时间分辨荧光免疫分析法间接测定雌二醇

以氯磺酰基噻吩甲酰三氟丙酮（CTTA）为铕（Eu)的螯合剂,羊抗鼠（SAM）的IgG为二抗,用SAM－IgG-CTTA-Eu作标记二抗,建立了以竞争抑制为基础的时间分辨荧光免疫分析测定离雌二醇（E2）的新方法。同均相方法相比灵敏度有很大提高,测定雌二醇（E2）的线性范围为2．5－200pg/mL,检测限为2.5pg/mL。这一方法可望用于E2的临床检测。     

时间分辨荧光侧流分析法检测水中17β-雌二醇

以偶联17β-雌二醇包被原（E2－BSA）的长余辉粒子（PLPs）为荧光供体,胶体金标记抗体为荧光受体,基于免疫识别和荧光共振能量转移原理,建立了E2的竞争型时间分辨荧光侧流分析方法。创新性地以余辉优良、微米级大尺寸的PLPs为荧光信号源,并利用其在硝酸纤维素膜上不迁移的特性将E2竞争物固定于检测区,巧妙解决了常规试纸对信号材料尺寸的纳米级别限制和小尺寸PLPs余辉短暂的矛盾;采用低功率紫外灯为激发光源,以智能手机实现时间分辨荧光（TRF）模式荧光采集,有效去除试纸荧光背景干扰进而提高信噪比。该时间分辨荧光侧流分析（TRF－LFA）法对E2的检出限为0.1 ng/mL,比胶体金侧流分析（CG－LFA）降低了2个数量级,且特异性良好,30 min可完成检测。将该方法应用于水中E2的检测,与HPLC－FLD法的结果一致。     

利用铕鳌和试剂建立超灵敏的胃蛋白酶原I时间分辨荧光免疫分析法

采用时间分辨荧光测量技术,以稀土离子为示踪材料,建立了PGI的时间分辨荧光免疫分析法(TR-FIA),该方法具有测量灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染和应用范围广等优点。研究用北京佳瑞生物技术公司提供的抗PGI单克隆抗体8003#和8016#,PEI参考标准。结果表明,方法的特异性PGII对PGI-TRFIA无交叉反应。精密度和回收率:本方法的批内和批间CV分别为1.9%和4.7%,精密度图显示可测范围为3.5~328 KU.L-1;回收率为102.65%。灵敏度和稳定性:以零剂量点发光值均值加2 s后的发光值在标准曲线上得到的相应值为0.2 KU.L-1。8条不同时间进行的PGI-TRFIA的效点均值ED20,ED50和ED80分别为(11.34±0.2)KU.L-1,(38.73±0.8)KU.L-1和(132.3±2.9)KU.L-1。     

呋喃它酮代谢物时间分辨荧光免疫分析法的建立与应用

建立了Eu3+标记的间接竞争时间分辨荧光免疫分析法( Indirect competitive time-resolved fluoroimmu-noassay , ic-TRFIA)用于鱼肉样品中呋喃它酮代谢物AMOZ的检测。通过单因素实验考察了包被抗原浓度、抗体稀释倍数、竞争反应时间等参数对方法灵敏度的影响。结果表明,ic-TRFIA的最佳反应条件为：包被抗原浓度为0.25μg/mL,抗体稀释5×104倍,最佳竞争时间为50 min。在优化的条件下,方法的检出限( LOD, IC10)为0.01 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为0.26 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.025~2.83 ng/mL,对鱼样中AMOZ回收率在78.0%~86.0%之间,各样品变异系数均小于15%,与HPLC-MS/MS对比检测结果显示相关性良好。本方法灵敏度高、特异性好,能够满足实际样品的检测需求。     

稀土螯合物探针及其在时间分辨荧光免疫分析中的应用

本文总结了近年来所用的稀土螯合物探针及其在时间分辨荧光免疫分析中的应用，着重介绍了稀土螯合物探针标记的原理和特点，评述了ＬＫＢ体系和ＣｙｂｅｒＦｌｕｏｒ体系的相对优缺点，展望了荧光免疫分析的发展趋势     

时间分辨荧光免疫分析方法检测烟草中菌核净残留

建立了简便、灵敏地检测烟草中菌核净残留的时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA),及配套的无净化的快速前处理技术。采用镧系元素螯合物Eu-N1标记亲和纯化后的羊抗兔IgG示踪抗体。采用间接竞争TRFIA法建立了菌核净标准抑制曲线,方法的检出限I10为2.0μg/L;抑制终浓度I50为32.00μg/L;检测线性范围为4～128μg/L。考察了丙酮提取后33%,10%和1%的烟草基质对菌核净-TRFIA分析方法的影响,表明在1%烟叶基质条件下,建立的菌核净的抑制曲线的线性范围与标准抑制曲线趋于平行,确定烟草样品的前处理稀释倍数为100倍,计算得到基质影响因子(Im)为17.1。对烟叶样品中添加1,7和24mg/L的菌核净标样,连续3d的添加回收实验表明,方法的回收率为73%～128%,相对标准标准偏差(RSD)在4.3%～13.2%之间;烟草中菌核净的实际最低检出限为1mg/L。本方法可望用于烟草中菌核净残留的快速筛选检测。     

