基于HRP直接标记的流感病毒H1N1电化学免疫传感器

构建了一种新型、灵敏、便捷式流感病毒免疫传感器,通过在金电极表面键合抗-HA单克隆抗体,选择性捕获目标H1N1流感病毒。该方法基于吸附在病毒表面的辣根过氧化物酶(HRP)在亚甲基蓝(MB)溶液中可有效催化还原H2O2,利用方波伏安法(SWV)考察了还原峰电流的变化,从而实现了对抗原病毒的特异性识别。实验表明所构建的免疫传感器对H2O2-MB体系表现出快速的电流响应以及良好的稳定性,对流感病毒H1N1检测的动态响应范围为0.01~2.0μg/m L,检出限(S/N=3)为5.0 ng/m L。结果证明HRP可作为一种简单快速的探针用于流感病毒的实时监测。     

ODA-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出邻联茴香胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系,并用于测定HRP和HRP标记物.该方法是将HRP催化H_2O_2氧化邻联茴香胺的酶催化反应与邻联茴香胺的氧化产物的电极还原反应相偶合,在BR缓冲溶液中,在-0.56V(SCE)左右产生灵敏的极谱波.应用此极谱波测定HRP的检测限为3.7×10~(-12)g/mL,线性范围为1.O×1O~(-11)～2.0×10~(-9)g/mL.对邻联茴香胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的偶合反应机理及电极还原过程进行了较详细的探讨.     

联苯胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析体系测定植物病毒TMV和TRSV

提出了联苯胺－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析体系测定植物病毒烟草花叶病毒（ＴＭＶ）和烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）的新方法。ＨＲＰ标记的羊抗兔酶标记抗体ＩｇＧ－ＨＲＰ可以催化Ｈ２Ｏ２氧化联苯胺的反应,其氧化产物在Ｂｒｉｔｏｎ－Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（ＢＲ）缓冲溶液中在－０．６２Ｖ（ＳＣＥ）左右产生灵敏的线性扫描二阶导数伏安峰,可以测定ＩｇＧ－ＨＲＰ。根据ＩｇＧ－ＨＲＰ与植物病毒及其抗血清的免疫反应,可以间接测定植物病毒。本法测定ＴＭＶ的检出限为０．２５ｎｇ／ｍＬ,线性范围为０．２５～５０００ｎｇ／ｍＬ;测定ＴＲＳＶ的检出限为１．５ｎｇ／ｍＬ,线性范围为１．５～３０００ｎｇ／ｍＬ;测定ＴＭＶ烟草病叶澄清液的最高稀释比为１∶１００００。检测灵敏度高于酶联免疫吸附显色光度法（ＥＬＩＳＡ）     

OPD-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析体系酶催化反应的研究

应用电化学分析、高效液相色谱、紫外-可见光谱、红外光谱和核磁共振等技术对邻苯二胺(OPD)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析体系的酶催化反应进行了详细深入的研究.用化学方法制得了HRP酶催化H2O2氧化OPD的产物纯品.伏安法和高效液相色谱实验说明,在所选择的酶催化反应条件下,酶催化反应只生成一种产物;经紫外-可见光谱,红外光谱和13C核磁共振谱鉴定,产物为2,3-二氨基吩嗪.写出了酶催化反应过程,同时对酶催化反应产物的电极还原过程也进行了研究.     

OT-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系

本文首次提出了邻联甲苯胺(OT)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系。本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H2O2氧化OT的产物, 用于游离HRP和各种HRP标记物测定, 灵敏度比经典的ELISA光度法分别高两个至四个数量级。测定游离HRP的检测限达到1.8×10^-^1^2 g/mL, 线性范围为5.0×10^-^1^2-1.0×10^-^8 g/mL。对此伏安酶联免疫分析新体系的偶合反应机理及电极还原过程也进行了详细的研究。     

