产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的检测及耐药性分析

目的 :了解本院临床标本中分离出的大肠埃希菌产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的状况及其耐药性 ,从而为临床治疗提供依据。方法 :用美国临床实验室标准化委员会 (NCCLS)推荐的初筛和确证实验 ,对大肠埃希菌进行ESBLs的检测 ;并用纸片扩散法进行药敏试验。结果 :从 70株大肠埃希菌中检出ESBLs阳性 11株 ,占 15 .7% ;对亚胺培南、头孢吡肟、舒普深、头孢西丁、丁胺卡那的敏感率分别为 10 0 %、90 .9%、81.8%、72 .7%、72 .7%。结论 :本院大肠埃希菌产ESBLs情况尚好 ;临床治疗应在药敏试验的基础上选用亚胺培南、头孢吡肟、舒普深、头孢西丁、丁胺卡那等药物     

2009年附属医院产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药性监测

目的:了解大理学院附属医院2009年临床分离的产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的分布及耐药性.方法:按美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)标准进行ESBLs初筛、表型确证试验和病例回顾性分析.结果:临床各科室共分离肠杆菌科细菌286株,其中大肠埃希菌170株,产ESBLs大肠埃希菌有72株,检出率为42.4%(72/170),产ESBLs菌株对亚胺培南、美洛培南、头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为1.4%、4.2%、16.7%和16.7%.结论:临床分离大肠埃希菌中产ESBLs菌株耐药性明显高于非产ESBLs菌株,因此加强产ESBLs大肠埃希菌酎药性监测很重要,有助于指导临床医生合理使用抗生素,防止产ESBLs菌株的广泛流行.     

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及耐药性分析

按美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)2005年制定的标准方法,筛选产超广普β-内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBLs)的大肠埃希菌(Escherichia coli)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia),并采用微量肉汤稀释法,对宁夏地区以上2种细菌产ESBLs的耐药情况进行了检测.发现63株大肠埃希菌和41株肺炎克雷伯菌中,45株为产ESBLs菌,总阳性率为43.27%,其中,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌阳性率分别为53.97%(34株)和26.83%(11株).45株产ESBLs菌对美罗培南的敏感率为100%.对头孢他啶的敏感率为76.47%,而对其他抗菌药物敏感率较低.实验证明,宁夏地区产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性严重,应限制广谱β-内酰胺类抗生素,特别是第3代头孢菌素的使用.从目前耐药性监测来看,美罗培南可作为治疗产ESBLs菌严重感染的有效药物.     

宁夏牛源克雷伯菌和大肠埃希菌分离株产超广谱β-内酰胺酶基因型检测

为了解宁夏牛源产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumonia）和大肠埃希菌（Esche-richia coli）的耐药性和基因型分布,采用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）2008年推荐的双纸片确证试验,对宁夏地区100株克雷伯菌和大肠埃希菌进行产ESBLs确定,并采用PCR扩增法和克隆测序法对产ESBLs菌株进行基因分型.结果显示,宁夏地区有42株产ESBLs菌株,阳性率为42%;其中31株菌扩增呈阳性,产TEM型菌17株,产SHV型菌14株,产CTX型菌15株;同时产3种基因型菌1株,同时产2种基因型菌13株,产单一基因型菌17株,分别占产ESBLs菌株的2.38%,30.95%,40.48%;多表现为多重耐药.     

大肠埃希菌ESBLs检测及其耐药性分析

目的探讨本地区大肠埃希菌分离株中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的阳性率及产酶株对β-内酰胺类抗生素的耐药性。方法采用双纸片协同法检测菌株的ESBLs,并用Kirby-Bauer法检测了415株产ESBLs的大肠埃希菌对16种β-内酰胺类抗生素的耐药性,并对其标本来源和病区分布进行了分析。结果ESBLs总检出率为50．8％,其中ESBLs检出率较高的科室为普外科、脑外科、肾内科、骨科、呼吸内科。所有大肠埃希菌分离株均对Imipenem和Meropenem敏感。产ESBLs株对其他14种β-内酰胺类抗生素的耐药性均高于非产酶株。结论本地区ESBLs检出率较高,分布科室有特殊性,产ESBLs株对抗生素的耐药性高于非产酶株。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的临床感染分布及耐药性分析

