离子色谱安培法测定尿液中的胱氨酸

建立离子色谱安培法检测尿液中胱氨酸的分析方法。将尿液稀释处理后,过OnGuardⅡRP前处理柱,去除尿液中的有机物,选用低容量阳离子交换柱IonPac CS17进行分离,以甲烷磺酸梯度淋洗,柱后用300 mmol/L NaOH溶液衍生,离子色谱脉冲安培法检测,外标法定量。胱氨酸的质量浓度在0.1~5.0 mg/L范围内与其色谱峰面积呈良好的线性,线性相关系数r^2=0.999 9,检出限为0.05 mg/L。测定结果的相对标准偏差为0.71%(n=6),样品加标回收率为94%~108%。该方法具有操作简单,专属性强,灵敏度高等优点,可用于临床快速检测尿液中的胱氨酸。     

浊点萃取-高效液相色谱法同时测定药片与尿样中异烟肼、利福平和吡嗪酰胺

建立了以聚乙二醇(PEG)6000为萃取剂的浊点萃取(CPE)-反相高效液相色谱同时测定异烟肼、利福平和吡嗪酰胺的方法,由于异烟肼不易被浊点萃取方法富集,使异烟肼与对氯苯甲醛在酸性条件下反应衍生为异烟肼腙,异烟肼腙在液相色谱上的信号与异烟肼浓度存在着线性关系.在优化的CPE条件下,采用梯度洗脱的方式,用紫外检测器在310 nm波长下,异烟肼、吡嗪酰胺和利福平的保留时间分别为14.5、34.4和38.1 min,定量范围分别是0.01～10 mg/L、0.08～25 mg/L和0.05～20 mg/L.线性相关系数r>0.99.3种药的平均回收率范围为91.50%～98.75%,精密度(RSD)为 0.22%～1.54%.异烟肼、利福平和吡嗪酰胺的检出限分别为4×10-3、2×10-2和3×10-2 mg/L.本法用于药片和尿样中3种药物的检测,结果满意.     

整体柱高效液相色谱法测定草甘膦原药中甲醛含量

建立了衍生化-高效液相色谱法对草甘膦原药中痕量甲醛含量进行测定的方法。样品中残留甲醛经超声波水浴提取，与2，4-二硝基苯肼衍生反应，生成的2，4-二硝基苯腙用反相整体柱色谱进行快速分离，在360nm紫外波长下检测，外标法定量。该分析方法在2．0～200mg/L浓度范围呈良好线性，添加回收率在88％～105％之间，相对标准偏差小于5％。样品中甲醛的最小检测浓度为0．5mg/kg。比较了整体色谱柱和常规C18反相柱分离效果，表明整体色谱柱可在1．5min内实现衍生化产物的快速分离并进行定性定量，同时发现相对于常规柱，采用整体柱提高了检测灵敏度约10倍。     

超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法快速检测尿液和血浆中鹅膏毒肽和鬼笔毒肽

建立了同时快速检测尿液和血浆中3种鹅膏毒肽和2种鬼笔毒肽的超高效液相色谱三重四极杆质谱联用分析方法。尿液样品直接进样,血浆样品经乙腈沉淀除蛋白后,在UPLCHSST3色谱柱上分离,正离子电喷雾多反应监测(MRM)模式检测,基体匹配标准外标法定量。尿液和血浆样品的线性范围分别为2～100和1～100μg/L;加标回收率分别在92.0%～108.0%和85.0%～100.0%的范围内;相对标准偏差为1.0%～22.0%和2.0%～22.0%(n=6);样品的检出限为0.2～1.0μg/L和0.1～0.5μg/L(S/N=3)。本方法灵敏,简单,快速,特异性强。     