基于Ru@SiO_2的微囊藻毒素电化学发光免疫传感器研究

本研究在玻碳电极(GCE)表面电沉积金纳米粒子(Au NPs),通过化学吸附将微囊藻毒素-(亮氨酸-精氨酸)(MC-LR)的单克隆抗体(anti-MC-LR)固定在电沉积了Au NPs的玻碳电极表面,以牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性吸附位点,制得免疫电极anti-MC-LR/Au NPs/GCE。采用微乳化法制备了掺杂三(2,2'-联二吡啶)钌(Ⅱ)配合物离子(Ru(bpy)2+3)的二氧化硅纳米粒子(Ru@SiO2),利用透射电镜和扫描电镜对所制备的纳米粒子进行表征。3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTS)进一步与Ru@SiO2反应,制得氨基功能化的Ru@SiO2,通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化辣根过氧化物酶标记的MC-LR(HRP-MC-LR),并使其与氨基功能化的Ru@SiO2偶联,制得MC-LR-Ru@SiO2。采用直接竞争模式,在标记物MC-LR-Ru@SiO2存在下,以三丙胺作为共反应物,利用电化学发光法(ECL)测定溶液中的微囊藻毒素,免疫反应完成后,电化学发光强度(I)随着MC-LR浓度的增大而减小,且在0.100~100μg/L范围内,电化学发光强度差值(ΔI)与游离的MC-LR浓度的对数呈良好线性关系,检出限为0.007μg/L。对实际水样进行了加标回收实验,回收率为95.5%~105%。     

联本胺—H2O2—HRP伏安酶联免疫分析体系测定植物病毒TMV和TRSV

提出了联苯胺－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶伏安酶联免疫分析体系测定植株病毒烟草花叶病毒（ＴＭＶ）和烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）的新方法。ＨＲＰ标记的间抗兔酶标记抗体ＩｇＧ－ＨＲＰ可以催化Ｈ２Ｏ２氧化联苯胺的反应，其氧化产物在Ｂｒｉｔｔｏｎ－Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（ＢＲ）缓冲溶液中在－０．６２Ｖ（ＳＣＥ）左右产生灵敏的线性扫描二阶导数伏安峰，可以测定ＩｇＧ－ＨＲＰ。根据ＩｇＧ－ＨＲＰ与植物病毒及其抗血清的免疫反应     

对氟苯酚-H2O2-HRP体系酶联荧光免疫分析方法研究

HRP可催化对氟苯酚和H2O2的反应,反应所生成的F-的量与HRP的活性成正比,通过离子选择性电极测定反应所生成的F-的量就可对HRP及其标记物进行定量测定[1～4],但灵敏度不高.根据上述原理采用荧光法对HRP进行定量测定的方法目前还未见文献报道.据文献[5,6]报道,F-可增强锆-钙黄绿素蓝二元配合物的荧光强度,但不改变其激发和发射波长.用此体系测酶促反应所释放的F-,就建立了一个新的测定HRP的荧光方法.该方法测定HRP及其标记物,具有灵敏、线性范围宽和检出限低的特点.该法用于测定人体外周血中乙肝表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb),与ELISA显色法[7]作对照,结果令人满意.     

OARP—H2O2—HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清甲胎蛋白

本文提出邻氨基酚（ＯＡＰ－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析体系并用于人血清中甲胎蛋白（αＦＰ）的测定。该方法是将ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化ＯＡＰ的酶催化反应与邻氨基酚的氧化中间产物（邻苯醌亚胺）在滴汞电极上的还原反应相偶合,在ＢＲ缓冲溶液中,在－０．８７Ｖ（ｖｓ,ＳＣＥ）左右产生灵敏的极谱波。根据测定标记在甲胎蛋白抗体上的ＨＲＰ的量,求得发生免疫反应的αＦＰ的含量。这该方法对甲胎蛋白测定的线性范围为１．２５－４００ｍｇ／Ｌ。用所建立的方法对病人的血清样品进行了测定,并与酶联免疫吸附测定光度法（ＥＬＩＳＡ）进行对照,二者相关性很好。     

TiO2对流感病毒(H1N1)灭活作用的研究

利用滴度测定和透射电镜观察研究了365 nm的紫外光照射下TiO2对流感病毒(H1N1)的灭活性能, 并结合催化剂样品的XRD分析、 N2气吸附性能测定及其在实验条件下的表面Zeta电势的测量结果, 探讨了催化剂用量、 焙烧温度、 比表面积以及表面电性与灭活性能的关系. 研究结果表明, 400 ℃时焙烧的TiO2对H1N1的灭活性最好; TiO2的表面电性对灭活性有显著影响; TiO2对H1N1的光催化灭活作用首先发生在H1N1的纤突部分, 纤突部分的破坏导致H1N1的失活, 分解直至矿化.      

