不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

目的 建立小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus,MHV）血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4. 0μg/m L (10 -7. 73 /0. 1 m L TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5. 13%和5. 57%;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒III型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97. 37%（37/38）,阴性血清相符率92. 19%（118/127）。结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。     

不同人群乙型肝炎患者血清学标志分析

目的探讨我地区乙型肝炎患者不同人群间阳性率及血清学标志的差异,为防治乙肝传染流行提供临床依据。方法搜集符合要求资料8843例,采用ELISA法进行检测,以学生、在职企事业人员、离退休人员进行分组,以1、2、3、4、5、分别代表乙肝二对半的HBsAg、抗-HBs、HbeAg、抗-Hbe、抗-HBc的阳性结果代码。结果阳性率以学生为最高,为68.68%。"2"模式的阳性率也以学生组最高占该组阳性的92。47%。非"2"阳性模式学生组阳性中以"145"和"135"为主,在职人员以"145"和"25"为主,离退休人员以"15""25""5"为主。结论HBV血清免疫学标记的模式较为复杂,不同人群阳性率有所差别,且血清学常见模式亦不同。但这些模式的出现对临床分析和判断患者病程和传染性提供重要依据。     

乙型肝炎病毒血清标志物阳性组合模式与编码及临床意义

<正>乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物监测的五项指标(即HBsAg——乙型肝炎病毒表面抗原、HBsAb——乙型肝炎病毒表面抗体、HBsAg——乙型肝炎病毒E抗原、HBeAb——乙型肝炎病毒E抗体及HBcAb——乙型肝炎病毒核心抗体),无论在书写文字及语言表达上显得复杂,因此我们建议,根据五项指标阳性的情况组合排列分别进行统一编码,简化表达利于交流,且节省时间和文稿篇幅。现将其组合模式、编码及临床意义简介如下: 1 编码命名。以1、2、3、4、5分别表示HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBeAb。五项全部阴性为‘○’。     

树对人乙型肝炎病毒易感性的验证

为验证树对人乙型肝炎病毒 (HBV)的易感性 ,用含 HBV的人血清接种给 10只成年树 (雌雄各半 )。然后每周抽血 1次 ,每只动物共抽血 11次。用不同公司生产的 EL ISA试剂检测接种后的动物血清感染指标。实验观察至 13周 ,结果分别有 9只和 7只动物出现 HBs Ag阳性 ,持续最短 1周 ,最长 7周。用 PCR检测 ,结果有 1只动物连续 4周在血清中检测出 HBV DNA。表明树能感染人 HBV,但实验有待改进以延长感染持续时间     

树鼩对人乙型肝炎病毒易感性的验证

为验证树Ｑｕ对人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的易感性,用含ＨＢＶ的人血清接种给１０只成年树Ｑｕ（雌雄各半）。然后每周抽血１次,每只动物共抽血１１次。用不同公司生产的ＥＬＩＳＡ试剂检测接种后的动物血清感染指标。实验观察至１３周,结果分别有９只和８只动物出现ＨＢｓＡｇ阳性,持续最短１周,最长７周。用ＰＣＲ检测,结果有１只动物连续４周在血清中检测出ＨＢＶ ＤＮＡ。表明树Ｑｕ能感染人ＨＢＶ,但实验有待改进以延长感染持续时间。     

反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究

目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse line probe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3'、5'对称加有poly-C的特异性探针和5'标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1 ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5％以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100％,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09％(103/105)、100％ (43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.     

