金属标记结合高效液相色谱-选择离子监测质谱的蛋白质绝对定量新方法

建立了金属标记结合高效液相色谱-选择性离子监测质谱(SIM)的蛋白质绝对定量新方法。实验考察了金属标记效率、金属标记的稳定性、标记后肽段的色谱保留和质谱行为、新定量方法的线性范围和准确度。实验结果表明金属标记具有标记效率高,稳定性好,色谱保留行为一致等优点。另外,金属标记-选择离子监测质谱绝对定量方法灵敏度高,其定量限低至1 fmol,线性范围为1~500 fmol,线性范围内R2值大于0.99,具有良好的线性关系;经过测量,标准肽段的回收率为117.01%,说明该方法具有较高的准确度。将该方法应用于腾冲嗜热菌中烯醇酶蛋白的定量分析,相对标准偏差为5.47%,表明该方法的精密度高。以上结果表明该方法可以用于生物样本中的蛋白质的绝对定量分析,为比较简单的生物样本中蛋白质的绝对定量方法提供了一种新的选择。     

18O同位素标记定量肽段串联体蛋白质结合同位素稀释-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法

建立了定量肽段串联体蛋白质(concatamers of Q peptides, QconCATs)结合¹⁸O同位素标记-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法。首先对QconCAT重组蛋白质进行了纯度表征,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表征结果表明重组蛋白质的纯度在99%以上,相对分子质量约为63.4 kDa。对QconCAT重组蛋白质酶切后的肽段混合物进行质谱分析,并经pFind和pLabel软件处理,验证了目标肽段。还考察了QconCAT重组蛋白质的酶切效率和¹⁸O标记效率,并对QconCAT蛋白质结合¹⁸O标记-同位素稀释-多反应监测质谱方法进行了评价。实验结果表明,采用该方法对腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis, TTE)中选定蛋白质的肽段进行绝对含量测定时,相对标准偏差小于20%,准确度较高,说明该方法可用于复杂生物样本中蛋白质的绝对定量。更重要的是所建方法不仅解决了细胞培养氨基酸稳定同位素标记(SILAC)技术的重标试剂价格昂贵的问题,也为定量蛋白质组学提供了一种新的方法。     

基于生物质谱的定量蛋白质组学研究进展

随着蛋白质组研究和生物质谱技术的发展,大规模的蛋白质组相对定量和绝对定量已经成为了解生命活动进程、疾病发生发展过程以及生物标志物筛选和验证的重要策略,并形成蛋白质组学研究领域的一个重要分支：定量蛋白质组学.综述了近年来定量蛋白质组学的研究进展,并对其中的关键技术进行讨论.     

多反应离子的质子转移反应质谱

在无放射性辉光放电离子源内, 采用不同试剂气体进行放电, 为质子转移反应质谱(PTR-MS)新增了强度在10⁵ cps量级的3种反应离子NH₄⁺, NO⁺和O₂⁺, 纯度大于95%; 测试了这3种反应离子的离子-分子反应特征. 采用H₃O⁺, NH₄⁺, NO⁺和O₂⁺等4种反应离子对同分异构体丙醛/丙酮进行检测发现, H₃O⁺和NH₄⁺均不能区分的丙醛/丙酮可采用NO⁺或O₂⁺进行区分. 结果表明, 增加反应离子不仅使PTR-MS的可检测有机物范围不再局限于质子亲和势(PA)大于H₂O的有机物, 还提高了PTR-MS区分同分异构体的能力.     