目的-探讨医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的临床感染分布及耐药情况,为临床抗感染治疗合理选择抗生素、减少耐药发生提供依据。方法：收集2010年8月-2011年12月从临床送检标本中分离的大肠埃希菌264株,药敏试验采用K～B纸片扩散法。根据美国临床检验室标准化委员会（CLSI）推荐的纸片扩散法,严格按照其制定的标准进行ESBLs确证实验。采用wHONET5．4软件进行统计学分析。结果：264株大肠埃希菌中检出134株（50．8％）产ESBLs大肠埃希菌,标本分布以痰标本最高（47．76％）,而科室分布以普外科最高（12．61％）。在药敏实验中,产ESBLs菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星、哌拉西林／他唑巴坦、呋喃妥因、头孢西丁的耐药性较低（0％。15．5％）：环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、复方新诺明,阿莫西林／克拉维酸的耐药性较高（41.3％～82．8％）;青霉素类、头孢菌素类及ATM耐药性高（100％）,临床不宜选用。结论：产ESBLs大肠埃希菌存在多重耐药性,临床实验室应加强产ESBLs菌株的监测,根据,临床药敏结果合理选用抗生素。     

4种检测超广谱β-内酰胺酶方法的比较

以头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松和氨曲南为指示底物,用双纸片协同实验、纸片表型确证实验、三维实验和E-test法4种方法检测45株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性和59株产ESBLs阴性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌.结果发现,4种方法的敏感性依次为95.56%,97.78%,93.33%,97.78%,特异性依次为96.61%,100.00%,98.31%,100.00%;头孢噻肟为宁夏地区用于检测ESBLs的最适指示底物;纸片表型确证实验和E-test法是4种检测方法中用于检测产ESBLs较可靠的方法,用三维实验检测产ESBLs菌株适合标本量较少的小型医院,双纸片协同实验和纸片表型确证实验在所有医院都适用.     

大肠埃希菌ELISA检测条件的优化

目的对ELISA检测大肠埃希菌方法条件进行优化研究.方法以大肠埃希菌为对象,通过Box-Behnken设计星点响应面实验进行优化实验.结果优化后ELISA检测条件:抗原包被浓度为6.25μg/m L,抗原包被最佳时间为7 h,抗体稀释度最佳为1∶625 0,大肠埃希菌ELISA检测OD值为2.12.结论经实验得证,通过星点响应面实验方法进行大肠埃希菌ELISA检测条件优化,结果合理有效,优化效果良好.     

儿童大肠埃希菌产ESBLs检测及耐药分析

目的分析吉林地区儿童产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药特点,以指导临床用药.方法用双纸片协同试验检测115株大肠埃希菌产ESBLs的情况,并用K-B纸片扩散法对其耐药性进行了检测.结果产ESBLs大肠埃希菌为36株,阳性率为31.3%;产ESBLs大肠埃希菌对多种抗生素的耐药率高于非产ESBLs大肠埃希菌;所有大肠埃希菌均对亚胺培南敏感.结论吉林地区儿童产ESBLs的大肠埃希菌检出率高并呈多重耐药性.临床治疗中应严格掌握抗菌药物应用指征,并动态监测其耐药性变迁,防止ESBLs大肠埃希菌的局部流行.     

MUG单管定量检测法对大肠埃希氏菌的检测

采用MUG单管定量检测法对实验室制备的菌悬液、天然海水、水产品进行定量检测,并与大肠埃希氏菌多管发酵法的检测结果进行比对分析.结果表明：MUG单管定量检测法与大肠埃希氏菌多管发酵法对菌悬液、天然海水、水产品的检测结果没有统计学差异;MUG单管定量检测法检测数据的精确性高于大肠埃希氏菌多管发酵法,而且更为快速、经济.因此,该法适用于海水和水产品中大肠埃希氏菌的定量检测.     

猪源产ESBLs大肠杆菌三种耐药基因检测及分析

了解福建省闽西地区猪源产ESBLs大肠杆菌耐药现状。从龙岩市10个规模猪场分离的大肠杆菌中,按CLSI推荐的纸片扩散法筛选产ESBLs菌,对其分别用CTX-M、TEM和SHV等3种引物进行PCR扩增及测序分析。结果表明,105株大肠杆菌的产ESBLs检出率为28.6%(30/105);其ESBLs基因亚型以CTX-M型和TEM型为主,检出率分别为56.7%(17/30)和36.7%(11/30),SHV型检出率13.3%(4/30)较低;5株菌同时携带CTX-M和TEM基因,2株菌同时携带CTX-M和SHV基因;测序结果表明,共检测出3种基因型:CTX-M-15、TEM-2和SHV-12。     

