AtPCS1基因的原核表达及多抗血清的制备

利用RT-PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列,构建原核表达载体pET28a-AtPCS1并测序.将该载体转化大肠杆菌BL21,用0.75mmol/LIPTG诱导融合蛋白AtPCS1-His的表达,纯化该融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠,ELISA法测定抗血清的效价可达1:2000.抗血清与融合蛋白及拟南芥总蛋白的western-blot结果表明:制备的抗血清具有较高的活性和特异性.     

带有TAT-PTD跨膜转导域融合基因的原核表达及表达条件优化

为构建pGEX-TAT-GFP原核表达质粒并优化GST-TAT-GFP表达条件,将PCR扩增的基因TAT-GFP克隆至质粒pGEX-2T,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并优化表达条件,表达产物进行SDS-PAGE、Western blot及荧光学特性鉴定.结果表明:构建的质粒经PCR、酶切和DNA测序正确,含有重组质粒的宿主菌经过IPTG诱导表达分子量约为54.3 kD的融合蛋白GST-TAT-GFP,并经优化确定最佳的诱导表达条件.     

重组人普兰林肽原核表达载体的构建及表达

目的构建人普兰林肽基因原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中大量高效表达。方法将胰淀素25位的丙氨酸、28位的丝氨酸和29位的丝氨酸用脯氨酸代替,选用大肠杆菌偏爱的密码子对天然胰淀素碱基序列进行修饰,通过化学合成的方式合成了普兰林肽基因片段,经Kpn I、Hind III双酶切后插入p ET-39b(+)载体,构建p ET-39b+[Pramlintide]重组质粒,转化BL21(λDE3)菌株,筛选重组子,并经IPTG诱导重组蛋白表达。结果构建的普兰林肽基因插入载体位置正确,且序列测定结果与预期一致;在37℃条件下,经0.1 mmol/L IPTG诱导后3 h,重组蛋白表达量最高,且重组蛋白主要存在于胞质蛋白中。结论成功构建重组人普兰林肽原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌得以表达,为进一步工业化制备普兰林肽奠定了基础。     

风疹病毒E1抗原基因片段的拼接及原核表达

应用基因克隆技术,对风疹病毒E1抗原基因片段进行拼接及克隆表达．根据软件GOLDKEY预测E1抗原的主要抗原决定簇位点E1(243～286aa),再设计4条近60个碱基长引物,利用PCR仪延伸合成目的基因,酶切并构建重组表达载体,酶切与测序鉴定,再转化表达菌株BL21(pLYS),IPTG诱导表达,行SDS-PAGE检测到目的基因表达成功．结果实现了用基因克隆技术将含E1(243～286)片段的pETKDO载体向大肠杆菌的转化,IPTG诱导2h,获得的表达量高。     

致病性鸡大肠杆菌pilA和外膜蛋白C原核诱导表达条件的优化

分别从温度、接菌量、诱导时机、IPTG浓度、诱导时间等条件对2种重组菌株BL21/pET - 28a - pilA和BL21/pET - 28a - ompC进行优化.得到最佳诱导条件:BL21/pET - 28a - pilA菌株为40℃摇培,80μL的接菌量,160r/min摇培2h后加入终浓度为0.96mmol/L的IPTG,再诱导表达4h,得到最高特异蛋白表达量;BL21/pET - 28a - ompC菌株为37℃培养,80μL的接菌量,160r/min摇培2.5h后加入终浓度为0.64mmol/L的IPTG,再诱导表达6h,得到最高特异蛋白表达量.     

鳜IL-1β基因的克隆及原核表达

用RACE PCR获得了鳜白介素-1β(IL-1β)的全长cDNA.鳜IL-1β的cDNA全长为1298 nt(核苷酸),其5′非编码区包含UTR 93 nt;3′非编码区包含452 nt;其开放阅读框内包含753 nt,翻译成251个氨基酸.将鳜IL-1β克隆到原核表达载体pET-32a上,在大肠杆菌Rosettagami(DE3)内以包涵体形式得以高效表达.     

