靶细胞提取和高效液相飞行时间质谱联用分析预测丹参中的活性成分

建立靶细胞提取和与高效液相飞行时间质谱联用(HPLC-ESI/TOFMS)分析相结合进行丹参活性成分研究的方法,对丹参中可能的活性成分进行了推测。将靶细胞和丹参样品一起孵育培养,根据活性成分可以与靶细胞膜有特异性的结合或者进入靶细胞内的原理,用HPLC-MS方法对培养后细胞破碎液中的成分进行分析。从加药Raw264.7细胞和Ecv304细胞破碎液中检测到丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸D、紫草酸、迷迭香酸及丹酚酸B7种丹参中成分,在加药的HL7702细胞破碎液中检测出丹参素、原儿茶醛、咖啡酸及丹酚酸B4种丹参中的水溶性成分。结果显示:细胞破碎液中检测的成分为丹参在靶细胞中有吸收的成分,本方法可用于预测中药中的活性成分。     

微流控芯片上同工酶的孵育及活性检测

建立了一种在微流控芯片上进行同工酶孵育及活性检测的方法. 该方法在集成温控装置的微流控芯片上实现对同工酶与辅酶反应进程的控制, 完成同工酶的进样、孵育反应、电泳分离和活性检测的实验步骤. 建立了基于微流控芯片的同工酶荧光检测系统, 使用360 nm光源激发辅酶产生荧光, 在460 nm处选择性采集荧光信号. 在微流控芯片上实现了同工酶样品的快速活性检测, 酶活性检测限达到0.5 U/L.     

一种基于新型RNA底物的蓖麻毒素体外脱嘌呤活性检测方法及应用

建立了一种基于新型RNA底物脱嘌呤的蓖麻毒素(Ricin)体外活性检测方法,解决了传统Ricin体外脱嘌呤活性检测方法中底物易发生自水解而产生假阳性结果的问题。比较了Ricin脱嘌呤体外活性检测中普遍使用的单链DNA及相同序列RNA底物的活性差异,证实了RNA比DNA更适于作为Ricin脱嘌呤反应底物。对脱嘌呤反应条件进行优化,发现pH值、温度和RNA底物浓度是影响脱嘌呤反应效率的关键因素,在优化条件下,阴性对照样品中无腺嘌呤干扰。进一步对系列RNA底物进行系统筛选,总结了RNA茎-环结构组成与底物活性的规律,筛选得到了一种用于Ricin体外脱嘌呤活性检测的新型RNA底物,其活性是已报道最优底物的2倍。最终,基于筛选出的新型RNA底物,结合免疫磁珠特异性亲和方法,建立了复杂基质中活性Ricin的同位素标记腺嘌呤内标-液相色谱-三重四极杆质谱多反应监测模式定量检测方法。本方法专属性好,Ricin体外脱嘌呤活性检测的线性范围为5.0～300 ng/mL,检出限为1.0 ng/mL(S/N=3)。将本方法应用于自来水、牛奶和血浆样品中活性Ricin的定量检测,加标回收率在91.0%～116....     

面向亚硝酸盐检测的电化学传感器

亚硝酸盐有毒并可致癌,是一种广泛存在于自然环境和人类的生活领域中的污染物。亚硝酸盐的快速灵敏检测成为十分必要且具有重要意义的研究工作。电化学方法由于具有反应速度快、灵敏度高、检测限低等优点而倍受青睐。本文从复合电极基底及负载不同活性物质的角度详细介绍了近年来针对亚硝酸盐电化学检测的纳米复合材料传感器的研究进展,重点详述了构建方法和检测结果。以期通过它们个性和共性的比较,对构建新型电化学传感器提供参考。     

