生化诱导子对红法夫酵母生长和类胡萝卜素合成的影响

以贝壳状革耳菌(Panus conchatus)、杂色云芝(Coriolus Versicolor)制备真菌诱导子和硝酸铈、氯化镉制备化学诱导子,研究了其对红法夫酵母生长和类胡萝卜素合成的影响.结果表明:真菌诱导子对红法夫酵母菌体生长、总类胡萝卜素和虾青素合成有显著促进作用,对虾青素含量的影响并不显著,化学诱导子对生长略有抑制但能 促进类胡萝卜素尤其虾青素的大量合成.P.conchatus和C.Versicolor诱导子在添加量分别为30 mg/L和10 mg/L时生物量最高,分别比对照提高了69.81%和68.87%,P.conchatus、C.Versicolor、硝酸铈和氯化锅诱导子在添加量分别为30、10、0.16和0.12 mg/L时总类胡萝卜素产量最高,分别比对照提高了47.3%、26.2%和44.9%、52.3%.在最佳浓度(30 mg/L和10 mg/L)下P.conchatus和C.Versicolor诱导子使得虾青素产量分别比对照提高了67.9%和50.1%.对虾青素含量增加并不显著.在最佳浓度(0.16 mg/L和0.12 mg/L)下硝酸铈和氯化镉诱导子使得虾青素产量和含量分别比对照提高了73.8%、60.1%和77.4%、60.6%.     

高效液相色谱法检测红发夫酵母胞内虾青素

确定了红发夫酵母的破壁提取方法并采用高效液相色谱法定量地测定了红发夫酵母胞内虾青素的含量。试验得到的液相色谱条件为:色谱柱KromasilC18, 5μm, 250mm×4. 6mm;流动相为甲醇和乙腈,V甲醇∶V乙腈=9∶1;流速1. 4mL/min;检测波长478nm;柱温为室温。加标回收率为(98. 2~102. 8)00。     

维生素对红法夫酵母产虾青素的影响

采用单因素实验方法研究了不同维生素对红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)生长及虾青素积累的影响.结果表明:生物素、泛酸钙、肌醇、VB1可显著提高红法夫酵母的生物量、类胡萝卜素和虾青素的产量,其较适质量浓度分别为0.05,25.00,0.50,0.05 mg/L.VB12和核黄素对红法夫酵母的细胞生长有明显的促进作用,同时可略微提高虾青素产量,其较适质量浓度分别为0.50和0.005 mg/L;VB6、烟酸和叶酸虽然可促进细胞生长,但却明显抑制了虾青素的积累;而硫辛酸既抑制细胞生长也抑制其虾青素的积累.根据单因素实验结果,在培养基中按以上较适浓度添加生物素、泛酸钙、肌醇、VB1、VB12和核黄素,菌体生物量和虾青素质量浓度分别达到5.000 g/L和16.77 mg/L,较对照组分别提高了33.2%和108%.     

生物素对红发夫酵母生长和虾青素积累的影响

在摇瓶中研究生物素对红发夫酵母生长和虾青素积累的影响.结果表明生物素的添加能促进细胞生长,但对细胞内虾青素含量的提高不利.添加10μg/L生物素时,最大比生长速率达到0.110 h-1;添加6μg/L生物素时,达到最大细胞干重9.95g/L,比没有添加生物素时的7.53g/L提高32%.添加2μg/L生物素时,达到最高虾青素产量和产率,分别为3 825 μg/L和53μg/(L@h),比没有添加生物素时的2 944 μg/L和41μg/(L@h)提高30%.没有添加生物素时,达到最高细胞虾青素含量391μg/g.利用添加2μg/L生物素的方法可以提高虾青素产量,这种方法为提高虾青素产量提供了一种简单廉价的方法.     

