抗羟甲芬太尼单克隆抗体和抗羟甲芬太尼独特型抗体的特性研究

本文采用羟甲芬太尼免疫的BALB/c小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,获得分泌抗羟甲芬太尼抗体的单克隆杂交瘤细胞株。该株细胞分泌的抗羟甲芬太尼单克隆抗体与羟甲芬太尼结合的亲合力为3.65±0.59×10~7 l/mol。羟甲芬太尼类似物3-甲基芬太尼、β-羟基芬太尼和芬太尼与抗羟甲芬太尼单克隆抗体有部分交叉反应,而DAGO,纳洛酮和双氢依托啡与抗羟甲芬太尼单克隆抗体无交叉反应。应用纯化的抗羟甲芬太尼单克隆抗体免疫家免,获得高滴度的兔抗羟甲芬太尼独特型抗体。抗羟甲芬太尼独特型抗体与抗羟甲芬太尼单克隆抗体结合反应有剂量关系,并呈可饱和性。抗羟甲芬太尼独特型抗体能竞争抑制抗羟甲芬太尼单克隆抗体与原始抗原羟甲芬太尼的结合反应。受体结合分析表明抗羟甲芬太尼独特型抗体能与放射性配体[~3H]羟甲芬太尼和[~3H]DAGO竞争结合大鼠脑匀浆膜蛋白上的阿片受体。在离体生物检定实验中抗羟甲芬太尼独特型抗体还具有类似羟甲芬太尼样作用,能呈剂量依赖地抑制电场刺激引起的小鼠输精管的收缩。以上结果提示抗羟甲芬太尼独特型抗体能与羟甲芬太尼竞争结合抗羟甲芬太尼单克隆抗体上的同一结合位点,具有羟甲芬太尼的内影像结构,并能与μ阿片受体结合,呈阿片受体激动剂样作用。     

毛细管区带电泳检测抗EGFR抗体的电荷异质性

建立了抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体电荷异质性的检测方法。采用毛细管区带电泳(CZE)模式,考察了分离缓冲液浓度和p H值、添加剂、分离电压、毛细管温度对主峰与酸碱性变体分离度的影响。以380 mmol·L~(-1)6-氨基己酸(EACA,pH 6.0)为分离缓冲液,0.1%羟丙基甲基纤维素(HPMC)和1.9mmol·L~(-1)三亚乙基四胺(TETA)作为添加剂,分离电压25 k V,分离时间8 min,毛细管温度20℃条件下,电荷变体能够得到良好分离,且在0.1~1 mg·m L~(-1)范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,主成分、酸、碱变体1和碱变体2的定量下限(LOQ)分别为30.0,150.2,125.2,93.3μg·L~(-1),重复性和中间精密度RSD值小于2%,回收率为95.4%~105.4%。该方法简单、快速、成本低,可以满足抗EGFR抗体的电荷异质性检测要求。     

乙醛酸和草酸的毛细管区带电泳分析

建立了同时测定乙醛酸和草酸的毛细管区带电泳法。考察了缓冲溶液的种类、浓度和pH以及分离电压等因素对分离结果的影响。在缓冲溶液为20 mmol/L硼砂-5.5 mmol/L邻苯二甲酸氢钾(pH 9.0)、分离电压20 kV、检测波长212 nm的优化条件下,11 min内即可实现对目标物的分离。乙醛酸和草酸分别在0.8～20 g/L和1.2～20 g/L范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9993和0.9975;方法的检出限分别为0.2和0.4 g/L(信噪比为3);样品的加标回收率为98.3%～102.5%,相对标准偏差为0.35%～0.61%。该方法操作简便、快速、成本低廉,已应用于实际样品的分析,并获得了令人满意的结果。     

毛细管区带电泳分析稻瘟病菌诱导水稻叶片蛋白

用毛细管区带电泳分析了受稻瘟病菌侵染的水稻幼苗的叶片细胞蛋白提取物和胞间流液蛋白提取物,用线性聚丙烯酰胺涂渍的毛细管柱来抑制蛋白的吸附。采用数理统计中检验异常值的Ｇｒｕｂｂｓ方法分析结果,与对照实验相比,在叶片细胞蛋白提取物中发现了一种被稻瘟病菌诱导表达的蛋白。     