气相色谱-质谱/选择离子监测法用于苯乙烯不对称环氧化反应的筛选（英文）

建立了苯乙烯不对称环氧化反应的气相色谱-质谱/选择离子监测(GC-MS/SIM)筛选方法。以乙苯为内标,利用GC-MS/SIM对苯乙烯环氧化反应样品进行分析,在选定的分析条件下完全分离并准确测定了苯乙烯和环氧苯乙烷对映异构体的含量,同时利用该方法对苯乙烯环氧化反应的正交试验进行了评估。该方法具有以下优点:高精密度(以RSD表示的精密度为12%~52%,n=5)、良好的线性关系(苯乙烯、(R)-环氧苯乙烷和(S)-环氧苯乙烷标准曲线的相关系数分别为0999 7、0993 2和0996 3)、低定量限(苯乙烯、(R)-环氧苯乙烷和(S)-环氧苯乙烷的定量限分别为13、11和07 mg/L)以及合理的回收率(982%~1082%)。该方法为苯乙烯及其同系物的不对称环氧化反应提供了一种新的分析测定途径。     

色谱质谱中的选择离子监测方式定量分析柴油机排气微粒中多环芳香烃

使用色谱－质谱联用中的选择离子监测的方法选择性地检测柴油机排气中的多环芳香烃,采用１４种多环芳香烃混合标准样品绘制校正曲线,以外标法对柴油机排气微粒中的ＰＡＨｓ进行定量分析。实验结果表明,该方法能够减少其它类有机成份的干扰,快速、准确地测量柴油机排气微粒中多环芳香烃的含量,且重复性较好,相对标准偏差低于 １２％（ｎ＝６）,检出限为３．５～７．０ｐｇ／ｍ３,样品的回收率为７９％～８９％,方法用于柴油机排气微粒中多环芳香烃排放量的测定取得了满意的效果。     

液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用分析河豚毒素

应用C18反相色谱柱和HILIC亲水作用色谱柱,建立了河豚毒素(TTX)的液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用分析方法。应用反相色谱法,在选择离子监测(SIM)模式下,对TTX的分析具有良好的线性响应(r=0.9992),方法检出限(S/N=3)为120pg,相对标准偏差(RSD)低于10%;应用亲水色谱法,在SIM和选择反应监测(SRM)模式下同样具有良好的线性响应(r=0.9996和r=0.9998),检出限(S/N=3)分别为15pg和3.75pg,在SIM模式下RSD低于10%,在SRM模式下RSD处于10%~20%之间。亲水作用色谱柱大大提高了方法的灵敏度,由于SIM模式具有较高的精密度,建议应用HILIC色谱柱的SIM模式定量分析TTX。     

射频四极杆离子导向用于质子转移反应飞行时间质谱的传输特性研究

射频四极杆离子导向器(RF-QIG)具有结构简单、传输效率高等优点,被广泛应用于各类质谱系统中。本研究将自主研制的RF-QIG集成于质子转移反应飞行时间质谱(PTR-TOF MS),考察了此装置在不同工作频率及电压幅值下对不同质荷比(m/z)离子的传输特性。结果表明,此RF-QIG在频率低于1 MHz时,无法传输m/z<40的离子,而H₃O⁺(m/z 19)和H₂O·H₃O⁺(m/z 37)在2.48和3.43 MHz频率下获得了非常强的质谱信号。此外,对于较高质量数的离子,如[C₃H₆O+H]⁺(m/z 59)、[C₆H₆+H]⁺(m/z 79)和[C₇H₈+H]⁺(m/z 93),均在2.48 MHz获得最强信号。MATLAB对有效电势的求解结果表明,电压幅值不变时,频率越...     

选择离子流动管质谱对汽车尾气成分的分析

运用选择离子流动管质谱(SIFT／MS)装置,以H3O^ 、NO^ 、O2^ 为初始离子对安装有催化转换装置的汽油车引擎启动5min后的尾气进行了取样分析,结果表明,尾气中含有大量的C—H化合物(包括烷烃、烯烃、炔烃、二烯烃以及芳香烃),含氧有机物(包括醛、酮、醇)以及NH3和NOx等污染成分。其中,NO的含量最高,它的浓度比其它所有SIFT／MS装置所能测量到的各种物质的总和还多;在C—H化合物中以芳香烃的含量最高,约占整个C—H化合物含量的一半以上;在含氧有机物中以醛类物质的含量最高。初步讨论了这些成分的形成动力学过程,对引擎冷启动和热启动时的尾气成分进行了分析,结果表明：冷启动尾气中C—H化合物和NOx的含量是热启动的3—5倍,而含氧有机物的含量没有很大的变化,此结果也证明了尾气的催化转化装置是一种减少尾气中C—H化合物和NOx污染物的一种有效的控制方法。这也证明了SIFT／MS技术是一种有效的分析痕量有机污染物的方法。     

