人胎盘的生殖内分泌学研究——Ⅰ.人细胞滋养层细胞的无血清培养与生长因子的作用

为了研究胎盘的激素分泌及其调节功能,作者发展了一种简便分离细胞滋养层细胞和用无血清培养的实验模型,研究了上皮生长因子、胰岛素、硒及转铁蛋白等生长因子对细胞滋养层细胞的生存和激素分泌的影响。结果显示在含生长因子的培养液中细胞可生存3周;上皮生长因子和胰岛素对hCG和孕酮的分泌都有刺激作用,硒只影响hCG的分泌,转铁蛋白的作用不明显,但是转铁蛋白与另外两种因子合用时呈现协同作用。本研究说明上述的4种因子和胶原是维持细胞滋养层细胞生存不可缺少的因素,同时也发现上皮生长因子、胰岛素和硒还参与了正常人胎盘激素分泌的调控。     

hCG和GnRHa诱发去垂体大鼠排卵及卵巢PA活性变化的比较研究

促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)能诱导去垂体大鼠排卵,与hCG相比,所诱导出的排卵时间提前2-4h.GnRH拮抗物能完全阻断GnRHa和hCG不是作用在同一受体部位上.GnRHa也同hCG一样,只增加卵巢中组织型纤蛋白溶酶原激活因子(tPA)活性,而对尿激酶型PA(uPA)无明显影响.由hCG和GnRHa所诱导的卵巢tPA活性皆在排卵前达到高峰;GnRHa也能刺激卵丘-卵母细胞复合体中tPA活性;注射hCG明显增加血清孕酮水平,而GnRHa对血清孕酮含量没有明显影响.实验说明,GnRHa和hCG诱导排卵可能都是通过增加卵巢中tPA的活性这一共同途径而实现的.     

人胎盘的生殖内分泌学研究——Ⅱ.细胞滋养层细胞的激素分泌功能

本文采用了无血清培养技术,研究了细胞滋养层细胞在体外分泌hCG、孕酮、雌激素、cGnRH和β-内啡肽的功能,在8天的培养中发现,细胞滋养层细胞在培养24h去除内源激素后能持续地分泌少量的hCG;与此不同,孕酮的分泌量逐日上升,第6天的孕酮分泌量为第1天的两倍;在外加雌激素的前身物雄烯二酮的情况下,细胞能合成雌激素,其产量亦是逐日上升,反映出细胞芳香化酶活性的不断提高,这种酶活性的提高与雄烯二酮的存在与否无关;在两种滋养层细胞培养中,唯有细胞滋养层细胞培养液中测得有cGnRH,产量以第2天为最高,接近4pg/10~5个细胞,合体滋养层细胞在离体下能分泌β-内啡肽,但其产量逐日下降,与此相反,细胞滋养层细胞的培养液中不但测到β-内啡肽的存在而且其含量在培养4—6天间明显上升。     

兔胚泡小分子肽的生物功能研究

本文用~3H胸腺嘧啶掺入法研究了兔胚泡液中妊娠特异的小分子肽(RBPs)抑制淋巴细胞转化的作用。实验结果指明RBPs具有抑制植物血球凝素(PHA)刺激大鼠淋巴细胞转化的作用,对人血液淋巴细胞的转化亦有抑制作用,在一定的RBPs浓度范围内(40—200μg/2.5ml)其抑制作用与其浓度相关,浓度增加其抑制程度也大。人绒毛膜促性腺激素、孕酮和孕兔血清均无显著抑制作用。实验又指明RBPs(200μg/ml)对子宫组织PGF_(2α)的分泌也有显著抑制作用;但对子宫内膜~3H亮氨酸的掺入却有增进效应,此效应能被放线菌素酮所抑制。     

GnRHa对恒河猴颗粒细胞离体下甾体激素形成的双向作用

实验证明:(1)促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)刺激猴颗粒细胞芳香化酶活性和孕酮产生,并与剂量有直接关系;(2)GnRH拮抗物能完全阻断GnRHa的作用,表明GnRHa是通过颗粒细胞表面受体对其甾体形成起作用的;(3)除刺激作用外,GnRHa与促性腺激素一起则抑制雌激素和孕酮的产生;降低GnRHa的含量可逐渐恢复促性腺激素对甾体形成的刺激作用;(4)GnRHa对颗粒细胞的双向作用在cAMP诱导剂存在下也可观察到,这说明GnRHa抑制促性腺激素诱导甾体激素的形成是发生在受体结合以后的信息传递系统的某个部位上。     