中药大黄多糖中单糖组成的毛细管区带电泳分析

以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为单糖的衍生化试剂,建立毛细管区带电泳(CZE)同时分离分析8种常见还原单糖PMP衍生物的方法。将该方法用于中药大黄多糖(RTP)的单糖组成及其摩尔比率的测定。结果表明,在pH 10.8和150 mmol/L硼砂缓冲溶液、10kV分离电压、25℃柱温的优化条件下,8种单糖衍生物实现了良好的分离,并证实RTP由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸5种单糖组成,其摩尔比为8.01∶5.01∶30.30∶1.00∶1.56;样品测定回收率为96.4%~105.3%。该方法灵敏、快速、准确,可用于中药RTP的组成分析。     

在线样品浓缩毛细管区带电泳分析毛发中的苯丙胺类毒品

建立了毛细管区带电泳(CZE)的在线场放大样品堆积(FASS)方法。采用含有40%乙烯乙二醇的100 mmol/L磷酸盐二元缓冲液(pH 2.5),80%异丙醇的0.1 mmol/L磷酸样品溶液,利用缓冲体系与样品溶液体系电导率的差异,在毛细管中浓缩样品组分,对苯丙胺、甲基苯丙胺、亚甲基二氧基苯丙胺(MDA)、亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)4种毒品进行了分离和定量测定,检测的灵敏度提高约1000倍。对于标准品的检出限可达到0.06μg/L。当样品浓度高于5μg/L时,分析的相对标准偏差在10%范围之内;用该方法对添加毒品的毛发进行了提取和测定,可检测到的添加浓度为1μg/g毛发。该方法可用于生物检材中苯丙胺类毒品的检测。     

食品中柠檬黄铝色淀和日落黄铝色淀的毛细管区带电泳分析

发展了一种新的采用毛细管区带电泳分析柠檬黄铝色淀和日落黄铝色淀的方法。通过前处理步骤成功实现了铝色淀中铝基质与色素的分离。利用石英毛细管柱（48.50 cm（有效长度40.00 cm）×50 μm）,分别针对柠檬黄铝色淀和日落黄铝色淀进行了电泳条件的优化,并得到最优分离结果。所建立的定量分析方法的检出限对于柠檬黄铝色淀和日落黄铝色淀分别达0.26 mg/L和0.27 mg/L,线性范围分别为0.53~1.3×10²mg/L和0.54~1.4×10²mg/L,两种被分析物的测定重复性（RSD,n=6）分别为4.3%和5.7%,日间重复性（RSD,n=6）分别为5.6%和6.0%。经过更深入研究后,该方法可以发展为食品中相应色淀的检测方法。     

瑞香狼毒多糖中单糖组成的毛细管区带电泳分析

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)和1-(2-萘基)-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP)为衍生试剂,以反相高效液相色谱(RP-HPLC)和毛细管区带电泳(CZE)法对9种单糖衍生物进行了分离研究,对比确定了NMP衍生化CZE法在植物多糖单糖组成分析中的优越性。以NMP为柱前标记试剂,建立了毛细管区带电泳定量测定9种单糖的新方法。方法具有较好的重复性(相对标准偏差RSD小于4.3%),单糖衍生物检测限为0.85～1.6μmol/L,回收率为96.4%～104%。已应用于瑞香狼毒多糖样品的单糖组成分析。     

毛细管区带电泳的区带扩展和全过程模拟

本文经过适当的近似处理,对毛细管区带电泳中各种影响区带展宽的因素进行了定量分析,得到一个计算CZE区带宽度的数学表达式。理论计算与实验值对比,均方差σ的平均相对偏差在10％左右。以此为基础,得到了柱效(板高)的数学表达式,讨论了操作条件与柱效的关系。结合区带电泳中预测多肽保留值的方法,用计算机对多肽的CZE分析进行了全过程模拟。     

毛细管电泳叠加对比法测定阿片粉中吗啡的含量

 用毛细管区带电泳 ,以叠加对比法对阿片粉中的吗啡进行了定量分析 ,样品的回收率为 10 0 .6 % ,峰迁移时间的相对标准偏差 (RSD)不大于 2 .4 % ,相对迁移时间的RSD不大于 1.1% ,相对峰面积的RSD不大于 0 .5 1%。与内标对比工作曲线法作了比较 ,实验表明两种分析方法的结果无显著性差异 ,叠加对比法具有简便、快速、准确的优点 ,可用于样品中有效成分的快速定量。     

毛细管区带电泳法快速分离硝基酚和除草剂

 运用毛细管区带电泳法 ,通过在缓冲溶液中添加多阳离子化合物改变电渗流方向的方法 ,快速分离了 11种一取代、二取代和三取代硝基酚及 4种在德国常用的除草剂Bromoxynil,DNOC ,Dinoterb和Ioxynil。使用UV检测 ,这些化合物的检测限在 0 5mg/L～ 1 1mg/L。为满足环境样品分析的要求 ,使用固相萃取方法对样品进行了预处理 ,使硝基酚的检测限达到 1μg/L以下 ,并对实际样品进行了分析。     

