β—actin启动子控制的人尿激酶原基因在CHO细胞中…

本文将人尿激酶原ｃＤＮＡ基因插入到含β－肌动蛋白启动子的表达载体中，通过脂质体转化到中国仓鼠卵巢细胞内，经筛选得到稳定表达ｐｒｏ－ＵＫ基因的细胞株，用ＥＬＩＳＡ检测到细胞培养液中表达量为２－３ｍｇ／Ｌ。经过抗尿激酶的免疫亲和柱初步纯化细胞培养上清后得到表达产物。同时，在培养液中加入佛波酯ＰＭＡ后，发现它对目的基因的表达有促进作用。     

PMA对人肝癌细胞中Ha-ras基因启动子活性的影响及与PKC活性的相关性

为探讨佛波脂PMA的生物作用与癌基因ras表达及与PKC信号通路的相关性,用人肝癌细胞BEL-7402为模型,以荧光素酶为报告基因观察了PMA对Ha-ras启动子活性的影响.当用100μg/L PMA长期处理人肝癌细胞BEL-7402时,可明显抑制肿瘤细胞生长.通过RT-PCR和Western Blot分析发现,PMA处理后的BEL-7402细胞中Ha-ras mRNA和蛋白水平均明显下降.进一步观察了PMA对Ha-ras基因启动子活性的影响.通过构建含有Ha-ras启动子序列的、以荧光素酶为报告基因的pGL3-ras真核表达载体,利用脂质体瞬时转染技术将其转入BEL-7402细胞中,并通过荧光素酶活性的检测,发现PMA作用48和72h后的BEL-7402细胞中,Ha-ras启动子活性分别被抑制了55%和54%,同时PKC活性分别下降了76.7%和75.7%.并进一步观察到PKCα和βⅠ蛋白水平明显降低.实验结果表明,PMA长期处理的人肝癌细胞可通过抑制Ha-ras启动子的活性使Ha-ras基因表达被抑制,并且可能与PKC信号通路有关.     

大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因在小菜蛾细胞中的表达

用携带大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的杆状病毒转移载体．ｐＡｃ３６０－β－ｇａｌ与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－ＰＸ２－ＨＮＵ２,Ｐｘ）,利用Ｘ－ｇａｌ空斑检测分析,β－ｇａｌ基因成功地插入ＡｃＮＰＶ基因组中,得到重组病毒Ａｃ－β－ｇａｌ,重组病毒在Ｐｘ细胞中表达出受ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因启动子控制的具有生物活性的外源基因表达产物──β－ｇａｌ．     

β－半乳糖苷酶基因在HeLa细胞中瞬时表达的动态研究

本文研究了由ＳＶ４０早期启动子和增强子启动的β－半乳糖苷酶基因在ＨｅＬａ细胞瞬时表达的动态情况．外源β－半乳糖苷酶基因经磷酸钙方法导入受体细胞５０ｈ后其酶活性为６０ｍｉｌｌｉｕｎｉｔｓ，该酶活性维持一段时间后呈下降趋势，经转染２７０ｈ后，该酶活性降为０．此外本文结果还表明，携带有β－半乳糖苷酶基因的质粒对受体细胞ＨｅＬａ具有较高的转染效率．     

拟南芥HSP70基因启动子表达载体的构建及在烟草BY2细胞中的应用

探讨了拟南芥的HSP70基因在液体悬浮培养的烟草BY2细胞中的表达及应用.用PCR扩增的方法从拟南芥col生态型基因组中扩增获得HSP70基因启动子序列,将其连入p1300表达载体且以GFP为报告基因,将该表达载体采用农杆菌转基因转入液体悬浮培养的烟草BY2细胞中,观察转基因细胞中报告基因GFP的表达情况.结果显示:HSP70:GFP转基因液体悬浮培养的烟草BY2细胞中有GFP的表达.该表达载体可在液体悬浮培养的BY2细胞中正常表达,且可在较短时间内获得大量实验材料,对拟南芥的HSP70基因启动子的进一步研究提供理论依据和丰富的实验材料,且可明显缩短实验周期.