抗EGF受体的单克隆抗体对人鼻咽癌及其他肿瘤细胞生长的影响

本文报道三种抗EGF受体的单克隆抗体(MoAbs)用于裸鼠移植入肿瘤细胞的生长抑制研究。注射MoAbs 3和176分别抑制了低分化鼻咽癌细胞系CNE-2和上皮样癌细胞系A431的生长,而相同的抗体用于宫颈癌细胞系HeLa时,则无抑制作用.用~(125)I-EGF结合试验测定了CNE-2和A431细胞膜EGF受体的含量分别为1.3×10~5/细胞(Kd 7.7×10~(-8)mol/L),1.4×10~6/细胞(Kd 2.4×10(-9)mol/L)。实验结果亦显示MoAbs 3和176分别可竞争性地抑制EGF与其受体的结合,这两种抗体同时显示良好的抑瘤效应,而不能抑制EGF与其受体结合的MoAb101,则抑瘤效果亦差。上述MoAbs在体外有补体存在时不具备杀伤CNE-2及A431等肿瘤细胞。     

雄烯二酮单克隆抗体的制备及其被动免疫新疆细毛羊的效应

本文应用人工合成的雄烯二酮11α-半琥珀酰-牛血清白蛋白为抗原,建立了5株稳定分泌抗雄烯二酮特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。McAb与睾酮、雌酮交叉反应分别为8.1—12.3％和0.8—2.5％,抗体亲和力为2.0 x10~7—2.8×10~8L/M之间。它们均为IgG_1亚类。使用该McAb被动免疫新疆细毛羊,两个情期中孕酮(P)和促黄体激素(LH)的含量皆高于对照组,绵羊排双卵和产双羔都有所提高。     

STUDY ON REPRODUCTIVE ENDOCRINOLOGY OF HUMAN PLACENTA (Ⅲ)——HORMONAL REGULATION OF PROGESTERONE PRODUCTION BY TROPHOBLAST TISSUE OF FIRST TRIMESTER

The effect of hormones on progesterone secretion by 6-8 week human trophoblast tissue cultured in serum-free medium has been investigated. GnRH at low concentration (10-10-10-8 mol/L) stimulated progesterone secretion, while high dose (10-6-10-5 mol/L) produced inhibitory effect. The progesterone secretion could be significantly decreased by addition of anti-hCG antiserum or monoclonal anti-hCG IgG in a dose- and time-dependent manner. Various concentrations of TRH, PGE2, PGF2α, testosterone and estradiol were found to be ineffective. These data indicate clearly that progesterone production by human trophoblast tissue at early gestation stage is under the modulation of GnRH and hCG.     

幼猴和成年猴颗粒细胞离体下甾体形成的激素调节

本文用无血清培养技术研究幼龄和成年恒河猴颗粒细胞甾体形成的激素调节。实验结果表明:幼猴和成年猴颗粒细胞在离体下都能对人FSH、环-AMP,FK和GnRH类似物产生反应,明显增加孕酮和雌激素的产生;hCG能够促进FSH刺激幼猴和成年猴颗粒细胞增加孕酮的产生;在培液中加入DES明显增强FSH刺激孕酮和雌激素产生的效应;在缺少雌性激素底物的情况下,猴颗粒细胞也能合成可测量的雌激素。本文的发现对了解灵长类卵巢功能的激素调节机制有重要意义。     

GnRHa对去垂体大鼠卵巢tPA和PAI-1基因表达的调节

给去垂体大鼠注射促性腺激素释放激素(GnRH)的类似物(GnRHa)可诱导卵巢颗粒细胞(GC)和膜间质细胞(TI)组织型纤溶酶原激活因子(tPA)和抑制因子(PAI-1)基因在时间上和不同细胞间的协调表达。tPA主要由GC产生,GC也分泌少量PAI-1;而卵巢中的PAI-1主要由TI产生,TI也分泌少量tPA。在排卵前GC和TI中tPA mRNA和生物活性均达到高峰;与此相反,PAI-1的表达在GC和TI中却完全不同,TI中的PAI-1 mRNA和生物活性在tPA峰值前6h达到最高水平;而GC中的PAI-1峰值却出现在排卵后。上述变化与人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导正常大鼠排卵所引起的两种基因的表达的动力学变化无异。这些结果提示,hCG(通过PKA途径)和GnRHa(通过PKC途径)这两种不同的调控信号可通过各自不同的受体,经过不同的信息传递系统而最终影响tPA和PAI-1基因的相同的协调表达引起排卵。     