红法夫酵母高产虾青素菌株的选育

红法夫酵母可以通过发酵糖类产生虾青素,虾青素是一种极具潜力的色素和抗氧化剂,在水产养殖、饲料、食品和医药工业中具有广阔的应用前景。通过紫外诱变的方法,对红法夫酵母进行高产茵株的选育,最终筛选到3株理想菌株Puv-7、Puv16和Puv-24,其产量相对原始菌株分别提高了34．7％、353％和46％。     

米根霉、法夫酵母双菌共发酵淀粉生产虾青素的初步研究

对米根霉、法夫酵母共发酵淀粉生产虾青素进行了研究．摇瓶试验结果表明，米根霉、法夫酵母共发酵淀粉生产虾青素适宜的培养基为淀粉50g／L、1gKH2PO4/L、1g CaCl2／L、1g酵母膏/L、0.5gMgSO4／L、5g（NH4）2SO4/L，控制培养基初始pH为8．0、发酵温度为22℃及同时接种米根霉和法夫酵母有利于虾青素的合成，5L罐试验结果表明虾青素合成滞后于糖的利用，且分成两个增长阶段，虾青素的最大产量达2．48mg／L．这些试验结果不仅证实了共培养米根霉和法夫酵母发酵淀粉生产虾青素的理论可行性，而且为进一步利用淀粉为原料生产虾青素提供了试验参考．     

类胡萝卜素产生菌SCLI营条件研究

研究了适合于红酵母ＳＣＬＩ生长的营养条件。结构表明：蔗糖是最好的碳源，其浓度为糖浓度为３５ｇ／Ｌ，适宜的氮源是硫酸铵。红酵母ＳＣＬＩ为生物素相对需要城以糖蜜为碳源时，培养基中即使不添加生物素或酵母膏其生长仍良好。摇瓶培养时，Ｃ／Ｎ为２．８时细胞产量较高，Ｃ／Ｎ为４．０时类胡萝卜素产量较高。     

产虾青素红发夫酵母Phaffia rhodozyma的反应器培养

利用经过优化的简单培养基在5L机械搅拌式生物反应器中对产虾青素红发夫酵母Phaffia rhodozyma进行高密度培养．培养过程分两个阶段：初始阶段以细胞生长为主,大量积累酵母细胞;当细胞浓度达到一定的水平后,在培养中后期流加尿素,促进细胞内虾青素合成,提高虾青素产量．最终得细胞干重为30．8g／L,虾青素产量为28．1mg／L（以单位体积发酵液中的虾青素质量计）,虾青素含量为923．2ug／g（以每克干细胞中的虾青素质量计）,原料对细胞的转化率为0．359．研究结果为用红发夫酵母大规模培养生产虾青素奠定了基础．     

红发夫酵母生产虾青素的氮源补加策略

随着人类对天然虾青素需求的不断扩大,红发夫酵母(Xanthophyllomyces dendrorhous)以其易于培养的优点被选为当前虾青素生产极具潜力的微生物.实验主要从氮源调控入手,阐明虾青素生产机制,以期获得更高的虾青素产量.在微生物生长过程中,氮源的调控对细胞的生长和产物的积累至关重要.考察了在红发夫酵母生长过程中添加氮源对细胞生长及虾青素合成的影响.实验结果表明:补加不同种类的氮源及浓度对菌体生物量以及虾青素的产量有着不同的影响,在合适的时间点补加适量的氮源能明显促进虾青素的积累.根据实验结果,研究确定了最适的补氮时间为24h,最适的补加氮源为谷氨酸,最适的补加质量浓度为0.368g/L,在此补加条件下,虾青素的最大产量和产率分别为3.445mg/L和1.144mg/g,较对照组分别提高了36%和41%,这说明在细胞生长过程中补氮有利于虾青素的积累.     