96孔板法用于高通量血管紧张素转化酶抑制剂体外检测

为在体外迅速检测血管紧张素转化酶抑制剂( ACEI)的抑制活性,选用96孔板,以呋喃丙烯酰三肽(FAPGG)为模拟底物,通过检测血管紧张素转化酶(ACE)酶解FAPGG生成N-[3-(呋喃)丙稀醇酰-2-苯丙氨酸( FAP)和双甘氨肽(GG)后340 nm处吸光值的下降衡量ACE的活性,采用加入ACEI前后ACE的活性变化衡量ACEI的活性.考察了不同缓冲体系、Cl-浓度、ACE酶活性(ACE酶浓度)、缓冲体系的pH值等对上述检测模型反应体系的影响,建立了高通量降血压肽活性体外检测方法,本方法最多可同时检测96个样品的ACE抑制活性,上机分析时间仅需10 s.不同批次活性平行测定的相对标准偏差均小于0.001％,p=0.667＞0.05,各测定结果无显著差异,重现性好,精密度较高.采用本方法测定了商品血管紧张素转化酶抑制剂Captopril的IC50值为16.19 nmol/L,与文献报道的测定结果一致.     

毛细管电泳分离法检测新疆紫草中萘醌类成分

建立了新疆紫草萘醌类总成分的毛细管电泳分离方法,考察了检测波长、添加剂类型、进样量和分离电压对分离检测的影响。实验条件为检测波长200nm,运行缓冲液为含20%乙醇的硼酸盐缓冲液(0.1 mol/L,pH 8.0),进样量3.45kPa×5s,分离电压20kV。方法可在20 min内检测到5种活性成分,重现性良好。     

毛细管电泳检测肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物差异

以建立的毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测蛋白质的方法对提取肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物(变 性/活性)差异进行检测. 采用异硫氰酸荧光素(FITC)为衍生剂, 电泳缓冲液为1×TBE (TBE为Tris-硼酸-EDTA, 变性电泳pH 10.0, 活性电泳为pH 8.3且含有2 mg/L考马斯亮蓝), 分离电压15 kV, 柱温15 ℃, 电动进样(10 kV×10 s), 激发波长/发射波长＝488/520 nm检测时, 肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物样品得到较好分离且有明显差异. 与目前常用蛋白分析方法: 变性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)以及活性蓝绿温和胶电泳(BN-PAGE)进行比较. BN-PAGE结果显示肺癌组织相比正常组织有较明显蛋白种类差异|SDS-PAGE结果表明一些蛋白质表达量差异也是肺癌及癌旁正常组织的显著差别, 且主要集中在20～116 kDa. CE-LIF检测结果与PAGE结果大致相同, 且CE-LIF检测蛋白质的灵敏度高于PAGE, 能更准确反映肺癌及癌旁正常组织的蛋白质差异. 结论是CE-LIF可用于蛋白质差异检测, 时间短, 效果较好, 对活性蛋白质进行分析体现了其优点: 可提供较强的动力——电压, 及强动力下良好的温度稳定性.     

细胞内活性小分子近红外荧光成像探针

近年来,随着生命科学的不断发展,人们对细胞内活性小分子在病理、生理等方面的功能研究越来越深入。荧光成像作为一种直观、原位的可视化观测技术在小分子检测方面得到了广泛应用,其中基于近红外分子与纳米探针的荧光成像技术因具有背景干扰低、对细胞损伤小、样品穿透性强、检测灵敏度高等优点,显示了较好的应用前景。本文评述了近年来近红外荧光探针用于细胞内活性小分子成像检测的应用及进展,主要讨论该类方法在活性氧物质、金属离子、H+、阴离子及巯基化合物的分析应用,并对该方法的应用前景进行了展望。     

HPLC测定雄黄染毒小鼠血浆及肝脏中活性硫的含量

建立了HPLC测定雄黄染毒小鼠血浆及肝中活性硫含量的方法.结果表明,该方法准确、灵敏、可靠、检出限低.研究发现,雄黄可引起小鼠血浆、肝中活性硫水平降低.     

