;进样量10 μL。检测器波长设置为254 nm; 14.5 min时切换到240 nm; SA洗脱后即18 min时切换回254 nm。流动相A为甲醇,B为乙酸溶液(pH 3.6)。梯度条件为0~7 min, 20%A; 7~10 min, 20%A~28%A; 10~17 min, 28%A; 17~19 min, 28%A~40%A; 19~35 min, 40%A。结果表明,小麦中各激素的分离效果理想,加标回收率达96.9%~98%,相对标准偏差在1.54%~2.29%之间。因此,该方法的建立为快速、准确地分离和测定小麦内源激素提供了可靠的方法。     

Gel Chromatography of Metal Acetylacetonates in Organic Solvents

Abstract

Tris (acetylacetonato)cobalt(III) and tris(acetylacetonato)-chromium(III) have been eluted by gel chromatography through styrene-divinylbenzene copolymer gel using an organic solvent as an eluent. Elution counts of these chelates in these solvents reflect some mutual interactions between metal chelate, gel and solvent. When benzene or chloroform was used as an eluent, sieving effect seems to be dominant for the separation of these chelates. Discussions were done in relation to solubility parameters of the solvent, the complex and the gel.     

纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）手性固定相拆分氨鲁米特对映体

以纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）为手性固定相（Chiralcel OD-H）在高效液相色谱上拆分了氨鲁米特对映体。通过测定氨鲁米特在正己烷/乙醇和正己烷/异丙醇中的溶解度,优选了对样品溶解度大的流动相体系,并考察了流动相添加剂乙醇胺对拆分效果的影响。在此基础上进一步研究了流动相中乙醇含量、柱温和进样量对分离因子、分离度、不对称因子和理论板数的影响,从而确定了最佳的拆分条件：固定相为Chiralcel OD-H,流动相为正己烷/乙醇/乙醇胺（体积比为30：70：0.1）,柱温25℃。本文所得结果可为工业放大提供基础数据。     

中空纤维液相微萃取-高效液相色谱法测定纺织品中10种含氯苯酚类化合物

建立了中空纤维液相微萃取-高效液相色谱法测定纺织品中10种含氯苯酚类化合物的方法。系统地优化了影响萃取效率的因素,得到的最佳萃取条件为：萃取溶剂为正己烷,接受相NaOH溶液的浓度为0.10 mol/L,萃取时间为60 min,搅拌速度为600 r/min。在最佳萃取条件下,10种含氯苯酚在0.01～1.00 mg/L范围内线性关系良好（r>0.999）,10种含氯苯酚的检出限（信噪比为3）为0.01 mg/kg,富集倍数为95～101。在空白样品中添加0.01、0.05和0.1 mg/kg 3个不同水平的10种含氯苯酚类化合物,其平均回收率为78.8%～105.1%,相对标准偏差为0.3%～7.3%。研究结果表明该方法灵敏度高、简便、准确,可用于纺织品中含氯苯酚类化合物的测定。     

高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷及其代谢物的含量（英文）

研究了三磷酸腺苷(ATP)及其代谢物在细胞内的含量以及2-叔丁基-1,4-苯醌(TBBQ)对ATP及其代谢产物在细胞内含量的影响。建立了一种高效液相色谱法(HPLC)用于快速分离、检测细胞内ATP及其代谢产物(二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP))的含量。使用岛津高效液相系统及艾杰尔Venusil MP C18柱,采用等度洗脱的方式。流动相A相为50 mmol/L磷酸氢二钠和15 mmol/L三甲胺(TEA),用醋酸(HAc)调节pH至7.88;流动相B相为甲醇。采用建立的高效液相色谱法得到了3种代谢物的工作曲线,相关系数高(R~2≥0.999 6),MRC-5细胞中3种代谢物的含量均在线性范围(0.1~100μmol/L)内。该方法检出限低。采用预冷的80%(体积分数)甲醇水溶液提取细胞内的代谢物。该研究建立的方法成功地应用于检测MRC-5细胞中的ATP、ADP和AMP的含量,结果表明,TBBQ会对ATP、ADP、AMP在细胞内的含量产生影响,但TBBQ浓度和ATP、ADP以及AMP在MRC-5细胞内浓度的关系比较复杂。     