荔枝类黄酮糖基转移酶(UFGT)基因的克隆及其原核表达研究

类黄酮糖基转移酶(UFGT)可以把不稳定的花色素催化成花色素苷,是花色素苷合成过程中的最后一个酶.在一定范围内,类黄酮糖基转移酶活性与花色素苷的合成呈现正相关,抑制UFGT酶活性比抑制其他酶更能影响花色素苷的合成.很多研究结果表明,UFGT是花色素苷合成的关键酶基因.本研究根据在荔枝上已知的UFGT基因片段,采用3′R...     

草鱼生长激素基因的克隆及原核表达研究

应用RT-PCR技术从草鱼脑垂体总RNA中克隆草鱼生长激素cDNA(cGH)，全长669bp，含开放阅读框633bp，编码210个氨基酸，分子量为23．6kDa，等电点为6．28；与已报道的草鱼GH有12个碱基、3个氨基酸残基的差异，同源性为98％．将草鱼cDNA定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，构建了重组草鱼GH基因质粒pGEX-GcGH，经IPTG诱导，pGEX-GcGH在大肠杆菌中可表达49．6kDa的融合蛋白．     

鳜IL-1β基因的克隆及原核表达

用RACE PCR获得了鳜白介素-1β（IL-1β）的全长cDNA．鳜IL-1β的cDNA全长为1298nt（核苷酸），其5′ 非编码区包含UTR 93nt；3′非编码区包含452nt； 其开放阅读框内包含753nt，翻译成251个氨基酸．将鳜IL-1β克隆到原核表达载体pET32a上，在大肠杆菌Rosettagami（DE3）内以包涵体形式得以高效表达．     

抗艾滋病病毒蛋白CVNH在大肠杆菌中表达条件的优化

CVNH(Cyanovirin-N homology)蛋白家族是具有抗HIV活性的蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)的同源物。在前期研究中,已首次获得水蕨Ceratopteris thalictroides CVNH基因的全长序列,构建了pET32a-CtCVNH的原核表达载体。以此为基础,对CVNH在大肠杆菌Rosetta 2(DE3)中的表达条件进行优化。分别探讨了最佳培养基类型及成分、培养基初始pH、诱导时机、诱导剂浓度及诱导时间。优化后的诱导条件是:含24 g.L-1酵母提取物和72 g.L-1胰蛋白胨的TB培养基、培养基初始pH为8.0、菌液A600nm为0.6时加入1.6 g.L-1乳糖诱导6 h。CVNH蛋白的表达量较优化前提高了1.9倍。这为进一步开展CVNH的药物研制和开发奠定基础。     

我国番茄白粉病抗病育种研究现状

本文阐述了国内对番茄白粉病抗病性的研究现状,包括番茄白粉病化学防治方法及抗源鉴定方法,抗病遗传规律及抗病机理等,并对番茄白粉病抗病育种中存在的问题进行了讨论。     

粗山羊草Y189抗小麦白粉病基因SSR标记

从粗山羊草[Aegilops tauschii(Coss.)Schmal]Y189中鉴定出1个显性抗小麦白粉病基因,暂定名为PmAe Y2.应用分离群体分组法(BSA)筛选到Xgwm583-5D、Xgwm174-5D、Xgwm182-5D和Xgwm271-5D标记与该基因之间的遗传距离分别为25.7、16.7、9.1和7.0 cM.根据连锁标记所在小麦微卫星图谱的位置,PmAe Y2被定位在5DL染色体上.分析基因所在染色体的位置、抗病性特征认为PmAe Y2是一个新的抗白粉病基因,并可用于分子标记辅助选择.     

