色谱最新研究亮点（第7期）

1多维分离技术新进展 一维色谱是目前最常用的分离分析方法,然而对于复杂体系如蛋白质组,采用一维分离模式其分离度远远不能满足要求。Giddings理论告诉我们：对于分离机理相互正交的二维分离系统(如色谱),峰的容量应该为两个色谱柱峰容量的乘积。因此,多维分离系统是解决复杂分离体系的一个最佳选择。在多维色谱中二维气相色谱发展较快,目前全二维气相色谱仪业已商品化,其峰的容量达到104以上。而二维液相色谱,尤其是正相/反相二维液相色谱技术发展较为缓慢,其主要的技术瓶颈在于第一维色谱(正相)分离后的流动相严重干扰第二维色谱(反相)的分离。最近,中国科学院大连物理化学研究所的关亚风教授课题组研制出一种新型二维液相色谱接口真空辅助动态气化接口,并将其成功地用于正相/反相二维液相色谱系统。该接口设计简单,由一个真空辅助气化环组成。该气化环与真空泵相连构成真空辅助气化环境。在二维色谱过程中,正相色谱流出的流动相(有机溶剂)经过该接口时通过真空挥发除去,而分离组分能够流入第二维色谱柱。他们对该接口的工作条件进行了优化并对其性能进行了考察。研究表明,在第一维流动相流速达到1 mL/min时该接口能够有效地除去第一维流动相,而非挥发性分析物质在该接口中几乎没有损失。他们将构建的正相/反相二维液相色谱系统成功地用于原油和煤焦油复杂样品的分离分析。我们相信这种新型的正相/反相二维液相色谱系统在复杂体系分离分析如蛋白质组、天然药物和生物流体具有潜在的应用前景。详见: J Chromatogr A, 1 July 2010, doi: 10.1016/j.chroma.2010.06.053。 在多维分离中,二维凝胶电泳具有分离效率高的特点,目前仍然是蛋白质组学研究的重要手段之一。然而,由于二维凝胶电泳重现性差,分析时间长,不能自动化,远远不能满足当今蛋白质组学研究的要求。与传统的电泳技术相比,毛细管电泳具有分离效率高、样品用量少、分析时间短、能够自动化等特点,是发展多维电泳方法的理想选择。最近,美国华盛顿大学的Dovichi教授课题组对二维毛细管电泳模式进行了尝试,构建了等电点聚焦/十二烷基磺酸钠(SDS)区带毛细管电泳系统。该系统的分离模式与传统的二维凝胶电泳基本相近,第一维采用等电点聚焦分离模式, 第二维采用SDS区带电泳分离模式。在二维毛细管电泳中,蛋白质样品首先经过等电点聚焦分离后,依次进入第二维SDS区带电泳分离通道。 该系统第一维等电点聚焦所需时间约为420 s,在第二维分离中每一馏分样品转移时间为6 s,分离时间为180 s。与传统的二维凝胶电泳相比,二维毛细管电泳方法显著地减少了分析时间和样品用量。他们以荧光标记蛋白质为模型样品,采用激光诱导荧光检测方法对该系统性能进行了考察,获得的峰容量为125。虽然目前该二维分离系统的峰容量远低于传统的二维凝胶电泳,但是我们相信二维毛细管电泳技术应该代表着多维电泳未来的发展方向。详见: Electrophoresis, 5 July 2010, doi: 10.1002/elps.201000151。 2基于癌细胞膜的亲和色谱药物筛选 将生物分子(如酶、辅酶、抗体、抗原等)为配体固载于担体(如二氧化硅)的表面构成的亲和色谱固定相已被广泛地用于生物分子的相互作用和药物的筛选。最近,西安交通大学的贺浪冲教授课题组以细胞膜为配体,制备了一种新型的亲和色谱固定相,成功地用于天然抗癌药物有效成分的筛选。他们所用的细胞膜来自于人的皮肤鳞癌细胞 (human epidermal squamous cells, A431)。该细胞膜中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)呈现过表达现象。EGFR是一种相对分子质量为170000的跨膜糖蛋白,它对调节肿瘤细胞生长、修复和生存、新生血管生成、侵袭和转移具有重要的作用,在大多数肿瘤细胞(如乳腺癌、宫颈癌,肺癌、前列腺癌等)中呈现过表达,已经成为肿瘤治疗和抗肿瘤药物筛选的潜在靶点。该细胞膜亲和色谱原理就是基于EGFR与某些物质(如药物分子)的相互作用。 他们首先提取A431细胞膜,通过吸附作用将细胞膜固载于硅胶载体表面构成亲和色谱固定相,然后构建了基于二维液相色谱的药物筛选系统。在该系统中,第一维采用的是细胞膜亲和色谱模式,第二维采用的是反相色谱模式,紫外吸收和质谱方法分别用于各维的检测。他们将该二维液相色谱系统用于苦参萃取液中抗癌有效成分的筛选,其结果与传统的细胞培养筛选的结果基本一致。与传统的方法相比,细胞膜亲和色谱方法具有样品用量少、分析时间短、能够自动化、同时能对筛选的靶标分子进行鉴定等特点,将在新药的筛选方面有潜在的应用前景。详见: J Chromatogr A, 19 June 2010,doi: 10.1016/j.chroma.2010.06.037。 3动物组织在线液相萃取直接进样的液相色谱系统 在新药物筛选以及临床药代动力学研究过程中,全身放射自显影技术目前是用来检测药物在给药动物体内分布状况的常用方法。然而,全身放射自显影方法不能区分检测药物和它们的代谢产物。最近,美国橡树岭国家实验室的两位科研人员Kertesz和Berkel对液相色谱商品化自动进样器进行改进,构建了一种在线液相萃取表面进样系统,并成功地用于液相色谱/电喷雾离子化质谱联用系统,实现了对小鼠全身组织萃取液中药物和它们的代谢产物的分离检测。该进样系统设计简单,通过一个微型接口将一个普通注射器与自动进样器连接以实现液滴萃取模式。在实际操作时,首先将注射器中萃取剂的液滴与动物组织表面接触实现液相萃取,然后由自动进样器将萃取的样品送入液相色谱/质谱系统。他们以对剂量组和对照组小鼠整体薄层组织切片的4个不同器官(脑、肺、肾和肝脏)中药物心得安 (propranolol)的检测为例,阐明了基于在线液相萃取表面进样的分离技术联用系统的有效性。他们在剂量组小鼠的4个器官中均可检测到药物心得安,另外在肺、肾和肝脏还检测到药物心得安的两个同分异构体代谢物。实验结果与常规的离线萃取进样-液相色谱/质谱方法结果相当。该方法能够对药物在动物体内的分布状况和代谢过程进行有效的检测。通过在线液相萃取实现薄层组织切片表面进样及其与液相色谱分离分析联用扩展了液相色谱/质谱的应用范围。这一方法为新药物筛选提供了一种有效的手段。详见: Anal Chem, 18 June 2010, doi: 10.1021/ac100954p。     