正交设计试验优化高速逆流色谱分离制备玛咖中芥子油苷的条件

基于高速逆流色谱（HSCCC）技术从玛咖中分离制备出两种芥子油苷,苄基芥子油苷（glucotropaeolin, GTL）和甲氧基苄基芥子油苷（glucolimnanthin, GLI）。使用正交设计试验对分离条件进行优化,采用高分辨质谱对制备的组分进行鉴定,采用高效液相色谱法（HPLC）对组分进行定量分析。确定了两个组分GTL与GLI的HSCCC最佳分离条件：溶剂系统为正丁醇-乙腈-200 g/L硫酸铵溶液（1:0.5:2.4, v/v/v）,上相为固定相,下相为流动相,流动相流速2 mL/min,主机转速900 r/min,从玛咖根粗提物中一次性分离得到157.72 mg/kg纯度为97.9%的苄基芥子油苷和31.93 mg/kg的甲氧基苄基芥子油苷,固定相保留率达57.6%。该方法成本低,简便易行,样品损失量小,可大量循环进样制备。     

顶空采样-毛细管气相色谱法分析格列美脲原料药中的溶剂残留

建立了顶空采样-毛细管气相色谱检测格列美脲原料药中溶剂残留的分析方法。对产自国内8个生产厂家的格列美脲样品中有机溶剂的残留状况进行了系统评价,结合药品生产工艺信息,确定了丙酮、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、乙醇、氯仿、甲苯、1,4-二氧六环、吡啶、氯苯、乙醚、二氯甲烷、正己烷和苯等14种有机溶剂为残留检测对象。根据被测组分在色谱柱上的保留性质将其分为两类,以实现基线分离。用Supelco-Wax极性色谱柱,以乙腈为内标物,分离检测了丙酮、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、乙醇、氯仿、甲苯、1,4-二氧六环、吡啶和氯苯的残留量;用Supelco OVI-G43弱极性色谱柱,以丁酮为内标,分离检测了乙醚、二氯甲烷、正己烷和苯的残留量。14种残留组分在各自的浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.99167～0.99997,n=8),最低检出限范围为0.2～13.5 μg/g;14种残留组分检测的日间重复性(以相对标准偏差(RSD)计)为0.6%～9.2%(n=3),3种加标浓度的平均添加回收率为86.3%～104.1%(RSD为0.2%～5.3%,n=16)。实验结果表明,该方法简单、灵敏、可靠,适用于格列美脲中残留溶剂的分析确证。     

高速逆流色谱分离同分异构体

应用高速逆流色谱法对同分异构体的分离纯化进行研究。实验结果表明,以正己烷-乙酸乙酯-水(体积比为1∶10∶10)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,进行二次高速逆流色谱分离,可从茶多酚中分离出g级的儿茶素同分异构体——(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和(-)-没食子儿茶素没食子酸酯(GCG),其高效液相色谱纯度均在98%以上。选择四氯化碳-氯仿-甲醇-水(体积比为7∶3∶7∶3)为溶剂系统,下相为固定相,上相为流动相,经一次高速逆流色谱即可将药物中间体溴代苯胺同分异构体进行有效的分离。     

超高效超临界色谱分析聚合物制品中的7种添加剂

采用超高效超临界色谱(UPSFC)-二极管阵列检测器(PDA)建立了快速分析高分子材料中7种常用聚合物添加剂的方法。在检测波长为220 nm条件下,通过考察样品的稀释溶剂、流动相添加剂、柱温、背压、柱流速对分离的影响,最终确定7种添加剂分离的最优化条件：采用正己烷/异丙醇(1/1,v/v)为稀释溶剂,流动相添加剂为甲醇/乙腈(1/1,v/v),流速2 mL/min,柱温50 ℃,背压12.41~13.79 MPa条件下,7种聚合物添加剂能够在5 min之内达到完全基线分离。利用微波辅助萃取方法对实际样品中的添加剂进行提取,经UPSFC-PDA分析,7种添加剂的回收率为69.9%~118.9%,相对标准偏差(RSD,n=9)低于10%。该方法简便、快速,选择性强,能够准确快速地分析聚合物制品中的添加剂。     