高效液相色谱法测定人血浆中的芦氟沙星

 建立了测定人血浆中芦氟沙星质量浓度的高效液相色谱法 ,血浆用二氯甲烷提取 3次 ,以 UltrasphereODS(4.6mm i.d.× 2 5 0 mm)为色谱柱 ,流动相为甲醇 -1 0 mmol/L 溴化四丁铵 -三乙胺 (体积比为 3 2∶ 68∶0 .5 ) ,用磷酸调 p H2 .8,检测波长 2 95 nm,流速为 1 .2 m L/min,以培氟沙星为内标。血浆中芦氟沙星的线性范围为 0 .1～ 1 0 mg/L ,最低检测质量浓度为 0 .0 5 mg/L ,回收率为 99.7% ,日内、日间 RSD分别为 2 .3 3 %和3 .83 %。方法简便、快速、准确 ,适用于人血浆中芦氟沙星质量浓度的测定。     

碳青霉烯类抗生素亲水作用色谱方法研究及其应用

建立了测定人尿液和自来水中4种碳青霉烯类抗生素(比阿培南、美罗培南、多利培南和厄他培南)的亲水作用色谱方法,所用流动相具有较好的质谱兼容性,可用于色谱-质谱联用。以XAmide为色谱柱,考察了乙腈比例、缓冲盐浓度和pH值对4种抗生素保留的影响,提出了可能的保留机理;所发展的方法对目标样品具有良好的线性响应:比阿培南、多利培南和厄他培南的线性范围为0.1~250 mg/L, R²=0.9999;美罗培南的线性范围为0.5~250 mg/L, R²=0.9998; 4种抗生素的定量限(LOQ)为0.1~0.5 mg/L。尿液样品和自来水样品在5 mg/L和25 mg/L两个水平的加标回收率分别为100.4%~111.9%和79.6%~107.4%,相对标准偏差(RSD)分别不大于1%和5%。该方法准确、灵敏、简便,可用于人尿液和自来水中多种碳青霉烯类抗生素的检测。     

高效液相色谱-荧光检测法测定血浆中总同型半胱氨酸

 建立了测定血浆中总同型半胱氨酸的柱前衍生、高效液相色谱-荧光检测的分析方法。以Br omobimane作荧光剂,对巯基进行衍生。同型半胱氨酸的最低检测浓度为0.5 μmol/L,线性 浓度范围是2.5～80.0 μmol/L,回收率为94.0%～112.0%,批内、批间相对标准偏差都小于5. 6%。 关键词：     

三相中空纤维式液相微萃取用于快速富集血浆中的尼古丁

建立了一种以三相中空纤维式液相微萃取(TP-HF-LPME)进行样品前处理,采用高效液相色谱快速、准确测定血浆中尼古丁含量的方法。研究表明该方法集萃取、富集、净化为一步,极大地简化了传统血浆成分测定的前处理过程,是一种快速、有效、绿色的前处理方法。方法的线性范围为0.1～50 mg/L,相关系数(r2)为0.9996,检测限为0.05 mg/L (信噪比为3),相对标准偏差小于5%。     

柱后衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定面粉中的过氧化苯甲酰

利用过氧化苯甲酰能够在氯化血红素的催化下将底物对羟基苯乙酸氧化成具有荧光的二聚体的性质,建立了柱后衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定面粉中过氧化苯甲酰的方法。优化了色谱分离条件和柱后衍生条件,结果表明:催化剂氯化血红素的浓度为8μmol/L,底物对羟基苯乙酸的浓度为80μmol/L,衍生化试剂的pH 10.5,衍生温度为35℃时衍生效率最高。在优化条件下,过氧化苯甲酰的线性范围为0.5～100 mg/L;样品的检出限为1 mg/kg,样品的加标回收率为98.5%～99.5%。本方法与现有的高效液相色谱法相比,检测面粉中过氧化苯甲酰具有抗干扰能力强,灵敏度高。     