小鼠睾丸特异表达新基因(mtLR1)在大肠杆菌中的表达

根据已经克隆的mtLR1基因序列,采用RT-PCR的方法获得mtLR1基因。将所得的PCR产物插入原核表达载体pMAL-P-2x中,得重组质粒(pMAL-P-2x/mtLR1)并转化大肠杆菌(E．coli)DH5α．经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,重组蛋白得到了正确表达,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的52％,分子质量约为73 kDa。mtLR1蛋白的高效表达,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础。     

大肠杆菌热敏肠毒素的检测及纯化

采用平板免疫溶血试验、兔回肠结扎试验,探讨了大肠杆菌耐热肠毒素制备的方法和检测方法。试验表明：平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素．并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;试验将细菌接种到产毒素培养基上培养．进行增菌,然后离心取上清液,沉淀溶于PBS液中用多黏菌素B浸出,均用80％饱和度的（NH4）2SO4盐析,之后用SephadexG-100凝胶层析分离纯化,最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测热敏肠毒素的纯度。     

大肠杆菌甜菜碱醛脱氢酶基因的测序及对烟草的转化

对利用聚合酶链式反应所克隆的大肠杆菌ｂｅｔＢ基因进行了序列测定,结果证实获得了该基因的克隆ｐＸＹ０１,ｐＸＹ０５以及亚克隆ｐＸＹ１１。将该基因置于ＣａＭＶ３５Ｓ启动子调控下,导入根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４中,叶盘法转化烟草,在含卡那霉素的选择培养基上筛选抗性芽,并进一步诱导小植株的再生。利用ＰＣＲ技术检测基因整合到烟草基因组中。     

LHRH-PE40工程菌发酵条件的初步研究

利用摇瓶在温度、pH范围、诱导剂量及诱导时间等不同因素变化时，进行了重组毒素LHRH-PE40工程菌发酵条件的初步探索.结果表明，工程菌优化的发酵条件为：pH范围7．3～7．5，诱导温度为34℃．诱导时菌密度A600=0．8，诱导时间为4～4．5h，诱导剂(IPTG)浓度为0.5mmol/L。     

B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

聚合酶链式反应(PCR)扩增获得了编码BLys(134—285AA)的cDNA片段,该片段以限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切插入pET32a载体。测序表明除(ATA^263→ATG^263)突变并导致了氨基酸(1263M)突变外,其余序列与Genbank报道的序列一致。蛋白表达用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS—PAGE表明：在33ku处有明显的融合蛋白表达,其表达水平高达总茵体蛋白的50％。点印迹证实融合蛋白能与anti—His6Tag抗体反应。生物学活性研究表明BLys协同丝裂霉素能明显地抑制HeLa细胞的生长。     

稀土药物对大肠杆菌作用的初步研究

目的探讨新的有效抗菌药物及其研究策略和新的抗菌活性筛选试验方法。方法用TAM air微量热仪测定了新合成的二种稀土药物[La（Hsal）2·（tch）]·2H2O和La（Hsal）2·（hq）在37℃时对大肠杆菌作用的产热曲线。结果实验表明药物[La（Hsal）：·（tch）]·2H2O在低浓度下对大肠杆菌有刺激作用,高浓度下为抑制作用,说明药物[La（Hsal）2·（tch）]·2H2O对微生物的生长具有双向生物效应。结论药物La（Hsal）2·（hq）的抑制效果优于[La（Hsal）2·（tch）]·2H2O。     

正交试验优化基因工程菌(E.Coli/p WSY)产黑色素培养基的组成

用正交试验优化了基因工程菌（Ｅ．ｃｏｌｉ／ｐ ＷＳＹ）产黑色素培养基的组成。配方为：蛋白胨１％、葡萄糖０．２％、硫酸铵０．５％、磷酸氢二钾０．７％、磷酸二氢钾０．３％、氯化钠０．５％，硫酸镁０．０１％，为实现微生物发酵法大规模生产黑色素提供了重要数据。     

大肠杆菌编码序列碱基片段的统计分析

对大肠杆菌基因１２３１个编码开始区和１３０７个编码终止区域内的６三基片段,４碱基片段和３碱基处段进行了统计,发现６碱基片段模式数的对民其相对频率成线性下降关系,绝大多数４碱基和３碱基片段出现在相对频率于２的范围之内;编码区出现最多的碱基片段是多聚Ａ;