环孢素A在反相液相色谱中的吸附行为及分离纯化北大核心CSCD

环孢素A(cyclosporine A,CsA)是由11个氨基酸组成的中性环状多肽,是临床拮抗器官和组织移植后排异反应的首选药物。高效液相色谱法广泛应用于CsA的分离分析,开展CsA色谱行为的研究是使用制备高效液相色谱纯化CsA的关键。该文首先在C18固定相上比较了CsA在甲醇-水和乙腈-水两种流动相体系中的保留行为,结果表明其保留时间对有机相比例变化比较敏感。控制甲醇比例在84%~88%,或者乙腈比例在75%~85%,CsA的保留因子(k)在3~7范围内。考察了上样量对CsA峰形的影响。随着上样量增加,在两种流动相体系中,CsA的峰形都由对称开始变得拖尾,保留时间前移。因此在进行CsA纯化时,需要特别注意前杂的去除情况。然后采用吸附等温线描述CsA的保留行为,当流动相中CsA的质量浓度较低时,有机相比例对溶质在固定相上的吸附量影响并不明显。随着溶质的质量浓度增加至0.5 g/L以上,有机相比例降低有助于提高CsA在固定相上的吸附量。和甲醇-水体系相比,在乙腈-水体系中固定相对溶质有更大的吸附容量。用模型对CsA的等温吸附曲线拟合,在甲醇-水体系中符合Langmuir模型,在乙腈-水体系中为Moreau模型。由模型参数可知在两种体系下,CsA在C18固定相上均为单层吸附,区别在于乙腈-水体系中CsA会产生较大的分子间作用力。最后,实验采用0~60 min 65%~75%乙腈、60~80 min 75%乙腈的条件开展了环孢素A纯化的探索实验,可将CsA的杂质控制在0.2%以下。本研究结果对采用制备高效液相色谱纯化CsA具有指导意义。     

键合型聚丙烯酰胺衍生物手性固定相的制备与手性识别性能

高效液相色谱(HPLC)被广泛认为是分离制备光学纯单一对映体的最有效方法。在高效液相色谱手性拆分中,手性固定相(CSP)的性能直接影响到色谱柱的手性分离能力。在众多手性固定相中,键合型手性固定相具有溶剂耐受性好,分离模式灵活等优点,已经发展成为一类重要的手性固定相。本文通过两步化学反应合成了新型的光学活性丙烯酰胺衍生物--(S)-1-丙烯酰-2-(N-苯基甲酰胺基)吡咯烷((S)-APACP),采用核磁共振氢谱表征了(S)-APACP的化学结构;通过3步化学反应制备了键合型聚丙烯酰胺衍生物手性固定相,采用热重分析法表征了聚合物的键合量,采用HPLC评价了键合型手性固定相的识别能力,分析了影响其手性识别能力的因素。研究结果表明,APACP聚合物成功地键合到硅胶表面制备了具有良好溶剂耐受性的键合型手性固定相,其聚合物键合量为10.2%~11.8%,该键合型手性固定相对若干种对映体显示了较好的手性识别能力。     

应用亲水作用色谱检测鸡蛋和肉中三聚氰胺及三聚氰酸二酰胺

应用亲水作用色谱(HILIC)对从市场上购买的鸡蛋和肉中的三聚氰胺及三聚氰胺降解产物三聚氰酸二酰胺进行了检测。采用的色谱柱为ZIC-HILIC柱,流动相为3 mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH 6.9)-乙腈(20:80, v/v),流速为0.8 mL/min,检测波长为220 nm。在该体系下,三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的保留时间适中,与样品中的内源性物质有良好的分离。样品经0.1%磷酸提取,偏磷酸及乙腈沉淀蛋白质和糖类物质,以及P-SCX固相萃取柱净化。三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺在0.4～40 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,样品定量限(按信噪比(S/N)不小于10计)为2 mg/kg,在2～10 mg/kg添加水平下的平均回收率为80%～105%,相对标准偏差小于10%。该方法具有良好的分离选择性,可用于鸡蛋和肉中三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的同时检测。