子午岭野菊花挥发油的化学成分及抑菌活性

利用GC—MS联用法对野菊花挥发油的化学成分进行了分析研究．在最佳分析条件下．共分离出39个化学成分．鉴定出了其中的38个．主要成分为：萜类、酚类、有机酸及其酯等化合物．对挥发油的抗菌活性进行了初步研究．为今后对野菊花药理活性的研究提供了重要的理论依据．     

Saxiptlilin蛋白分离纯化及其活性测定

Saxiphilin是一种能与麻痹性贝类毒素(PSPs)特异性结合的可溶性血清蛋白,利用超滤离心及凝胶层析从牛蛙血浆中分离纯化Saxiphilin活性蛋白使其达到一定纯度,通过酶联免疫检测技术对其活性进行研究.结果表明:分离纯化目标蛋白时,采用pH值为6.5的Tris-HCl缓冲液,使用超滤离心、凝胶层析时目标蛋白的纯化倍数分别为5.9和11.2,回收率为67.8%和50%.通过SDS-聚丙酰胺凝胶电泳验证其分子量为90kDa,并通过毒素粗蛋白的结合曲线可得粗蛋白与PSP浓度比达到46.86时,目标蛋白结合PSP毒素的量达到饱和.将Saxiphilin蛋白应用于微量滴定板来检测PSPs,具有快速、简便、灵敏、特异、经济等优点.     

Saxiphilin蛋白分离纯化及其活性测定

Saxiphilin是一种能与麻痹性贝类毒素（PSPs）特异性结合的可溶性血清蛋白,利用超滤离心及凝胶层析从牛蛙血浆中分离纯化Saxiphilin活性蛋白使其达到一定纯度,通过酶联免疫检测技术对其活性进行研究.结果表明：分离纯化目标蛋白时,采用pH值为6.5的Tris-HCl缓冲液,使用超滤离心、凝胶层析时目标蛋白的纯化倍数分别为5.9和11.2,回收率为67.8%和50%.通过SDS-聚丙酰胺凝胶电泳验证其分子量为90 kDa,并通过毒素粗蛋白的结合曲线可得粗蛋白与PSP浓度比达到46.86时,目标蛋白结合PSP毒素的量达到饱和.将Saxiphilin蛋白应用于微量滴定板来检测PSPs,具有快速、简便、灵敏、特异、经济等优点.     

昆虫细胞凋亡蛋白酶caspase-1的表达纯化及活性分析

依赖于天冬氨酸的半胱氨酸蛋白酶(caspase)在细胞凋亡途径中起着不可替代的关键酶作用.本研究采用原核表达载体pET32a表达和纯化了家蚕细胞Bm-caspase-1及粉纹夜蛾细胞Tni-caspase-1蛋白酶,序列分析表明二者具有相同的内部剪切识别序列,且酶活性位点均为QACQ↓G.纯化获得大量可溶性蛋白酶,Western-blotting分析表明Bm-caspase-1在大肠杆菌中已自我剪切活化,而Tni-caspase-1没有自我剪切,无酶活性;活性Bm-caspase-1蛋白酶对caspase-3特异性底物Ac-DEVD-AMC的降解酶活性可被Z-VAD-FMK呈剂量依赖性抑制,半抑制浓度约20nmol/L.此外,活性Bm-caspase-1蛋白酶能够转活化无活性的Tni-caspase-1蛋白酶原.结果揭示了昆虫细胞caspase同样具有与哺乳动物细胞caspase相似的底物降解活性并可相互剪切激活,为进一步研究昆虫细胞凋亡的分子途径奠定了基础.     

壳聚糖-百里香酚复合物的抑菌活性研究

测定了壳聚糖—百里香酚复合物及其单体对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、棒状杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌的最低抑菌浓度，并研究了配比浓度、PH值、乳化剂对复合物抑菌活性的影响．结果表明．0．5g/L壳聚糖—0．125g/L百里香酚复合物对6种菌都有明显的抑制作用，比单体的抑菌范围变宽了、并且抑菌时间比单体有不同程度的延长，说明壳聚糖和百里香酚复合后明显地提高抑菌活性．0．5g／L壳聚糖与0．125g/L或0．25g/L百里香酚的复合物对6种菌均有较长的抑菌时间；壳聚糖—百里香酚复合物一般在弱酸性范围才具有抑菌效果；以吐温—80作乳化剂所得百里香酚液及复合物的抑菌效果较司班—20好．     