凉山州木本植物上的白粉菌调查

白粉菌是一类高等植物的重要专性寄生病原真菌,广泛分布于世界各地,能引致多种植物发生白粉病,并为害多种经济植物,引起严重损失。2008年9月—2019年5月对凉山州木本植物上的白粉菌进行了调查和研究,共鉴定出6属50余种,报道其中常见且危害严重的8种：冷水花白粉菌Erysiphe pileae (Jacz.) Bunk ex Braun;猪殃殃新白粉菌Neoerysiphe galii (S. Blumer)U. Braun;锡金白粉菌 Erysiphe sikkimensis Chona, J. N. Kapoor & H. S. Gill;毛茛耧斗菜白粉菌 Erysiphe aquilegiae var.ranunculi (Crev) (Grev.) R.Y. Zheng & G.Q. Chen;本间白粉菌Erysiphe hommae (U. Braun) U. Braun & S. Takam. 2000;刺槐白粉菌 Microsphaera robiniae Tai;草野钩丝壳 Uncinula kusanoi Syd. & P. Syd;三孢半内生钩丝壳 Pleochaeta shiraiana (Henn.)Kimbr. & Korf。     

4个小麦品种的抗白粉病遗传分析

抗病品种郑315、CP87-26-12和91138-16-2-13-12,与感病品种豫麦49号杂交的F1代表现抗病,F2代抗、感单株的分离比例为31,表明这3个品种均携带1对显性抗病基因.N97189-2和豫麦18号的杂交F1代对白粉病表现高感,F2代抗、感单株的分离比例为13,由此推断N97189-2对白粉病的抗性由1对隐性基因控制.     

核黄素诱导番茄幼苗抗白粉菌机理研究

研究了2mmol/L核黄素诱导感病番茄品种Moneymaker对白粉菌(Oidium neolycopersici)的抗性及相关生理反应:叶片H2O2积累、丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量、超氧阴离子(O2-)产生速率和苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性的变化.核黄素诱导后番茄MM对O.ne-olycopersici的抗性增强,诱发了过敏反应(hypersensitive response,HR),番茄叶片内MDA的含量、O2-产生速率、PAL,POD活性均高于核黄素未处理,其变化趋势与抗病番茄品种G1.1560与白粉菌组成的非亲和组合相似.结果表明,H2O2的积累、膜脂过氧化、O2-,PAL和POD在核黄素诱导感病番茄对白粉菌的抗性反应中发挥重要作用.     

新疆伊犁地区的白粉菌(I)

笔者于2011~2013年间,将采自新疆伊犁地区的101份白粉菌标本进行分类鉴定研究,报道了目前已明确分布于本地区的白粉菌50种,其中隶属于5簇7属。所有引证标本均保存于塔里木大学菌物标本馆(HMUT)。     

白粉菌效应蛋白研究进展

在病原菌与植物的相互作用过程中,病原菌分泌大量效应蛋白帮助其侵染植物,因此效应蛋白一直是植物病理学研究的热点课题.该文基于大量白粉菌效应蛋白的研究成果,就近年来白粉菌效应蛋白的生物信息学预测分析结果、功能效应蛋白鉴定及其作用机理和无毒效应蛋白研究进展等方面进行综述,同时对未来值得重点关注的研究方向进行探讨,以期为白粉菌致病性的研究提供理论参考.     

小麦抗白粉病性与酶活性的关系

测定了７个小麦抗，感白粉病品种抽穗期叶片苯丙氨酸解氨酶，多酚氧化酶，过氧化物酶的活性。结果表明，在抗病品种中，三种酶的活性均高于感病品种，酶的活性病情指数呈负相关。     

小麦白粉病对小麦CO2同化量的影响

本文用差动式CO_2红外分析仪在田间直接测量了小麦白粉病(Erysiphe graminisD.C.f.sp.tritici)对不同生育期小麦单叶CO_2同化量的影响,结果表明:当白粉病严重度较小时,小麦单叶的最大净光合速率随严重度的增加呈指数下降;严重度较大时,随严重度的增加,最大净光合速率变化很小。结果还表明:白粉病对小麦CO_2同化量影响最大的生育期是扬花期,对蜡熟期的影响最小,而且健株健叶与病株健叶的最大净光合速率经统计检验无显著差异。     

室内黄瓜白粉病防治方法研究

黄瓜白粉病菌属专性寄生菌,无法在培养基上培养,只能在活体上进行抑菌测试试验．主要从黄瓜栽培、病菌接种和防效计算3个方面叙述了目前室内防治黄瓜白粉病的主要方法．