白藜芦醇探针同步荧光法测定蛋白质含量

在Tris-HCl缓冲溶液体系中(pH=7.4),白藜芦醇与人血清白蛋白相互作用,对蛋白的内源性荧光产生猝灭作用,而且,同步荧光的强度与人血清白蛋白的浓度成正比。 基于此,建立了以白藜芦醇为荧光探针,运用固定波长同步荧光光谱法测定生物样品中蛋白质含量的新方法。 体系同步荧光光谱特征及强度受Δλ、反应介质和离子强度等因素的影响。 在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度(I)与人血清白蛋白在1.380~276.0 mg/L的浓度范围内呈良好的线性关系,检测限为1.037 mg/L(n=11)。 对血清、尿样和唾液等生物样品进行测定,回收率在93.5%~105.8%之间,与传统的考马斯亮蓝(G-250)法作对照,结果一致。     

基于金纳米簇的Co~(2+)离子检测比率荧光探针的研究

通过FITC与BSA的碳酰胺化反应将FITC连接到牛血清白蛋白稳定的金纳米簇(Au-BSA NCs)上,获得了一种新型的比率荧光探针Au-BSA-FITC.该荧光探针能够高效、灵敏的检测水溶液中的Co2+离子,检测限低至10nmol/L.此检测限比国家《生活饮用水卫生标准GB5749-2006》中允许的最高Co2+离子含量(1.0mg/L)低3个数量级.重要的是该荧光比率探针能够实现实际水样中Co2+离子的检测,且在细胞检测与成像等方面也具有潜在的应用价值.     

光谱法研究咖啡因与人血清白蛋白的结合作用

用荧光光谱、紫外吸收光谱和圆二色谱等光谱学方法研究在近似生理条件下咖啡因与人血清白蛋白(HSA)的结合作用.实验结果表明咖啡因与人血清白蛋白的结合主要是动态猝灭过程,并获得了不同温度下,咖啡因与人血清白蛋白的结合位点数,结合常数以及△H、△G和△S等热力学参数.根据所得结果可推断咖啡因与人血清白蛋白的作用力主要是氢键和范德华力,由FRET能量转移理论计算出咖啡因与人血清白蛋白间的结合距离.同时用同步荧光光谱、圆二色谱和三唯荧光光谱,考察了咖啡因对人血清白蛋白二级结构的影响.     

含芘手性探针分子与蛋白质作用机理的时间分辨荧光光谱研究

采用时间分辨荧光光谱等手段研究了手性探针分子L-[4-(1-芘基)]丁酰基苯丙氨酸(PLP)与溶菌酶(Lys)、牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)的结合过程及机理,探讨了三氯六氨合钴(CoHA)对不同复合体系内芘基的荧光猝灭作用.结果表明,PLP在与血清白蛋白的结合过程中是以芘基插入到血清白蛋白疏水空腔中的方式与蛋白质结合的;而PLP与Lys的结合部位处在其表面的疏水部分.     

荧光探针碘苷在血清白蛋白同步荧光测定中的应用研究

在最佳实验条件下,碘苷与血清白蛋白相互作用,导致血清白蛋白的内源荧光发生特异性变化,且体系的同步荧光强度和溶液中血清白蛋白的浓度呈线性关系.据此,建立了以碘苷为荧光探针,运用固定波长同步荧光光谱分析测定人血清白蛋白和牛血清白蛋白的新方法.体系的同步荧光强度与人血清白蛋白和牛血清白蛋白分别在1.38～579 mg/L和0.78～585 mg/L范围内呈良好的线性关系,检出限分别为0.612 mg/L和0.358 mg/L.对实际样品进行回收测定,回收率为97%～101%.     

探针5-硝基水杨酸同步荧光法测定生物样品中蛋白质

在模拟体液离子强度下,基于5-硝基水杨酸(5-NSA)与人血清白蛋白(HSA)相互作用生成复合物,导致血清白蛋白的内源荧光产生特异性变化,而建立了以5-NSA为分子探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定蛋白质的新方法. 体系同步荧光光谱特征及强度受Δλ、反应介质、反应温度等因素的影响. 结果表明,在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度(ISF)与人血清白蛋白在3.2×10-8～6.4×10-8 mol/L的质量浓度范围内呈良好的线性关系,检测限为1.7×10-8 mol/L(n=11). 对血清、尿样和唾液样品进行了测定,回收率在99.96%～100.04%之间.     