沼泽绿牛蛙皮肤抗菌肽的分离纯化与活性检测

以沼泽绿牛蛙皮肤分泌液为样品,采用C18反相柱液相色谱,使用线性梯度洗脱方法,参照获得的RP-HPLC图谱,对图谱结果分析,按每峰一管收集洗脱液,得到分离纯化的活性多肽.用纸片法测定每管的抗菌活性,对抗菌活性最强的洗脱液进行氨基酸序列测定,查询数据库并进行序列比对,发现与牛蛙抗菌肽RANATUERIN2 、RANATUERIN3有序列相似性,推断其可能是沼泽绿牛蛙皮肤分泌液中的抗菌肽.     

樟树籽油甘油二酯的分离及抑菌活性

为了研究樟树籽油甘油二酯（DAG）的抑菌活性,以樟树籽油为原料,通过柱层析分离得到纯度为92.4%的DAG,采用滤纸片法、最小抑菌浓度（MIC）测定法、抑菌活力实验对4种细菌进行抑菌效果分析;通过菌液电导率、可溶性蛋白质与菌体核酸含量的测定和扫描电镜观察细菌表面形态变化,探究其抑菌机理。结果表明:DAG对G⁺细菌和G^-细菌均有较好的抑制效果,抑菌活力均在0.60以上,抑菌时效3⁴8h。对G⁺细菌和G^-细菌的MIC分别是2.0和4.0mg·mL^-1。加入DAG的菌液电导率升高、菌液可溶性蛋白质和菌体核酸增多,细菌表面形态发生改变,说明对细菌的抑制作用主要是通过破坏细菌细胞膜,从而使其内含物泄漏,菌体形态发生改变,抑制细菌生长。 更多还原     

纳豆激酶原核表达纯化及多克隆抗体的制备

纳豆激酶是一种源于日本传统食品纳豆且具有强烈溶栓作用的丝氨酸蛋白酶．本研究将编码信号肽、前导肽和成熟肽在内的纳豆激酶基因克隆到原核表达载体pET28a^＋中,获得重组表达质粒pETNK．将此重组表达载体质粒转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达．SDS-PAGE结果显示纳豆激酶在大肠杆菌中成功表达,表达的纳豆激酶融合蛋白分子量大约为31kD．亲和层析法纯化表达产物,并以此纯化产物作为免疫原免疫新西兰大白兔,制备兔抗纳豆激酶血清,用ELISA和Western blotting对制备的兔抗血清中的多克隆抗体进行了鉴定．纤维蛋白平板实验显示,表达的纳豆激酶融合蛋白具有较好的溶纤活性．     

悬铃木叶片暗棕色抑菌色素的分离纯化及特性的初步研究

以碱提取、酸沉淀和ｓｉｌｉｃａｇｅｌ、Ａｌ２Ｏ３及ｓｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱层析分离纯化等步骤，从悬铃木落叶中制备得到一种暗棕色化合物，经ＰＡＧＥ、ＰＬＣ及ＴＬＣ检测均为单一谱带或单一斑点；该有色化合物熔点２８２．５９～２８３．２９℃，λＫＯＨｍａｘ：２１５ｎｍ，Ｅ１％１ｃｍ：３４８．７，肩峰：２５６ｎｍ，ｐＩ：３．５，对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、巨大芽孢杆菌及枯草杆菌有较强的抑菌活性     

金莲花抑菌抗病毒活性成分的初步研究

用柱层析等色谱分离手段从金莲花中得到3个纯化合物,通过UV、IR、1H-NMR等现代波谱技术分别鉴定为原金莲酸、牡荆甙和荭草甙.对上述化合物和所提取的总黄酮样品进行抑菌、抗病毒活性研究.结果表明,总黄酮、牡荆甙和荭草甙对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有很好的抑制效果,并对副流感病毒有强的抑制作用.该项研究是由本实验室首次报道.     