联苯胺—H2O2—HRP偶合反应伏安酶联免疫分析新体系测定HRP的研究

提出了联苯胺－Ｈ２Ｏ３－ＨＲＰ偶合反应伏安酶联免疫分析新体系测定ＨＲＰ的方法。通过测定ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化联苯胺的产物间接测定ＨＲＰ的浓度。     

纳米In_2O_3催化发光传感器快速检测三氯乙烯

本文以纳米In_2O_3为传感元件,设计构建了快速检测三氯乙烯的催化发光传感器。该传感器对三氯乙烯具有灵敏度高、特异性好及响应快速等优点。在检测波长为440nm,工作温度为250℃条件下,催化发光信号强度与三氯乙烯浓度呈良好的线性关系,其线性范围为20~1 200mg/m~3(r=0.9984),检出限(S/N=3)为8.0mg/m~3。苯、甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯、氨水、甲醇、乙醇、甲醛、乙醛、四氯化碳、甲酸、乙酸、乙酸乙酯、正己烷及环己烷经过此传感器时,只有乙醇产生弱的发光信号,其它物质不产生响应信号。在72h内24次测定100mg/m~3的三氯乙烯,所得相对标准偏差小于5.0%,表明传感器稳定性好,使用寿命长。将此传感器用于三氯乙烯的分析,加标回收率为93.2%~103%。     

明胶固定辣根过氧化物酶制备H_2O_2传感器

用明胶将辣根过氧化物酶(HRP)固定于多壁碳纳米管(MWNT)和茜素红(AR)修饰的玻碳(GC)电极上,制成HRP生物传感器(HRP/AR/MWNT/GC),然后在3%戊二醛(GA)中进行交联改性,以克服明胶膜易溶胀的缺点,并提高膜的稳定性.同时详细探讨了该传感器对H2O2的响应性能,并优化了实验条件.结果表明,该传感器对H2O2的线性响应范围为5.0×10-6～1.0×10-3mol/L,线性相关系数为0.9932,检出限为1.0×10-7mol/L,且放于4℃环境30d后,峰电流值约为原来的72.1%.该传感器响应快速,灵敏度高,且具有良好的重现性、稳定性及较长的使用寿命,具有潜在的应用价值.     

单管高灵敏度等温扩增技术快速检测甲型H1N1流感病毒

建立了单管逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)快速检测甲型H1N1流感病毒的方法.针对甲型H1N1流感病毒的M基因和HA基因的保守区,设计了两组特异性引物,分别用于筛选甲型流感病毒及鉴定甲型H1N1流感病毒.对反应体系中的关键因素进行优化,反应结果可直接通过浊度或者SYBR Green Ⅰ荧光进行判定.本方法最低可...     

简易超灵敏快速检测H1N1甲型流感病毒方法的研究

基于适配体和滚环扩增(RCA)技术,建立了一种快速、简易、超灵敏检测H1N1甲型流感病毒(IAV)的方法。采用磁珠-SELEX技术筛选,经克隆、测序、合并重复序列,筛选出10条H1N1 IAV候选适配体。通过斑点杂交法、酶联免疫吸附分析法(ELISA)对适配体的结合力、特异性和亲和力进行表征,获得了2条特异性好、亲和力高的线状适配体Apt2和Apt6,并将其环化,制备了环状适配体CApt2和CApt6。以磁性纳米微球表面修饰Apt2捕获富集样品中的H1N1 IAV, H1N1 IAV再结合CApt6,以CApt6作为模板进行RCA扩增,利用纳米金可视化法显示检测结果,对H1N1 IAV的检出限低至100.0 copies/μL。本研究为研发简易、超灵敏、快速检测病毒的方法提供了一种新思路。     