Spectroscopic investigation of interaction between bionanserin and human serum albumin

采用荧光光谱研究了模拟生理务件下抗精神病药布南色林与人血清白蛋白的相互作用,结果表明,布南色林对人血清白蛋白的内源性荧光具有猝灭作用且猝灭方式为静态猝灭.布南色林与人血清白蛋白形成了1∶1的复合物,结合常数K=1.80×104L/mol,且金属离子对结合反应具有较显著的影响.根据不同温度下的热力学函数确定了布南色林与人血清白蛋白的相互作用力类型以氢键和范德华力为主.同步荧光光谱和傅立叶变换红外光谱表明布南色林对人血清白蛋白二级结构的含量产生影响,α-螺旋和β-折叠的含量降低,β-转角和无卷曲规则的含量明显升高.     

磺胺嘧啶钠探针分析生物样品中蛋白质含量的研究

在pH 7.4的Tris-HCl缓冲溶液中,荧光猝灭光谱和三维荧光光谱显示磺胺嘧啶钠(SDS)可与人血清白蛋白(HSA)相互作用,使人血清白蛋白疏水微环境极性以及构象发生变化。考察了Δλ值、反应介质、离子强度等因素对该体系同步荧光光谱特征及强度的影响。在选定的最佳实验条件下,体系的同步荧光强度(ISF)与人血清白蛋白在1.38～276μg/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系,线性相关系数为0.9992,从而建立了以磺胺嘧啶钠为分子探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定蛋白质的新方法,检测限可达0.48μg/mL。用此方法对生物样品人血清、唾液和尿液中蛋白质含量进行了测定并进行加标回收实验,回收率在95.7%～103.7%之间。本文还用经典的考马斯亮蓝法对样品进行了测定,所得结果和本方法一致。同时还考察了一些常见的共存物质对蛋白质测定的影响。     

洛美沙星与人血清白蛋白的相互作用机理

利用荧光及紫外光谱法研究了水溶液中洛美沙星(LMX)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用机理. 结果表明洛美沙星对人血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用, 其猝灭类型主要为静态猝灭. 在不同温度下求得了洛美沙星与人血清白蛋白的结合常数K, 发现随反应温度上升K值下降. 由热力学参数确定了洛美沙星与人血清白蛋白的结合作用主要为色散力. 用同步荧光技术考察了洛美沙星对人血清白蛋白构象的影响, 又根据Fōrster理论, 测得了洛美沙星与人血清白蛋白之间的能量转移效率, 相互结合距离. 进一步证明了该反应是单一静态猝灭过程, 阐述了其猝灭机理是通过能量转移产生的.     

快速测定生物样品中蛋白含量的同步荧光法研究

最佳实验条件下,基于脱氧尿苷与人血清白蛋白(HSA)相互作用,导致血清白蛋白的同步荧光光谱发生特异性变化,且体系的同步荧光强度和溶液中白蛋白的浓度呈良好的线性关系,建立了以脱氧尿苷为探针,运用固定波长同步荧光光谱快速测定生物样品中蛋白质总含量的新方法.深入考察了△λ值、反应介质、试剂用量、离子强度、加入顺序、反应时间等因素对测定的影响.在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度与血清白蛋白在2.76～524.4μg/mL范围内的线性相关系数为0.9991,方法的检出限可达0.11μg/mL.运用本方法对人血清、唾液和尿液等生物样品进行测定并进行加标回收实验,回收率在98.0%～102.5%之间.对11份空白溶液进行平行测定,相对标准差为1.2%.用经典的考马斯亮蓝G-250(CBB)法做了对照实验,两种方法测定结果基本一致.还考察了一些常见离子和有机物存在时对蛋白质测定的影响.本方法已用于血清、唾液和尿样等生物样品中蛋白质总量的快速测定.     