斑节对虾触角腺的显微和超微结构

对斑节对虾触角腺的显微及超微形态结构进行了研完．其触角腺由体腔囊、迷路和原肾管3部分组成．体腔囊足细胞小，足突起短而细，胞质内小泡和颗粒不多；迷路细胞微绒毛短少而不整齐，含有大量小泡，基底及两侧质膜内陷较深，但基底部线粒体数量很少；原肾管细胞微绒毛较短少而杂乱，胞质内小泡和颗粒含量较少，基底及两侧质膜内陷很深．上述结果显示，斑节对虾触角腺各组成成分中，与其排泄和渗透压调节功能相关的结构较为发达．因此，谊虾是甲壳动物中调节能力较强的“渗透压调节者”．     

锈苞蒿挥发油的化学成分分析及其抗菌活性研究

采用滤纸片琼脂平板扩散法和微量肉汤稀释法检测了锈苞蒿挥发油对2种真菌和10种细菌(包括5种临床致病菌)的体外抑菌杀菌活性,结果显示,挥发油对大部分微生物均具有很好的抗菌作用,尤其对酵母菌、革兰氏阳性菌的抗菌活性更强,其最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为0.02～0.31 g/L,最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBc)为0.04～1.25 g/LI其次利用气相色谱-质谱法(GC-MS)技术分析了锈苞蒿挥发油的化学组成,确定了28种成分的化学结构与相对含量,约占挥发油总组分的81.41%,主要由单萜和倍半萜组成,其中Vulgarnoe B(26.58%)、1,8-桉叶素(19.89%)和樟脑(7.91%)是主要成分.     

人t-PA P区在大肠杆菌中表达及其活性研究

用PCR方法获得编码人组织型纤溶酶原激活物（tissure-typeplasminogenactivator,t-PA）C端P区肽段的DNA,并经测序证实,长810bp,含有全部的t-PA的丝氨酸蛋白酶编码序列.将这段序列克隆到表达载体pQE30中转化大肠杆菌JM109菌株,经SDS-PAGE检测转化菌株中表达出分子量约29×103的蛋白,用纤维平板法测定激活纤溶活性,结果表明表达的t-PA蛋白C端P区具有很强的激活纤溶蛋白酶原的活性.证实t-PA蛋白C端P区的酶结构区的功能是独立的,其生物活性不受其它区域影响．     

青木香挥发油的化学成分分析及抗菌活性

采用GC-MS技术利用3种不同极性的毛细管柱分析了青木香挥发油的化学组成，确定了26种成分的化学结构与相埘含量，结果表明其挥发油主要由单萜组成，其中莰烯（23．98％）、异甲酸龙脑脂（19．40％）、Selina-1，3，7（11）-trien-8-one（10．24％）和龙脑（6．82％）是主要成分．对3种真菌和13种细菌（包括7种临床致病菌）的药敏实验表明，挥发油埘大部分微牛物均具有很好的抗菌作用，尤其埘革兰氏阳性菌的抗菌活性更强，其最低抑菌浓度（MIC）为0．04～0．31g／L，最低杀菌浓度（MBC）为0．08～2．5g／L．     

mtPDI外源基因表达体系的构建及耐热性

二硫键异构酶(PDI)是1种重要的蛋白折叠酶,它催化蛋白二硫键的形成和错误配对二硫键的重排,并有抑制错误折叠蛋白聚集的分子伴侣活性。为了研究嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶(mtPDI)的功能,克隆了mtP-DI基因的ORF区,构建了融合基因原核表达载体pET-28a(+)-mtPDI。将质粒pET-28a     

草鱼IFI58基因的鉴定及其表达分析

草鱼IFI58全长cDNA为1764 bp,其中ORF为1440 bp,编码1个479 aa的蛋白。草鱼IFI58包含有10个TPR 34肽结构域,并与哺乳类IFIT相对应。其中,TPR7被中间插入序列分为TPR7A和B,TPR4也有5个氨基酸插入,TPR3只有B部分而缺少A部分。鱼类IFI基因与哺乳类的同源性不高,系统进化树也显示它     

人nov基因全长cDNA克隆、测序及其组织表达谱分析

采用特异性mRNA富集技术，从人早期胚胎中得到人nov基因(novH)的cDNA克隆，序列分析表明，该基因cDNA序列由2389个碱基对组成，包含一段长1071bp的开放阅读框(ORF)，3′端含有加尾信号AATAAA和ply(A)尾巴。Northern杂交显示，在Hela细胞和肾上腺组织中有表达的novHmRNA，大小约为2．5kb；多组织RNA点杂交分析结果进一步表明，novH基因在肾上腺和主动脉中的表达水平相对较高，在成人肾、肝、肺和小肠组织中亦有少量的表达。