二维液相色谱接口技术

二维液相色谱具有峰容量大、分辨率高、分析速度快等优点,已经成为复杂样品分离分析的重要工具。两种分离模式的转换通常需要经过一个特殊接口来完成,接口是二维液相色谱系统的核心,也是限制二维液相色谱应用的瓶颈;两种流动相不互溶时,接口尤为重要。本文针对二维液相色谱接口技术近期的发展和应用进行总结。引用文献51篇。     

《色谱联用技术》（第二版）

该书主要介绍了色谱-质谱、色谱-傅立叶变换红外光谱、色谱-原子光谱和色谱-色谱联用技术。该书简述了质谱、傅立叶变换红外光谱、原子光谱和核磁共振仪器的结构、工作原理、以及与色谱联用时对接口的一般要求。该书内容丰富，包括：液相色谱-质谱、毛细管电泳-质谱、色谱-傅立叶变换红外光谱、液相色谱-傅立叶变换红外光谱、薄层色谱-傅立叶变换红外光谱、色谱-原子光谱等联用技术，以及液相色谱-液相色谱、气相色谱-气相色谱、气相色谱-液相色谱等不同的分离模式色谱联用技术的应用实例。该书是《色谱技术丛书》之分册，在第一版基础上作了修改和充实，补充了新近发展的仪器、技术与应用实例。     

高效液相色谱讲座Ⅲ高效液相色谱仪器系统（下）

§3-2进样系统 进样系统是将待分析样品引入色谱柱的装置。对于液相色谱的进样装置,要求重复性好,死体积小,保证中心进样,进样时对色谱柱系统流量波动要小,便于实现自动化等。 进样系统包括取样、进样两个功能。而实现这两个功能又有手动和自动两种方式。     

气相和高效液相色谱法测定油菜籽（饼）中的硫代葡萄糖甙

]本文报道气相色谱和高效液相色谱法测定油菜籽（饼）中硫代葡萄糖甙的样品预处理技术和测试技术。气相色谱法采用氢焰离子化检测器,3mm×1.6m玻璃柱,2％OV-1或2％OV-7固定液,ChromosorbWAWDMCS担体（60—80目）。高效液相色谱采用4mm×250mm不锈钢柱,柱内填充YWG-C18H37(10μm±2)。流动相为3％乙腈,UV-220nm检测。GC和HPLC测定结果一致。与经典重量法对照,总量绝对误差小于1.12μmol/g。气相和液相色谱重复性试验,总量的标准偏差分别为0.10和0.67。首次指出我国油菜含有吲哚类硫代葡萄糖甙和大致含量。     