孕鼠胎盘膜对混合稀土常乐的屏障作用

为评估混合稀土常乐对人体胚胎的潜在危害, 在光镜和电镜下观察了混合稀土常乐染毒后的胎盘组织, 以了解其在胎盘组织中的存在形式和分布情况, 同时应用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)检测染毒后的孕鼠血清、胚胎组织提取液和羊水中的稀土含量以确定其能否通过胎盘屏障. 染毒于雌鼠妊娠第六天开始, 每天分别以0.3, 2, 5和20 mg·kg-1混合稀土常乐灌胃, 直至妊娠第十八天. 结果显示: 光镜下, 染毒组胎盘绒毛中毛细血管周围合体细胞滋养层胞质内积聚有许多圆形黑色细小颗粒, 颗粒的多少与染毒剂量呈正相关; 电镜下, 染毒组胎盘绒毛中可见有膜包裹的致密体及合体细胞滋养层细胞内线粒体有不同程度的空泡变和嵴断裂; ICP-MS检测: 孕鼠血清铈的含量随染毒剂量的增加而递增, 染毒组胎儿羊水和孕鼠血清中稀土总量, 只有20 mg·kg-1组与对照组相比有显著增加, 其余各组均无显著差异. 胚胎组织提取液中各组的稀土总含量没有变化. 由此得出结论: 胎盘膜对混合稀土常乐进入胚体有很大的限制作用, 但是, 当混合稀土常乐在胎盘膜中积累增加到一定程度时, 可少量透过胎盘屏障, 进入胚体.     

抗雌激素治疗垂体泌乳素腺瘤的体外实验研究

研究了抗雌激素药物三苯氧胺(TAM)在体外对垂体泌乳素(PRL)腺瘤细胞生长和激素分泌的影响,及其与溴隐亭(BROM)的相互作用。体外培养人PRL腺瘤细胞,用不同浓度TAM作用体外培养的腺瘤细胞,检测腺瘤细胞生长及激素分泌的变化;用相同方法检测TAM与BROM的相互作用。结果表明,低、中剂量的TAM对腺瘤细胞生长和激素分泌无作用,高剂量TAM可以抑制PRL腺瘤的激素分泌水平,与对照组比较可降低(25±7)%;其作用可被雌激素拮抗,未发现腺瘤细胞生存状态的改变;TAM对腺瘤细胞的作用弱于BROM;联合应用TAM和BROM具有协同作用,腺瘤细胞激素分泌比对照组降低(47±4)%;与单用BROM相比在抑制腺瘤细胞激素分泌和生长方面差别具有显著性(P<0 05)。提示联合应用TAM与BROM,可以明显抑制PRL腺瘤细胞的生长和激素分泌,提高BROM的疗效。     

聚乙烯的辐照效应与结晶性能之间的相互影响

1.经五种不同剂量(10×10~6、2×10~7、5×10~7、1×10~8和2×10~8拉特)的γ-射线辐照过的聚乙烯样品,在它们的二甲苯稀溶液中于同一个结晶条件下培养出来的一组晶体,在形态方面随着剂量的增大而发生有规律的变化。凝胶点以前,得到的是单晶体;凝胶点以后,随剂量的增大得到越来越不规则的树枝晶。但是,若降低恒温的温度或减慢冷却的速率,则可以得到较为规则的树枝晶或单晶体。因而作者认为:上述这种形态上的有规律变化,并不是由构成这些晶体的分子随着剂量的增大,在结构上发生有规律的变化所造成的,而是由于凝胶分量的增大使得形成上述晶体的过饱和度有规律地增大所造成 的。 2.经辐照过的聚乙烯可以产生线型分子、支化分子和交联分子所特有的三类结晶形态。因而这就十分形象地说明了在一定的剂量范围内,辐照过的聚乙烯,确实同时存在有这三类分子。 3.聚合物的稀溶液结晶过程也是一个不同结构分子的自动分离和各自归并的过程。 4.对同一批培养出来的聚乙烯单晶体经不同剂量(5×10~6、2×10~7、5×10~7、1×10~8和2×10~8拉特)的γ-射线辐照以后,用电子显微镜进行了形态观察。发现其中一部分单晶体有许多褶痕,而另一部分则可以基本上没有什么褶痕。也发现同一个单晶体上的某几块扇面有许多褶痕,而另几块扇     