高效液相色谱法测定小鼠血浆和脑中的丹参酮ⅡA及药代动力学研究

建立了小鼠血浆和脑中丹参酮ⅡA(TsⅡA)的高效液相色谱分析法,并用于测定静脉给药后小鼠血浆和脑中TsⅡA浓度的动态变化及药动学参数。小鼠尾静脉注射TsⅡA单体8.0 mg/kg,血浆及脑样品经乙酸乙酯萃取后,用HPLC法检测。所建立的血浆样品分析方法线性范围为0.05~7.12 mg/L,相关系数r=0.9984;脑样品分析方法线性范围为0.022~2.37 mg/L,相关系数r=0.9988;血浆和脑样品中最低定量限分别为0.0498和0.022 mg/L;检出限分别为0.0255和0.0166 mg/L;日内和日间RSD<10.3%。本方法专属、准确、灵敏,可以定量检测小鼠静脉注射后TsⅡA在血和脑中的浓度。TsⅡA静脉给药后,小鼠血浆中TsⅡA浓度-时间变化可用三室模型拟合,峰浓度为1.58 mg/L,AUC(0-t)值为68.18 mg/L.min。给药后5 min TsⅡA在小鼠脑中即可达峰值0.17 mg/L,且480 min时仍能在脑组织中测到,表明TsⅡA能很快透过血脑屏障,且能在脑组织中停留较长时间。     

柱前衍生反相高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠血浆中的奈替米星

建立了一种简便、灵敏的氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)柱前衍生反相高效液相色谱-荧光检测血浆中奈替米星的新方法,同时研究了其药代动力学。对色谱条件进行了优化,采用ZORBAX Eclipse XDB-C8柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(体积比为85:15),流速为1.0 mL/min,荧光检测激发波长为265 nm,发射波长为315 nm,得到奈替米星的平均加标回收率为96.62%～100.84%(n=3),对奈替米星检测的线性范围为0.045～8.88 mg/L,相关系数为0.9993,方法的日内与日间精密度分别低于3%与3.5%,最低检出限(S/N=3)与定量限(以3倍检出限计)分别为0.01和0.03 mg/L。方法简便、快速、灵敏,样品用量少(30 μL奈替米星血浆溶液已能满足该药含量的测定以及药物代谢的研究),为大鼠体内奈替米星的药代动力学研究提供了可靠的分析手段。     

Sensitive determination of aliphatic amines by high-performance liquid chromatography with a new fluorogenic probe 3-(4-fluorinebenzoyl)-2-quinoline carboxaldehyde

A new fluorogenic reagent 3-(4-fluorinebenzoyl)-2-quinoline carboxaldehyde (FBQCA) has been synthesized and used as a derivatizing reagent for the determination of aliphatic amines with HPLC. The reagent is nonfluorescent, but forms highly fluorescent isoindole upon the reaction with primary amines in alkaline medium. Eleven amine derivatives were baseline separated in 8 min using a gradient elution on a C(8) column and detected with fluorescence detection at lambda(ex)/lambda(em) = 480/546 nm. The detection limits were in the range of 0.5-2 nM (S/N = 3). The proposed method has been successfully applied to the analysis of aliphatic amines in food and environmental samples, including white wine, soybean oil, soil, and tap water with satisfactory recoveries in the range of 94-106%.     

The use of 3-(2-pyridyl)-5,6-diphenyl-1,2,4-triazine as a precolumn derivatizing reagent in HPLC determination for Fe(II) in natural samples.

3-(2-Pyridyl)-5,6-diphenyl-1,2,4-triazine (PDT) was used for the first time as a precolumn derivatizing reagent in the high-performance liquid chromatography (HPLC) method with UV absorbance detection for the Fe(II) determination. The Fe(II) reacts with PDT to form a magenta colored chelate in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS) and acetic acid-sodium acetate buffer solution medium of pH 4.65. The selection of maximum absorbance detection wavelength and the optimum composition of the organic modifier in the mobile phase were investigated in detail for the quantitative determination of Fe(II) using HPLC system. The formed Fe(II)-PDT chelate was satisfactorily separated from PDT on an Agilent Shim-pack ODS column (Eclipse XDB-C8, 4.6 x 150 mm) by isocratic elution with acetonitrile and 0.02 mol L(-1) acetic acid-sodium acetate buffer solution (pH 4.65, containing 0.02% of SDS and 60 x 10(-3) mol L(-1) NaClO(4)) as mobile phase at a flow rate of 1 mL min(-1), and monitored with a multiple wavelength detector. The detection limit (S/N = 3) is 0.35 ng mL(-1). Due to the excellent separation ability of HPLC, the innovative introduction of PDT as the precolumn derivatizing reagent, and the proper selection of the detect wavelength, the sensitivity of our newly developed HPLC method was enhanced remarkably compared to those of the common spectrophotometric methods. The developed HPLC method was successfully applied to the determination of Fe(II) in lake water samples.     