极限高压液相色谱（XPLC）系统问世

日本分光公司发布该公司最新Xlc^TM系列极限高压液相色谱(XPLC)产品。该产品系统的工作压力超过了100MPa，与Xlc^TM系列色谱柱配合使用，其分析速度、灵敏度和分析效率大大超过传统的高压液相色谱(HPLC)。同时，所有传统的高压液相色谱柱均可使用于Xlc^TM系统。     

《色谱分析概论》（第二版）

该书为再版的《色谱技术丛书》之一。该书对色谱的各个分支做了简要地阐述,概论性地介绍了色谱的基本知识、仪器概况和方法要点,在气相色谱、液相色谱和毛细管电泳方面做了较多的论述。该书在第一版的基础上,增加了“色谱定性与定量分析”和“制备色谱”两章。该书可供实验室从     

《色谱分析概论》（第二版）

该书为再版的《色谱技术丛书》之一。该书对色谱的各个分支做了简要地阐述,概论性地介绍了色谱的基本知识、仪器概况和方法要点,在气相色谱、液相色谱和毛细管电泳方面做了较多的论述。该书在第一版的基础上,增加了“色谱定性与定量分析”和“制备色谱”两章。该书可供实验室从     

芯片液相色谱技术进展

微型化是现代分析仪器发展的重要趋势.微型化液相色谱仪器在提供与常规尺度液相色谱相同甚至更高分离效率的同时,可以有效减少溶剂和样品的消耗;在液相色谱-质谱联用中,低流速进样可以有效提高质谱离子源的离子化效率,提高质谱检测效率;对于极微量样品的分离,微型化的液相色谱可以有效减少样品稀释;液相色谱的微型化还有利于液相色谱仪器...     

修正高斯模型在制备液相色谱收集区间优化中的应用

近年来制备液相色谱得到了越来越广泛的应用。制备液相色谱操作条件的优化对提高其效率及节约成本非常重要。对制备高效液相色谱而言,其样品收集区间的确定及优化是其操作条件优化的重要步骤。该文以修正高斯模型(EMG模型)为理论基础,编写了一个小软件,可有效地帮助用户确定合理的样品收集区间。此软件对制备液相色谱实际应用有积极的指导及参考意义。     

反相离子对高效液相色谱法分离测定痕量镍（Ⅱ）锌（Ⅱ）铜（Ⅱ）

用二甲酚橙作柱前衍生试剂，在Ｃ１８色谱柱上，以乙腈－水（１２：８８，Ｖ／Ｖ）作流动相，六次甲基四胺为对离子试剂，反相离子对高效液相色谱－光度法快速分离测定痕量Ｎｉ＾２＋，Ｚｎ＾２＋，Ｃｕ＾２＋配合物和试剂在８ｍｉｎ内出峰完毕，５７５ｎｍ处检测，检出限分别为（ｎｇ／ｍＬ）：Ｎｉ＾２＋０．８３，Ｚｎ＾２＋０．０１，Ｃｕ＾２＋，１．３０，用于植物样品中Ｎｉ＾２＋，Ｚｎ＾２＋，Ｃｕ＾２＋的测定，结果令人满     

高效液相色谱讲座Ⅵ化学键合相色谱（上）

6—1 意义和特点 化学键合相色谱使用的固定相是借助于化学反应的方法将有机分子以共价键连接在色谱担体上,主要用于反相、正相和部分离子交换及空间排斥色谱中。据统计.键合相色谱在高效液相色谱的整个应用中占80％左右。表6-1的数据表明它是近代柱液相色谱中最重要的一个类型。     

全自动固相萃取/高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定深海鱼中雪卡毒素残留量

建立了深海鱼鱼肉中雪卡毒素残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法。虎鳗等样品经甲醇-正己烷(4∶1)提取,HLB柱净化后,采用高效液相色谱-串联质谱分析,外标法定量。质谱分析采用电喷雾电离,正离子扫描,多反应监测模式。定性离子对为m/z 1 128.9/1 057.6、1 128.9/1 039.9、1 128.9/1 075.8。实验结果表明,HLB柱净化后基质效应明显降低,样品中添加0.01～0.1μg/kg的雪卡毒素,其回收率为70%～84%,相对标准偏差(n=6)小于7%;雪卡毒素的检出限为0.01μg/kg,定量下限为0.02μg/kg。该方法样品前处理简单、分析时间短、灵敏、可靠,适用于深海鱼中雪卡毒素含量的检测。     

微柱液相色谱中一种新的进样技术

微柱液相色谱主要指柱内径小于1毫米的液相色谱技术,是当前液相色谱发展的主要倾向之一。 微柱的柱容量小,所需样品的体积仅为10~(-7)～10~(-9)升,难以采用常规液相色谱的进样方法。目前可以采用的方法有各种虹吸法、进样阀法,以及类似气相色谱技术中的动态     