一种快速测定厌氧污泥活性的顶空气相色谱技术

将含有厌氧污泥的样品放入一顶空样品瓶内,在恒定的温度下平衡,并通过多次顶空抽提的方式对样品瓶中所产生的甲烷量随时间的变化进行气相色谱检测,从而实现厌氧污泥比产甲烷活性的检测。实验表明,多次顶空抽提-气相色谱测定厌氧污泥产甲烷活性的技术用约3 h就可以得出厌氧污泥产甲烷的线性规律,其结果与对比试验的数据相近。因而该方法适用于厌氧污泥活性的快速预测,可大大提高相关厌氧污泥活性测定及废水处理领域研究的效率。     

石斛中主要特征成分测定研究进展

石斛作为我国传统的中草药,具有较好的生理活性。石斛中主要的特征成分包括酚类、碱类和香豆素类化合物,对这些化合物的化学结构、检测方法、检测灵敏度及检测方法的精密度和准确度进行综述,为石斛的质量控制、产地溯源及真伪鉴别等提供技术支撑。     

人参皂苷类化合物样品前处理及分析检测

人参皂苷类化合物是参属类植物中的一类重要活性成分,主要包括原人参二醇、原人参三醇、齐墩果酸型、奥克梯隆型四类。最近,已发现的人参皂苷类化合物化学结构多达620余种,它们具有相似的化学结构,但药理活性具有明显差异。该类化合物所在基质复杂多样,选择简便高效的样品前处理方法及检测技术对于有效检测样品中人参皂苷含量至关重要。本文综述了测定各类样品中多种人参皂苷含量的样品前处理技术(溶剂提取、固相萃取等)及常用检测方法(高效液相色谱法、超高效液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法等),对各种方法的灵敏度及回收率等参数进行了总结,并评述了每种方法的优缺点及研究进展。     

基于分子信标对hOGG1活性的定量分析

设计了一种含有8-oxoG碱基的新型分子信标, 结合酶促反应发展了一种非同位素标记的人8-oxoG-鸟嘌呤糖苷酶1(hOGG1)的活性分析新方法, 检出限可达0.0125 U/mL. 此外, 该方法还可用于快速考察金属离子对酶促反应的影响和肿瘤细胞中hOGG1活性水平的定量检测. 实验结果表明, 该方法简单、 灵敏, 有望用于肿瘤样品中hOGG1活性的高通量分析和hOGG1抑制剂的筛选.     

基于核壳型结构纳米粒子的SERS活性基底研究进展

表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS)作为一种新型分析检测技术,具有检测快速、灵敏度高、非破坏性、原位检测等优点。高灵敏度、高稳定性、高增强能力及高重复性、可循环利用的SERS活性基底的制备是获得较好SERS信号的一个重要因素。与传统的单一组分SERS基底相比,将多种不同功能的纳米材料进行复合,形成的核壳型结构纳米粒子作为一种新型SERS活性基底,不仅能获得更为稳定的SERS信号,还能赋予其富集分离、催化和特异性分子识别等功能。该文综述了近年来基于复合贵金属、磁性材料、半导体、复合有机等核壳型结构纳米粒子的SERS活性基底的研究进展。     

检测活性氮物种的荧光探针

活性氮是一类具有高生物化学活性的含氮原子的化学物种。这类活性物种具有特殊的生理功能,并在生命体的生理和病理过程中起着至关重要的作用。因此,设计开发用于选择性识别和高灵敏检测生物体内的活性氮物种的技术具有十分重要的意义。荧光探针作为一种具有高灵敏度、高选择性、对生物样品损伤小的实时原位的可视化检测技术,为深入阐明活性氮物种在生理和病理过程中所起的作用提供了一个便利有效的检测手段,并已在检测活性氮物种领域中得到了广泛应用。活性氮物种荧光探针可以进一步阐述活性氮物种特殊的生理功能,提高人们对该类物种在细胞信号转导方面的认知。本文根据活性氮物种的种类对荧光探针进行了分类,详细介绍了近四年来用于检测活性氮物种的荧光探针的研究进展,主要探讨了探针的设计方法、荧光响应机制及其生物应用,并对探针的设计合成和应用前景进行了展望。     

伏安极谱仪测定海水中活性态痕量金属

阳极溶出伏安法是一种可以直接用于海水中痕量金属元素检测分析的有效方法,不仅能够实现多元素同时检测,而且不需要样品预浓缩处理.通过伏安极谱仪,研究了富集电位和富集时间等关键参数对阳极溶出伏安法测定痕量金属铜、铅、镉、锌的影响,对过滤后的海水样品直接进行检测,实现了烟台四十里湾不同站位海水中活性态痕量金属铜、铅、镉、锌的测定,为海水中痕量金属元素的形态分析及生物可利用性研究提供了有效技术手段.     