基于酶联金纳米复合探针的磁分离免疫传感器检测莱克多巴胺

构建了一种基于新型酶联金纳米复合探针(E-GNPs)的磁分离竞争免疫传感器,用于检测莱克多巴胺(Ractopamine, RAC)。通过链霉亲和素与生物素的特异性相互作用,在抗体上标记辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP),采用静电组装法将抗体修饰于金纳米颗粒表面得到E-GNPs,引入卵清蛋白(Ovalbumin, OVA)-RAC半抗原(Hapten)复合物包被的磁珠进行竞争反应,通过显色反应实现目标物的定量分析。当目标分子RAC浓度变化时,酶催化底物显色随之改变,并且RAC的浓度与显色信号强度呈线性关系。紫外-可见吸收光谱表征结果表明,一个E-GNPs可携带11个HRP分子,使得该免疫传感器具有较高的灵敏度,检出限低至1.75 pg/mL,较传统酶联免疫方法灵敏度提高了10倍。交叉反应实验结果表明,此传感器对RAC的选择性良好,可应用于猪肉、牛肉和羊肉等实际样品中RAC的检测,加标回收率为88.3%～103.4%。本方法为动物源食品中RAC的快速筛查提供了一种新思路。     

增强化学发光体系酶联免疫分析法测定人绒毛膜促性腺激素

应用活化鲁米诺,用优化的增强化学发光酶联免疫分析体系测定人绒毛膜促性腺激素,检测限为0.2mIU/ml。线性范围0～200mIU/ml,与放射免分析测定结果比较,相关性良好。进而又发展了一种半定量的照相测定法,通过实际血清样品测定,效果良好。     

OAP-H~2O~2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清铁蛋白

首次提出邻氨基酚(OAP)-H~2O~2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系并用于人血清中铁蛋白的测定.本方法以线性扫描二阶导数伏安法栓测HRP催化H~2O~2氧化OAP的产物,用于游离HRP和各种HRP标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游HPR的线性范围为1.0x10^-^1^2-4.0x10^-^9g/mL,检测限达6.0x10^-^1^3g/mL.本法对铁蛋白测定的线性范围为0.2-320ng/mL,用所建立的方法对人血清样品进行了测定,并与现行的ELISA显色光度法进行对照,二者相关性很好.对此伏安酶联免疫分析新体系的电极还原过程也进行了详细的研究.     

OAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清甲胎蛋白

本文提出邻氨基酚 (OAP)-H2O2-辣根过氧化物酶（HRP）伏安酶联免疫分析体系并用于人血清中甲胎蛋白(αFP)的测定。该方法是将HRP催化H2O 2 氧化 OAP 的酶催化反应与邻氨基酚的氧化中间产物(邻苯醌亚胺)在滴汞电极上的还原反应相偶合, 在BR缓冲溶液中, 在-0.87 V (vs.SCE) 左右产生灵敏的极谱波。根据测定标记在甲胎蛋白抗体上的HRP的量, 求得发生免疫反应的αFP的含量。该方法对甲胎蛋白测定的线性范围为1.25～400 mg/L。用所建立的方法对病人血清样品进行了测定, 并与酶联免疫吸附测定光度法(ELISA)进行对照,二者相关性很好。     

伏安酶联免疫分析体系测定南方菜豆花叶病毒

本文提出用邻氨基酚 ( OAP) - H2 O2 -辣根过氧化物酶 ( HRP)伏安酶联免疫分析体系测定 HRP和南方菜豆花叶病毒 ( SBMV)。该方法是将 HRP催化 H2 O2 与 OAP的酶催化反应与邻氨基酚的氧化中间产物在滴汞电极上的还原反应相偶合 ,在 BR缓冲溶液中 ,在 - 0 .87V( vs.SCE)左右产生灵敏的伏安峰。利用该极谱波对 HRP的检测限为 5× 10 -12 g/m L,线性范围为 6.0× 10 -12～ 4 .0× 10 -9g/m L。用该方法测定南方菜豆花叶病毒取得了令人满意的结果。