6-oxy-(acetyl piperazine) fluorescein as a new fluorescent labeling reagent for free fatty acids in serum using high-performance liquid chromatography

A new fluorescein-based fluorescent derivatizating reagent, 6-oxy-(acetyl piperazine) fluorescein (APF), has been designed, synthesized and developed for carboxylic acid labeling. It was used as a pre-column derivatizing reagent for the determination of seven free fatty acids (lauric acid, myristic acid, arachidonic acid, linoleic acid, palmitic acid, oleic acid, and stearic acid) with high-performance liquid chromatography (HPLC). The derivatization reaction of APF with seven fatty acids was completed at 60 degrees C for 1 h using 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDC) as the condensing reagent. On a C18 column, the derivatives of APF with seven free fatty acids could be separated completely in 22 min using a mobile phase of methanol-water (88:12, v/v) containing 7 mmol L(-1) pH 6.5 Na2HPO4-H3Cit3 buffer with fluorescence detection at lambdaex/lambdaem=467/512 nm. The detection limits could reach 0.1-6.4 nmol L(-1) (signal-to-noise=3). This reagent was applied to the determination of the free fatty acids in human serum samples with satisfying recovery efficiencies varying from 93 to 105%.     

对甲氧基苯磺酰氯柱前衍生测定尿中游离羟脯氨酸与脯氨酸

以对甲氧基苯磺酰氯为衍生试剂,建立了分离测定人尿中游离羟脯氨酸和脯氨酸的高效液相色谱方法。考察了衍生温度、衍生缓冲液pH值、衍生时间、衍生剂用量对衍生反应的影响以及流动相组成、流动相缓冲液浓度、pH值和柱温对分离的影响。在优化条件下,羟脯氨酸和脯氨酸分别在5～100μmol/L和5～250μmol/L范围内呈良好线性,相关系数分别为0.999 4、0.999 5,检出限(S/N=3)分别为0.50 nmol/L和0.20 nmol/L,回收率(n=5)分别为95%～99%和96%～102%,相对标准偏差分别为2.1%～4.3%和2.0%～4.8%。该方法可用于人尿中游离羟脯氨酸和脯氨酸的定性定量分析。     

丹磺酰氯柱前衍生-超高效液相色谱-串联质谱法测定人体尿样中的环己胺

建立丹磺酰氯柱前衍生-超高效液相色谱-串联质谱法测定人体尿样中环己胺的方法。冷冻样品经解冻、离心后,用丹磺酰氯衍生,固相萃取小柱净化。目标化合物采用 Waters ACQUITY CSHTM C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,以甲醇和0.002 mol/L乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源电离、正离子多反应监测模式质谱检测。环己胺在2.5~200μg/L浓度范围内有较好的线性关系,相关系数大于0.999,回收率为98.7%~102.3%,精密度为3.1%~5.2%,检出限和定量限分别为1.0和3.0μg/L。结果表明,本方法操作简单、准确可靠,可适用于人体尿液中环己胺的定量分析。应用本方法测定200份学生尿液样品,环己胺检出率为34.5%。     