检测活性氮/活性氧的分子荧光探针

活性氮和活性氧是具有强生物活性的化学物质.在人体细胞中,由于酶促或非酶促过程均可生成过氧化物,该物种的异常水平会引起氧化损伤与衰老和各种疾病,如心血管疾病、神经性疾病、阿尔茨海默病、帕金森病甚至癌症.因此,发展选择性识别和高灵敏度的分子荧光探针,实现活性氮或活性氧的有效检测具有重要意义.分子荧光探针检测法与成像技术具有灵敏度高、选择性强、损伤性小和细胞相容性好等优点,并在阐述活性氮和活性氧的病理生理过程中起到重要作用,在生物和医学等领域应用广泛.然而,由于活性氮和活性氧自身的特殊性而存在许多难题,例如反应活性高、存在周期短等一直困扰研究人员.着重综述了近年来发展的分子荧光探针用于活性氮和活性氧的检测及细胞成像工作的研究进展,提出进一步构建新型分子荧光探针用于活性氮和活性氧检测面临的挑战、未来发展方向及展望.     

构建基于姜黄素-Hg~(2+)复合物的荧光传感器检测脂肪酶活性

以吐温40-姜黄素复合物胶束为荧光信号探针,Hg~(2+)为猝灭剂,巯基乙酸甲酯为脂肪酶的底物,构建了检测脂肪酶活性的生物传感器。利用Hg~(2+)与姜黄素β-二酮结构结合,猝灭吐温40-姜黄素复合物胶束荧光;而脂肪酶的加入催化了巯基乙酸甲酯水解生成巯基乙酸,巯基乙酸夺取姜黄素-Hg~(2+)复合物上的Hg~(2+),吐温40-姜黄素复合物胶束的荧光恢复,荧光恢复强度与脂肪酶的活性相关。利用此荧光传感策略定量检测脂肪酶活性,在最佳实验条件下,荧光强度变化值与脂肪酶活性在2~80 U/mL范围内呈线性关系,检出限为0.01 U/mL。采用此方法对另外4种商业脂肪酶的活性进行了检测,实验结果与恒电位滴定法测定结果一致。本方法检测成本低,操作简单,灵敏度高,具有良好的实用性,可用于脂肪酶活性的高通量检测。     

单壁碳纳米管修饰离子液体碳糊电极测定芦丁

类黄酮是一类多酚化合物,广泛分布于植物当中,是天然的抗氧化剂.芦丁是类黄酮化合物的一种,它能维持及恢复毛细血管的弹性、增强其抵抗力以及防止血细胞凝聚,因此可用于因毛细管脆性变差引起毛细管破裂等疾病的治疗.目前已有许多方法用于芦丁的检测,例如毛细管电泳、化学发光和电化学方法等.由于芦丁具有电化学活性,因此,芦丁也可用电化学方法检测.本文研究了芦丁在单壁碳纳米管离子液体修饰电极上的电化学行为,建立了一种直接测定芦丁的电化学分析新方法.     

口腔颌面恶性肿瘤患者血清硒,NK细胞活性检测的临床意义及评价

用气相色谱法及四甲基偶氮唑蓝法（ＭＴＴ）对３７例口腔颌面恶性肿瘤初发患者进行手术前后血清硒及外用血ＮＫ细胞活性检测，并以健康人群作对照，结果发现肿瘤患者血硒及ＮＫ细胞活性均显著低于正常水平，并且随着病情进展有进一步降低趋势；治疗（手术）后血硒及ＮＫ细胞活性则明显升高。由此认为对患者进行血硒、ＮＫ细胞活性检测可作为口腔恶性肿瘤的辅助诊断指标之一，并为判断疗效及预后提供参考。同时通过对血硒与免疫应答关系的探讨，认为将硒及ＮＫ细胞运用于肿瘤的防治中具有广阔前景。