解脂耶氏酵母异源合成类胡萝卜素的研究进展

类胡萝卜素是一类具有红色或橙黄色的四萜类化合物,具有强抗氧化能力,被广泛地应用于食品、医药、饲料等行业,传统的生产方法是化学合成、植物提取。解脂耶氏酵母是一种安全的产油酵母,具有充足的类胡萝卜素积累前体和良好的胞内疏水性环境,是类胡萝卜素异源生物合成的理想宿主。近年来,国内外普遍采取合成生物学的策略,在解脂耶氏酵母中构建并优化类胡萝卜素的合成途径,实现其异源高水平合成。综述了近年来解脂耶氏酵母异源合成类胡萝卜素的研究进展,并对未来的研究进行了展望。     

法夫酵母人工诱变及突变株筛选的研究

用硫酸二乙酯对法夫酵母进行了诱变,并用薄层色谱法及高效液相色谱法对突变株进行了筛选鉴定,当诱变剂浓度为1％、诱变温度为20℃时,法夫酵母诱变处理的最适时间约为5min．根据视觉差异分离二苯胺平板上长出的法夫酵母菌落,用薄层色谱法初筛,并用液相色谱法鉴定出了虾青素高产菌株、虾青索低产菌株、类胡萝卜素组成缺陷菌株．     

Optimization of acidic extraction of astaxanthin from Phaffia rhodozyma

Optimization of a process for extracting astaxanthin from Phaffia rhodozyma by acidic method was investigated, regarding several extraction factors such as acids, organic solvents, temperature and time. Fractional factorial design, central composite design and response surface methodology were used to derive a statistically optimal model, which corresponded to the following optimal condition： concentration of lactic acid at 5.55 mol/L, ratio of ethanol to yeast dry weight at 20.25 ml/g, temperature for cell-disruption at 30 ℃, and extraction time for 3 min. Under this condition, astaxanthin and the total carotenoids could be extracted in amounts of 1294.7 μg/g and 1516.0 μg/g, respectively. This acidic method has advantages such as high extraction efficiency, low chemical toxicity and no special requirement of instruments. Therefore, it might be a more feasible and practical method for industrial practice.     

利用添加乙醇增加Phaffia rhodozyma虾青素产量

研究了摇瓶中乙醇对Phaffiarhodozyma细胞生长和虾青素积累的影响 .乙醇的添加增加了虾青素产量 ,但抑制了细胞生长 .在细胞生长的不同阶段添加乙醇均能增加虾青素产量 ,差别不显著 .为提高虾青素产量 ,最佳乙醇添加浓度为 3g·L- 1.添加 3g·L- 1乙醇时 ,得到 3475 μg·L- 1和 4 19μg·g- 1的虾青素产量和含量 ,分别比对照提高了 12 %和 11% .该研究提供了一种简单而廉价的增加虾青素产量的方法 .     

不同碳源及其浓度对红发夫酵母培养的影响

研究了不同碳源及浓度对红发夫酵母Phaffia rhodozyma生长及虾青春积累的影响。 结果表明碳源浓度在20－30g/L范围内对红发夫酵母生长及虾青素合成有利。在所研究的领域中，糖蜜有利于生长，而木糖有利于虾青春积累。采用木糖和糖蜜的混合碳源，虾青春产量达到1．9mg/L。     

2-脱氧葡萄糖对酵母虾青素积累及酶法提取的影响

2-脱氧葡萄糖是一种酵母细胞壁合成抑制剂,红发夫酵母培养中添加0．0005％—0．002％（w／v）的2-脱氧葡萄糖可使生物量基本保持不变,但能促进虾青素积累,在增加虾青素产量的同时缩短酶法提取的时间。当添加浓度为0．002％时,虾青素含量可提高到对照组的113．7％,若采用胞壁溶解酶对红发夫酵母破壁提取虾青素,作用12h提取率可达94．7％。同时,2-脱氧葡萄糖应在红发夫酵母培养的前36h添加。     

法夫酵母银染mRNA差异显示技术的建立

对影响银染DDRT-PCR方法的主要因素如RNA投入量、引物浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度以及二次扩增的退火温度进行优化.实验结果表明:适宜分析法夫酵母mRNA差异显示的银染DDRT-PCR的条件是总RNA投入量为0.4 μg、引物浓度为1.5 μmol/L、dNTPs浓度为0.25 mmol/L、MgCl2浓度为1.7 mmol/L、二次扩增的退火温度为40 ℃.