高效液相色谱法测定土壤中香豆素类灭鼠药残留

建立了测定土壤中杀鼠灵、杀鼠醚、溴敌隆、氟鼠灵、溴鼠隆5种香豆素类灭鼠药残留量的柱后衍生荧光检测高效液相色谱方法。样品在加入内标物氯杀鼠灵后用丙酮-氨水-甲醇（体积比为100：3：100）混合液提取,浓缩的提取液用5 mL正己烷-氯仿（体积比为3：1）混合液溶解,NH₂固相萃取小柱净化,用15 mL 50 mmol/L四丁基磷酸二氢铵甲醇溶液洗脱分析物,移除溶剂,用甲醇-0.25%（体积分数）乙酸水溶液（体积比为3：2）混合液溶解,过滤后,经高效液相色谱分离,以甲醇-氨水-水（体积比为1：1：8）混合液为衍生试剂进行柱后衍生,采用荧光检测器检测。杀鼠灵、杀鼠醚、溴敌隆、氟鼠灵、溴鼠隆5种鼠药在0.02～10.00 mg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,定量限（LOQ,S/N=10）为2.2～18.5 μg/L。在0.1～0.3 mg/kg添加水平内,5种灭鼠药的回收率为94.6%～118.0%,相对标准偏差（RSD）为0.8%～10.2% （n=3）。实验结果表明该方法灵敏、准确,重复性好。     

高效液相色谱法同时测定尿液中4种非蛋白氮的含量

建立了高效液相色谱(HPLC)同时测定尿液中4种常见的非蛋白氮物质--肌酸(Cr)、尿肌酐(Cn)、尿酸(Ua)及假尿嘧啶核苷(Pu)含量的方法。尿液首先经丙酮沉淀法除去大分子化合物,然后冷冻干燥,复溶后直接进行HPLC分析。色谱分离选用Waters RP18 Column (150 mm×4.60 mm,3.5 μm),以10.0 mmol/L磷酸缓冲溶液 (pH 4.78)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,于220 nm波长下检测,可在7 min内完成4种非蛋白氮的快速分离分析。结果表明Cr、Cn、Ua、Pu在0.1~250 mg/L范围内线性关系均良好(相关系数均大于0.999),检出限分别为9.31、26.19、4.70、6.30 μg/L,加标回收率为81%~111%,峰高的相对标准偏差(RSD, n=3)为0.23%~2.78%,满足定量要求。该法简便、快速,结果准确可靠,为2型糖尿病(T2DM)患者肾功能损坏的研究提供了检测手段。     

Determination of 2-mercaptopropionylglycine in plasma and urine by high-performance liquid chromatography

Methods for quantitative analysis of total and non-protein-bound 2-mercaptopropionylglycine (2-MPG) in plasma, and total 2-MPG in urine, have been developed. By reduction of urine, plasma or deproteinized plasma samples with tributylphosphine, 2-MPG is liberated from its disulphides, and after clean-up of the sample, 2-MPG is derivatized with N-(7-dimethylamino-4-methyl-3-coumarinyl)maleimide (DACM). The 2-MPG-DACM derivative is then quantified by high-performance liquid chromatography (HPLC) with fluorimetric detection. Both ion-suppression and ion-pair HPLC gave satisfactory chromatograms. The precision of the methods was satisfactory (coefficient of variation 3.1-5.8%), analytical recovery was quantitative (85-99%) and the two HPLC techniques were well correlated (r = 0.99). Five healthy subjects receiving 500 mg of 2-MPG showed maximal total plasma concentration of 13.8-26.9 mumol/l at 3-5 h after intake, and their non-protein-bound 2-MPG was, at the same time, 62-77% of the total 2-MPG. The urinary excretion was 27.8 +/- 3.8% (mean +/- S.D.) of the given dose, most of it excreted within 12 h after intake.     

电感耦合等离子体质谱法快速测定尿、血液和头发中的铊含量

采用电感耦合等离子体质谱法快速测定了尿、血液和头发中的铊含量。以^115In作内标,方法检出限为0．0055ng·mL^-1（3δ）,标准曲线范围为1～1000ng·mL^-1（r=0．9998）,相对标准偏差为2．8％（n=10）,加标回收率在94％～104％之间。