中国大陆乙型肝炎病毒基因分型的研究进展

目的:综述乙型肝炎病毒的分子基因型在中国境内的地理分布的特点、临床特征和治疗疗效的关系。方法:收集并综述近五年中国大陆的研究成果。结果:虽然HBV有8个基因型,但中国大陆只有4个基因型别流行,其分布表现出明显的地域性。结论:中国大陆HBV基因型与HBV自然史、致病性、预防、治疗等关系的研究为今后控制乙型肝炎提出了方向。     

抗乙型肝炎病毒(HBV)S区的siRNA对HBV-DNA的抑制作用

体外观察s1RNA对HepG2 2.2.15细胞中乙型肝炎病毒(HBV)HBV-DNA分泌的影响。设计并合成针对HBV S区的三条siRNA,构建含上述siRNA的表达载体pSilencer ZYl、pSilencer ZY2和pSilencer ZY3,测序及酶切鉴定后用脂质体介导重组质粒转梁HepG2 2.2.15细胞,用酶免分析法对HepG2 2.2.15 细胞上清中HBV-DNA进行定量检测。结果成功构建了针对HBV S区的siRNA的表达载体,三条s1RNA 均可不同程度地抑制HepG2 2.2.15细胞上清中HBV-DNA,转染72 h抑制效果最好,分别为62%、31%、63%。说明针对HBV S区的siRNA能明显抑制HBV-DNA。     

乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游．重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达．用纯化后的重组质粒直接注射到ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体．ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合     

靖煤集团煤矿职工乙型肝炎病毒携带的现状调查与分析

乙肝病毒(HBV)在我国的感染率较高,达到7.18%[1],乙型肝炎严重威胁人类的健康。靖煤集团职工众多人口密集,为了职工健康和做好乙型肝炎的防治工作、监测和明确靖煤集团职工乙肝病毒(HBV)携带的情况,靖远煤业集团康复医院在2015年对靖煤集团2600名煤矿职工进行了乙型肝炎病毒表面抗原的检测。采用酶联免疫法(ELISA)[2],在2015年对靖煤集团2600名煤矿职工进行乙型肝炎病毒表面抗原检测。2015年靖煤集团煤矿职工乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)阳性率为4.15%,低于7.18%的全国水平;30岁以下年龄组阳性率明显低于30岁以上年龄组;男性阳性率高于女性。靖煤集团煤矿职工乙型肝炎病毒携带状况与当前全国的现状相比,HBs Ag阳性率低于全国的平均水平,且随着职工年龄减小,阳性率在逐渐降低。为了企业的发展和职工的健康,继续加强乙型肝炎的防治工作。     

分子标记技术在真菌上的应用(综述)

对分子标记在真菌分离菌株的分子鉴定、基因定位克隆、遗传图谱构建、遗传多样性分析、遗传亲子分析及线粒体DNA遗传研究等方面的应用进行了综述。     

湖北大学八九级学生HBV血清流行病学调查

本文对八九级918名学生的血清中HBV标志HBsAg、HBeAg及肝功能进行了检测,结果表明HBsAg,HBeAg阳性率男生明显高于女生;但城镇学生HBsAg阳性率明显低于农村学生;HBeAg阳性率在城、乡学生间无显著性差异,并探讨了HBV在高校的流行规律,为作好高校乙型肝炎的监测及防治提供了科学依据。     

萼花臂尾轮虫(Brachionus calyciflorus)的ISSR引物筛选及其多态性检验

采用简单重复序列区间(ISSR:一种基于微卫星的分子标记,无需预知遗传背景即可研究基因组中微卫星序列的变异,适合大规模的种群遗传研究)的方法对萼花臂尾轮虫(Brachionus calyci florus)进行PCR扩增,优化出适宜的ISSR-PCR反应体系,并从100条引物中筛选出16条具有良好多态性和重复性的ISSR引物.研究结果显示,萼花臂尾轮虫简单重复序列以(AC)和(AG)的两碱基重复为主,筛选出的ISSR引物扩增共得到114个位点,66个多态位点,多态性高达57.89%,高于常用于该物种分子生态学研究的线粒体COI基因的多态性.     