基于质谱技术蛋白质定量方法的研究进展

质谱技术已经成为目前蛋白质鉴定的重要工具。定量分析细胞内蛋白质组的动态变化,是当前研究蛋白质功能、揭示细胞生物机理、寻找疾病蛋白标记物和药物靶标的迫切需要。本文综述了基于质谱技术蛋白质定量的策略、方法和应用等方面近年来的进展,评述了几种蛋白质质谱定量方法的特点和应用潜力。     

近红外成像用于双向电泳前的蛋白质快速定量

双向电泳(Two-dimensional Electrophoresis,2D)是蛋白质组学研究过程中的常用技术,而蛋白质样品的准确定量是做好双向电泳的前提条件。由于双向电泳的蛋白质样品在定量时存在试剂兼容性的问题,故需使用GE或Bio-rad公司研发的双向电泳专用蛋白质定量试剂盒,但此类试剂盒价格高昂且操作繁琐,因此亟待开发一种快速、准确、成本低廉的蛋白质定量方法。通过研究发现,蛋白质溶液与考马斯亮蓝-G250混合后,在近红外荧光成像系统680nm波长下可以被激发出荧光,且当蛋白质浓度在0.01~0.2mg·mL~(-1)范围内时,其荧光强度与蛋白质浓度具有很好的线性关系。基于此特点,建立了一种以96孔板为载体,利用近红外成像技术对蛋白质样品进行定量的方法,该方法可用于双向电泳前蛋白质样品的快速定量。     

High-Throughput Quantitation of Cannabinoids by Liquid Chromatography Triple-Quadrupole Mass Spectrometry

The high-throughput quantitation of cannabinoids is important for the cannabis industry. As medicinal products increase, and research into compounds that have pharmacological benefits increase, and the need to quantitate more than just the main cannabinoids becomes more important. This study aims to provide a rapid, high-throughput method for cannabinoid quantitation using a liquid chromatography triple-quadrupole mass spectrometer (LC-QQQ-MS) with an ultraviolet diode array detector (UV-DAD) for 16 cannabinoids: CBDVA, CBDV, CBDA, CBGA, CBG, CBD, THCV, THCVA, CBN, CBNA, THC, Δ8-THC, CBL, CBC, THCA-A and CBCA. Linearity, limit of detection (LOD), limit of quantitation (LOQ), accuracy, precision, recovery and matrix effect were all evaluated. The validated method was used to determine the cannabinoid concentration of four different Cannabis sativa strains and a low THC strain, all of which have different cannabinoid profiles. All cannabinoids eluted within five minutes with a total analysis time of eight minutes, including column re-equilibration. This was twice as fast as published LC-QQQ-MS methods mentioned in the literature, whilst also covering a wide range of cannabinoid compounds.     

质子转移反应质谱的建立与性能研究

报道了自行研制的质子转移反应质谱的基本结构和性能。利用水蒸气辉光放电产生了反应离子H3O ,以合成空气为反应气体,测量了H3O 与合成空气中的水反应产生的团簇离子H3O (H2O)n的质谱。实验发现,当漂移管电场与分子密度比值为144Td时,增加的离子能量可以阻止团簇离子H3O (H2O)n的形成,质谱观察到的离子主要是H3O ,其纯度可达99%以上,这时H3O 与有机物分子如甲苯的质子转移反应的产物离子也呈单一形式,团簇离子得到很好地抑制。根据离子强度和离子反应时间等参数,获得了PTR-MS目前的检出限为10-8(V/V)。利用PTR-MS对标准浓度甲苯及其稀释气体进行检测,表明PTR-MS在线定量检测准确性良好,线性动态范围跨越3个数量级,能够应用于大气中痕量挥发性有机物的实时在线测量。     