毛细管电泳技术对单糖氨基吡啶衍生物的检测

介绍运用毛细管区带电冰（ＣＺＥ）技术对糖氨化合物进行检测的过程。分别用ｐＨ１０的Ｈ＿３ＢＯ＿３／ＫＯＨ和ｐＨ３．５的ＮａＨ＿２ＰＯ＿４／Ｈ＿３ＰＯ＿４为缓冲液对麦芽糖、鼠李糖、脱氧核糖、岩藻糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖和甘露糖进行定性,给出两种载液下的相对保留时间表。八种糖在Ｈ＿３ＢＯ＿３／ＫＯＨ缓冲液体系下除甘露糖与葡萄糖重叠成一个峰外其余都能得到良好的分离图谱,而以ＮａＨ＿２ＰＯ＿４／Ｈ＿３ＰＯ＿４为载液时这两种糖也能被分离。将上述两种方法互相补充可用于单糖组分的定性与分离。     

毛细管电泳分离氯代酚的研究

用毛细管区带电泳方法进行了氯代异构体分离的研究。使用６４．５ｃｍ×５０μｍ．Ｉ．Ｄ。石英毛细管柱，在４０％有机溶剂改性的磷酸盐缓冲溶液中，通过调节最佳ＰＨ值，达到了一次进样对所有氯代酚的基线分离。     

毛细管区带电泳法快速测定食品中的金属硫蛋白

 采用毛细管区带电泳法 (CZE) ,以 5 0cm× 75 μmi d 毛细管柱作为分析柱 ,0 .0 2mol/L磷酸二氢钠 0 .0 2mol/L磷酸氢二钠混合体系 (pH 7.0 )作为背景电解质 ,以紫外检测器在波长 2 0 0nm的条件下检测 ,对具有生物活性的金属硫蛋白 (MT)的两种异构体 (MT1,MT2 )进行了分离。样品经过预处理后 ,采用外标法可对食品中的金属硫蛋白进行定量测定。该方法的最低检测质量浓度为 1mg/L ,相对标准偏差低于 10 % ,加标回收率为 82 .0 %～93.4%。     

Capillary Zone Electrophoresis with Amperometric Detection for Composition Analysis of Laminarin

IntroductionInrecentdecades ,manykindsofplantpolysaccha rideshavebeenextensivelystudiedfortheirpotentialvalueinimmunology ,especiallyincancertherapeusis .Laminar in ,onekindofheteropolysaccharidesisolatedfromLami nariajaponica ,wasfoundtobeoneoftheinhibitorsofba sicfabriccell generationfactor (bFGF)anddepresstheformationoftubestructureofendothelialcells ,whichfur therdepresstheactivationofrats’cancercells .1Itwasal sofoundthatlaminarinsulfatecouldinhibitextracellularmatrix (ECM)degradation…     

毛细管区带电泳法分析头孢菌素类药物的纯度

摘要：提出了以pH9.20的20mmol/L硼酸缓冲溶液、pH6.86的20mmol/L磷酸缓冲溶液和pH2.05的50mmol/L磷酸缓冲溶液作为背景电解质分析9种头孢菌素类抗生素药物纯度的毛细管区带电泳方法。用内部归一化法定量,方法简单快速。讨论了方法的优点和局限性。     

糖类衍生物在毛细管区带电泳下的分离研究

以新合成的1-萘基-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP)为柱前衍生试剂,采用毛细管区带电泳模式考察并优化了糖类衍生物的分离条件。实验采用58.5cm×50μmi.d.毛细管(有效柱长50cm),55mmol/L硼酸盐缓冲溶液(pH9.46),柱温20℃,分离电压22kV,进样10s,在不加任何添加剂的情况下,高效、快速地实现了9种糖的基线分离,并在最优化条件下进行了唐古特白刺实际样品的分离分析,结果令人满意。     

Separation and Determination of D-Gluconic Acid Produced During Fermentation by Capillary Zone Electrophoresis

Abstract

A novel method was developed for separation and determination of D-gluconic acid produced during fermentation by capillary zone electrophoresis (CZE) with direct UV detection at 214 nm, using selected carrier electrolyte composed of 6 mM potassium biphthalate, 50 mM disodium hydrogen phosphate and 15% (v/v) acetonitrile. The effects of concentration of phthalate, phosphate and organic modifier (acetonitrile), as well as temperature for the separation were investigated. The method is simple, inexpensive and will make it very useful in the gluconic acid industry.