智能色谱法的发展（上）

本文综述了我们在智能色谱方面的发展,包括硬件和软件两个主要部分.第一部分评述了细管径高效液相色谱柱,不可抽提的气相色谱毛细管柱,无阀切换技术,四合一组合检测器和快速扫描紫外光谱检测器;第二部分包括三个应用软件:保留值预测.最佳操作条件预测和全谱图拟含软件,并用大量实验证明了保留值方程的正确性。这些方程用于定性分析及最佳条件选择,文中举出了有关的例子,讨论了细管径高效液相色谱,不可抽提的气相毛细管柱、柱切换系统、组合检测器、快速扫描紫外检测器、曲线拟合方法在智能色谱中的应用。     

高效液相色谱讲座（Ⅴ）硅胶色谱（下）

§5-4 硅胶色谱的应用特点 硅胶上样品的保留程度,主要由样品分子上极性最强的官能团的极性所决定的。根据表5-4中极性序列来预测族类的分离。     

全二维液相色谱（NPLC×RPLC）接口及其应用

用内径为0．53mm的填充毛细管正相液相色谱为第一维，用4．6mm（i．d．）×50mmRP-18e整体柱反相色谱为第二维，建立了定量环一阀切换接口的全二维液相色谱系统（NPLC×RPLC）．第一维色谱分离洗脱出的组分交替存储在十通阀上的两个定量环中，同时定量环中前一个组分被转移到第二维进行反相分离．因为第一维的流动相流量仅是第二维的1／500，自然解决了流动相兼容问题．采用芳香族化合物的混合物和中药丹参正己烷提取液对该全二维液相系统的分离能力进行了评价．     

环境介质与生物样品中三氯生残留检测方法研究进展

综述了环境介质与生物样品中三氯生残留的检测方法研究进展。检测方法有气相色谱-质谱法、液相色谱法、液相色谱-质谱联用以及分光光度法、酶联免疫分析方法和电化学法等。气相色谱-质谱法检测三氯生线性关系良好，检出限、定量限低，精密度、准确度较高，但样品需要衍生化前处理，操作较为复杂。液相色谱法操作相对于气相色谱-质谱法更为简便，且具有选择性强、线性范围宽、定量准确和精密度高等优点，目前高效液相色谱法是大多数实验室的首选。液相色谱-质谱法是在液相色谱的基础上，采用质谱法对样品中的三氯生残留进行定性定量，定量准确，检出限低。其他方法的使用率较低，但也可满足环境介质与生物样品中三氯生残留的检测。目前乃至未来的一段时间内，环境介质及生物样品中三氯生残留的检测方法将以色谱-质谱法为主。目前仪器检测技术条件已经相对成熟，因此应积极寻找适合不同样品的前处理方法，使检测结果更加准确和精确，实验过程更加快捷方便。     

基于色谱-质谱联用的脂质分析样品前处理技术研究进展（英文）

脂质作为细胞膜和亚细胞膜的主要结构成分,在能量来源、细胞信号传导等多种生物学过程中发挥着重要作用。近年来,脂质分析受到越来越多的关注,其中色谱-质谱联用技术在脂质分析中占据主导地位。由于样品基质复杂,样品前处理有富集痕量物质和减少基质干扰的作用,成为脂质分析中的一个关键步骤。该文综述了近年来基于色谱-质谱联用技术的脂质分析中样品前处理技术的研究进展和应用,对各种样品前处理技术进行了阐述和总结。基于液相的萃取方法有液-液萃取和单一有机溶剂萃取。基于固相的萃取方法包括固相萃取和固相微萃取。场辅助萃取方法包括超临界流体萃取、加压流体萃取、微波辅助萃取和超声辅助萃取。此外,还介绍了在线联用样品前处理方法和用于活体分析的样品前处理方法。最后,对基于色谱-质谱联用的脂质分析样品前处理技术存在的问题及发展趋势进行了探讨。样品前处理技术的发展将提高脂质分析的灵敏度、选择性和分析速度。     

化学衍生—高效液相色谱法同时测定铅（Ⅱ）和汞（Ⅱ）

从吡啶－２－乙醛苯甲酰腙作柱前衍生试剂，在优化了衍生和色谱条件下实现了用高效液相以谱法同时测定铅和汞离子，在ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘｓｐｈｅｒｅｘＣ１８色谱柱上，用甲醇－水（６５：３５，Ｖ／Ｖ），作流动相，于２４８ｎｍ处检测，得到线性良好的工作曲线，铅和汞的最低检测限分别为２．５５μｇ／Ｌ和７．２９μｇ／Ｌ。分析了环境水样品和合成水样，铅和汞的标准加入回收率分别为９８．３％～１０１．７％和９８．０～１