稳定同位素iTRAQ标记/高效液相色谱-串联质谱法同时定量分析人体中42种氨基酸及典型病例

建立稳定同位素iTRAQ标记/高效液相色谱-串联质谱法同时定量分析人体中42种氨基酸的方法.人生物样本经磺基水杨酸沉淀蛋白,稳定同位素iTRAQ-115衍生化后,加入iTRAQ-114同位素标记的氨基酸内标液进样,选用AAA-C18色谱柱,以水乙腈(含有0.01％七氟丁酸、0.1％甲酸)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行检测.同位素内标消除了系统误差,实现了氨基酸的定量分析,42种氨基酸及同分异构体均能基线分离.本方法快速、灵敏、专属性强、高通量,可用于临床氨基酸代谢疾病的诊疗和营养评估.     

Development and Validation of an Innovative Analytical Approach for the Quantitation of Tris(Hydroxymethyl)Aminomethane (TRIS) in Pharmaceutical Formulations by Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry

A novel COVID-19 vaccine (BriLife^®) has been developed by the Israel Institute for Biological Research (IIBR) to prevent the spread of the SARS-CoV-2 virus throughout the population in Israel. One of the components in the vaccine formulation is tris(hydroxymethyl)aminomethane (tromethamine, TRIS), a buffering agent. TRIS is a commonly used excipient in various approved parenteral medicinal products, including the mRNA COVID-19 vaccines produced by Pfizer/BioNtech and Moderna. TRIS is a hydrophilic basic compound that does not contain any chromophores/fluorophores and hence cannot be retained and detected by reverse-phase liquid chromatography (RPLC)-ultraviolet (UV)/fluorescence methods. Among the few extant methods for TRIS determination, all exhibit a lack of selectivity and/or sensitivity and require laborious sample treatment. In this study, LC–mass spectrometry (MS) with its inherent selectivity and sensitivity in the multiple reaction monitoring (MRM) mode was utilized, for the first time, as an alternative method for TRIS quantitation. Extensive validation of the developed method demonstrated suitable specificity, linearity, precision, accuracy and robustness over the investigated concentration range (1.2–4.8 mg/mL). Specifically, the R² of the standard curve was >0.999, the recovery was >92%, and the coefficient of variance (%CV) was <12% and <6% for repeatability and intermediate precision, respectively. Moreover, the method was validated in accordance with strict Good Manufacturing Practice (GMP) guidelines. The developed method provides valuable tools that pharmaceutical companies can use for TRIS quantitation in vaccines and other pharmaceutical products.     

绝对质谱法测量钐同位素丰度

使用高浓缩同位素的^152Sm和^154Sm配制不同丰度的Sm基准溶液,对多接收电感耦合等离子体质谱（MC-ICPMS）的系统偏差进行校准,求出^154Sm／^152Sm的平均校准系数。采用指数函数式推算出其它同位素比的校准系数。对天然样品的测量结果进行校正,并与表面热电离质谱的测量结果进行了比较,主同位素对的丰度比误差小于0．03％。实验结果表明,MC-ICPMS测量的影响因素多,系统偏差较大,但是通过校正可以获得与表面热电离质谱一致的测量结果。通过实验,建立了MC-ICPMS的同位素丰度绝对测量方法。     

质子转移反应质谱在线检测痕量挥发性有机物

质子转移反应质谱是近年来兴起的一种痕量挥发性有机物在线检测技术,它可以在秒量级的时间内获得ppt量级的探测灵敏度,已经广泛的应用在环境污染监测、医学诊断、食品成分和质量检验等领域。本文介绍了它的工作原理和装置结构,给出了一些痕量挥发性有机物检测的例子,以及作者实验室使用该技术检测挥发性有机物的初步研究结果,并对该在线检测技术的发展方向进行了展望。