免疫酶染色试验检测广州管圆线虫病鼠血清抗体的实验研究

用广州管圆线虫雌虫冰冻切片作免疫酶染色试验（ＩＥＳＴ），检测感染广州管圆线虫大白鼠血清中抗体，结果在感染后３—９周的３９份大白鼠血清中，３７份呈阳性反应，阳性率为９５％，ＧＭＲＴ２８０．６７；３２份正常大白鼠血清，全部为阴性，检测１０份猪蛔虫抗原免疫大白鼠血清；３份曼氏这宫绦虫裂头拗抗原免疫大白鼠血清；７份日本血吸虫感染大白鼠血清，均呈阴性反应。     

菜青虫体内颗粒体病毒的早期检测

用ＥＬＩＳＡ从感染１６ｈ后的菜青虫血淋巴中检出颗粒体病毒，检出率为４８％，检出率随感染时间延长而递增，感染后２４ｈ高达８０％以上，远早于感染病症出现的时间，用血淋巴检测优于组织提取液，阳性滴度高，以１头虫检测较多头虫好，试验证明ＥＬＩＳＡ比对流免疫电泳灵敏。     

兔抗人M-CSF特异性抗体在夹心ELISA方法检测人M-CSF中的应用

用人尿来源经纯化的 M-CSF 免疫家兔制备抗 M-CSF 物异性抗体.经 ELISA试验证明该抗体可对天然和重组人 M-CSF 进行特异性识别,与人的 GM-CSF 和 IL-3无交叉反应,并且该抗体可中和天然人 M-CSF 集落刺激活性。用该抗体与人 M-CSF 标准品进行夹心 ELISA 实验,结果证明夹心 ELISA 方法测定的标准品 M-CSF 含量与实际相一致,并且与软琼脂骨髓细胞集落形成试验检测到的活性结果相平行。     

335例乙型肝炎患者血清HBV-DNA定量与乙肝病毒标志物的相关性分析

目的:探讨乙型肝炎患者血清HBV-DNA定量与乙肝病毒标志物的关系。方法:对335例乙型肝炎患者分别用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清HBV-DNA含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清乙肝病毒标志物,并对结果进行统计学分析。结果:大三阳组HBV-DNA阳性率及含量显著高于其他组(P<0.01);小三阳组HBV-DNA阳性率及含量显著低于大三阳组(P<0.01),但与HBsAg、HBcAb阳性组比较差异无统计学意义(P>0.05);HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率显著高于HBeAg阴性组(P<0.01)。结论:只有将HBV-DNA定量检测和乙肝病毒标志物有机的结合,才能为乙型肝炎的临床感染、病毒复制、传染性强弱以及抗病毒药物的疗效观察提供可靠的判断依据。     

无乙肝症状的“健康人群”中前S_2蛋白及抗前S_2的血清学调查

采用国产单克隆抗体酶标试剂盒(McAb—ELISA)对广东某地区无乙肝症状的298人作了血清前S_2蛋白及抗前S_2检测,同时检测各项乙型肝炎病毒血清学标志(HBVM)及肝功能。全部检测对象肝功能正常。前S_2阳性率7.72％。抗前S_2阳性率5.70％。前者与HBsAg及其它乙肝病毒复制标志(HBcAg、PHSA-R、HBcAg、抗-HBcIgM及HBVDNA)有平行关系,后者则与抗HBs有平行关系。结果提示前S_2可作为一项敏感的HBV复制及传染性的指标,抗前S_2是一项乙肝感染的恢复标志,二者有重要的流行病学与临床意义,检测证实人群中存在相当数量的HBV携带者和隐性感染者。     

利用AFLP技术筛选与银杏性别相关的分析标记

利用amplified fragment length polymorphism(AFLP)技术,应用48个引物组合,检测了雌雄银杏基因组DNA的多态性,筛选与银可性别相关的分子标记,其中3个引物组合各提供了1个与雌性相关的分子标记。经Southern点杂交证实有两个标记为银杏雌性基因组所特有。这些分子标记的获得,为寻找性别特异的探针或PCR引物,用于银杏的性别鉴定奠定了基础。