LHRH脉冲型式的变化对灌流的雄性大鼠垂体细胞LH分泌的影响

本实验应用体外分散垂体细胞动力学培养的方法,观察了LHRH脉冲幅度和频率以及LHRH连续刺激对雄性大鼠垂体前叶细胞LH分泌活动的影响。结果表明,LHRH在1×10~(-10)—1×10~(-6)mol/L范围内,与LH分泌的剂量-效应关系曲线呈线性。LHRH脉冲频率使LH分泌产生双相反应,随着刺激频率的增高,LH基础水平升高,LH/脉冲减少。当LHRH脉冲幅度在1×10~(-9)mol/L或以上,刺激频率在3脉冲/h或以上时,可观察到LH分泌达最高峰并随之逐渐下降至基础水平,即明显的自身激发作用和脱敏作用。增加LHRH的脉冲幅度可减少引起激发作用所需要的脉冲频率,增加高幅度LHRH脉冲的频率可使激发作用更快产生。另外,低浓度的LHRH(1×10~(-10)mol/L)连续刺激细胞也可产生自身激发作用,但需要较长时间的刺激。这些结果提示:垂体前叶LH细胞的分泌型式依赖于LHRH脉冲的幅度和频率,这有助于阐明体内的LH脉冲波动的动力学机理。     

痕量硫代硫酸根的示波极谱法测定

在Fe~(2+)-NO_2~--VC体系中,在单扫示波极谱仪上,有一很灵敏的S_2O_3~(2-)阴极波,峰电位为-0.37伏(vs. SCE)。阴极导数波高与S_2O_3~(2-)浓度在6×10~(-8)mol/L—1×10~(-6)mol/L之间成线性关系,出限为5×10~(-8)mol/L。该法可用于环境水中痕量S_2O_3~(2-)的测定。该波具有吸附性质,系三元络合物Fe·S_2O_3-No催化溶解氧还原所致。     

人尿激酶原在CHO细胞中的基因扩增与高效表达

本文通过基因共转染和基因共扩增方法,在SV40病毒晚期启动子控制下成功地在中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-DHFR~-)中高效表达了人尿激酶原,其表达水平在5×10~(-6) mol/L氨甲喋呤存在下可达2—3μg/10~6细胞/24 h。采用PMA诱导可将表达水平提高至3.5—4μg/10~6细胞/24 h。相应的Pro-UKcDNA在细胞基因组上整合的拷贝数为200—300拷贝/细胞。Western blot分析表明,表达出来的重组Pro-UK与天然Pro-UK具有相似的分子量:S_(2444)测活法证明重组Pro-UK具有体外酰胺水解活性。     

电感耦合等离子体原子发射光谱法分析稀土元素的研究(Ⅰ)高纯氧化镧中十四种稀土杂质的测定

研究了ICP-AES法测定高纯氧化镧中十四种稀土杂质的方法。利用简单的加热去溶装置成功地测定了99.99％La_2O_3中14种稀土杂质。10mg/ml La_2O_3基体工作曲线下限为(以氧化物百分含量计算)Ce、Pr、Sm_2×10~(-3);Gd、Tb1×10~(-3);Nd,Lu 8×10~(-4),Er,Ho,Dy4×10~(-4); Tm.Eu 2×10~(-4),Yb 8×10~(-5),Y_4×~(-5)。相对标准偏差为2.8—9.7,回收率为85—114％。     

20α-羟基孕酮对土拨鼠肾上腺微粒体甾体羟基化反应的抑制作用

本文研究了20α-羟基孕酮对土拨鼠肾上腺微粒体P-450催化甾体羟基化的抑制作用。探明了17α-羟基孕酮作底物时,20α-羟基孕酮对P-450_(C_(21))催化的C_(21)羟基化反应及P-450_(17αlyase)催化的C_(17)—C_(20)键断裂的反应均表现出拮抗抑制。抑制常数分别为1.73μmol/L(P-450_(C_(21)))和1.37μmol/L(P-450_(17lyase))。比较了分别以孕酮和17α-羟基孕酮作底物时,20α-羟基孕酮对P-450_(17αlyase)催化C_(17)—C_(20)键断裂的不同影响,由此推论出雄甾烷二酮在肾上腺微粒体中生成的连续反应机理。     

尿素刀豆生物传感器的研制

本文报告了尿素刀豆生物传感器的制备和性能。斜率46.0—49.7mv.dec~(-1)、线性范围2×10~(-4)—5×10~(-3)mol.L~(-1),检测下限2.5×10~(-5)mol.L~(-1)。该传感器用于血液中尿氮含量的测定,此测定结果与分光光度法测定结果无明显差异。     

N-亚苄基橙皮素腙及类似物的合成与细胞活性

以天然橙皮素(1)为原料,与水合肼反应得到了橙皮素腙(2).2分别与各种取代的芳香醛反应首次合成了8个N-亚苄基橙皮素腙3~10及6个类似物11~16.所合成产物通过NMR,IR,HR-ESI-MS方法进行了结构确证.MTT(噻唑蓝)蛋白染色法体外抑制肿瘤增值活性测试发现化合物5,7,10,16对胃癌细胞SGC-7901有显著的抑制活性.