时间分辨荧光技术与荧光寿命测量

介绍了时间分辨荧光技术与荧光寿命的测量方法、意义及应用。     

Capillary Electrophoresis Based Immunoassay for Monoclonal Antibody with Diode Laser Induced Fluorescence Detection

ABSTRACT

A capillary electrophoresis based immunoassay (CEIA) for monoclonal antibody using diode laser induced fluorescence (LIF) detection was described. A direct assay for monoclonal anti-BSA in mouse serum was used as a model. BSA was labeled with Cy5 and used as the immunoreagent. The 635 nm line of a diode laser was used as the excitation source for LIF detection. The calibration curve for anti-BSA in mouse serum had a linear dynamic range of 4-40 nM. The concentration limit of detection (LOD) was 1.2 nM. Incubation time and CE conditions such as buffer concentration, pH and separation voltage were optimized, and the performances of different lasers as excitation sources were also compared.     

荧光偏振免疫分析技术的研究进展

对荧光偏振免疫分析技术的研究进展作了详细的评述。介绍了荧光偏振免疫分析技术的基本原理和研究热点,评述了它在临床检验、环境与食品监测和农药残留量分析等领域中的应用,对荧光偏振免疫分析方法的优缺点作了总结,引文献45篇。     

Fluorescence Polarization Immunoassay of Kanamycin

Abstract

Kanamycin, an aminoglycoside antibiotic, is quantitated in human serum by a fluorescence polarization immunoassay employing a novel sulfonamido derivative of 2-naphthol-6-sulfonic acid.     

Fluorescence polarization immunoassay for salinomycin based on monoclonal antibodies

A fluorescence polarization immunoassay(FPIA) for the determination of salinomycin(SAL) was developed by using anti-SAL monoclonal antibodies(mAb).Fluorescein labeled SAL(tracer) was synthesized by the N-hydroxysuccinimide active ester method and purified using thin layer chromatography(TLC).The developed FPIA for SAL had a dynamic range from 0.60 to 2193 ng/mL with an IC50 value of 33.2 ng/mL and a detection limit(LOD) of 0.08 ng/mL.No significant cross-reactivities were observed with other drugs but 67.6%...     

三聚氰胺单试剂荧光偏振免疫分析法

用三聚氰胺半抗原(MEL)与异硫氰酸荧光素乙二胺(EDF)反应合成了荧光示踪物MEL-EDF, 示踪物与三聚氰胺抗体反应得到稳定的单试剂免疫复合物, 考察了其结合动力学和置换动力学过程, 建立了一种三聚氰胺单试剂荧光偏振免疫分析方法(SR-FPIA). 该方法的检出限(LOD)为3.2 ng/mL, 半抑制浓度(IC₅₀)为157.1 ng/mL, 检测范围(IC₂₀~IC₈₀)为12.2~1012.4 ng/mL, 能够满足国家标准和国际食品法典委员会(CAC)对于食品中三聚氰胺最高残留限量的检测要求. 整个检测过程在15 min内完成, 并且单试剂免疫复合物在4℃下至少可稳定保存30 d以上. 本研究对开发三聚氰胺新型免疫检测方法具有重要意义.     

芯片式流通池用于顺序注射可更新表面荧光免疫法测定人血清中的IgG

采用芯片式流通池作为非均相免疫反应和原位固相荧光检测的场所,用双岔光纤将芯片式流通池与荧光光度计耦联,以双抗夹心式非均相免疫反应的模式,研究建立了测定人血清中IgG的顺序注射可更新表面非均相免疫分析新方法.     

顺序注射可更新表面固相荧光免疫法测定人血清中免疫球蛋白G

建立了采用芯片式微型流通池的测定人血清中免疫球蛋白G(IgG)的顺序注射可更新表面非均相荧光免疫分析法。将羊抗人IgG抗体固定于包被有蛋白A的Sephamse CL4B凝胶微珠,然后制备成固相抗体。用标记FITC的抗人IgG抗体作为第二抗体。固相抗体、血清试样和荧光标记第二抗体由顺序注射系统注入芯片式微型流通池,并在其中进行免疫反应生成夹心式抗体．抗原荧光复合物。荧光分光光度计通过光纤与流通池耦合测定截留于流通池中的抗体一抗原复合物荧光强度。一次测定完成后,微珠即被排出流通池。流通池经缓冲液清洗后即可进行下一次测定。体系经优化后,检出限为0．1mg／L IgG,分析速率达到11次／h。3．9mg／L IgG的日内和日间精密度(RSD)分别为1．7％和5．2％;校正曲线的线性范围为0．3—7．0mg／L IgG。所建立的方法已成功地应用于人血清中IgG的测定。