铈配合物与人血清白蛋白相互作用的研究

在生理条件(pH=7.4)下,利用荧光光谱和紫外光谱探讨了华法灵铈与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。根据荧光和紫外光谱可知,华法灵铈配合物对人血清白蛋白荧光产生猝灭作用,其猝灭方式为静态猝灭。并通过Stern-Volmer方程等,计算出了配合物与人血清白蛋白的静态猝灭常数、结合常数和结合位点数。根据一系列热力学参数ΔH,ΔS,ΔG的相对大小,确定出配合物与人血清白蛋白的主要作用力类型为静电作用力。且用同步荧光法讨论了华法灵铈对HSA构象的影响。     

氰基乙基-5-氯尿嘧啶核苷探针测定蛋白质的同步荧光法研究

基于核苷类药物中间体氰基乙基-5-氯尿嘧啶(CECU)与血清白蛋白相互作用生成复合物,导致血清白蛋白的内源荧光产生特异性变化,而建立了以氰基乙基-5-氯尿嘧啶为荧光探针,用固定波长同步荧光光谱技术测定人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)的新方法。结果表明,在最佳实验条件下,体系的荧光强度与人血清白蛋白和牛血清白蛋白分别在2.76~497μg/mL和3.90~507μg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限分别为1.64和1.72μg/mL(n=11)。该方法灵敏度高、稳定时间长、选择性好、线性范围宽。方法已用于血清样品中蛋白质的快速测定。     

探针5-硝基水杨酸同步荧光法测定生物样品中蛋白质的应用研究

在模拟人体生理条件下,基于5-硝基水杨酸与人血清白蛋白(HSA)相互作用生成复合物,导致血清白蛋白的内源荧光产生特异性变化,而建立了以5-硝基水杨酸为分子探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定蛋白质的新方法。体系同步荧光光谱特征及强度受Δλ、反应介质、反应温度等因素的影响。对上述实验条件进行了优化,结果表明,在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度(ISF)与人血清白蛋白在2.21 ~ 469.2 mg/L 的浓度范围内呈良好的线性关系,检测限为0.81 mg/L(n=11)。本实验对血清、尿样和唾液样品进行了测定,回收率在98.4% ~ 102.6 %之间。     

以偶氮胂I极谱分析法测定蛋白质的研究

蛋白质含量的测定在生化分析、临床检测中有着重要的意义.常用于测定蛋白质的方法有分光光度法、电化学分析、荧光法和光散射技术等.本文选择了具有电活性的偶氮类物质偶氮胂Ⅰ,利用其在酸性条件下能够和蛋白质分子发生静电作用形成生物超分子复合物的原理,详细研究了结合反应的条件和电化学测定条件,建立了以偶氮胂Ⅰ为电化学探针测定人血清白蛋白的方法,并应用电化学方法求解了结合常数与结合比.     

光谱法及分子模拟研究芹菜素与人血清白蛋白的相互作用

利用紫外光谱、荧光光谱、红外光谱、圆二色光谱及分子模型等技术,在生理pH条件下,研究了芹菜素与人血清白蛋白的相互作用,计算了结合常数和热力学参数。分子模型研究表明,芹菜素与人血清白蛋白在亚结构域ⅡA结合,二者间的主要作用为疏水作用和静电作用,这与荧光光谱所得结果基本一致。红外光谱、圆二色光谱及同步荧光光谱均显示芹菜素与人血清白蛋白结合后没有改变人血清白蛋白的二级结构。     

固定波长同步荧光法测定生物样品中蛋白含量

不同代喹诺酮类药物分子与人血清白蛋白(HSA)相互结合,体系的同步荧光强度和溶液中HSA浓度呈良好的线性关系,其中氧氟沙星(OFLX)水溶性好,且对HSA的内源荧光有较强的猝灭作用,因而建立了以OFLX为分子探针,运用固定波长同步荧光法测定生物样品中蛋白质总含量的新方法.考察了△λ、介质、pH值、试剂用量和离子强度等因素对体系同步荧光的影响.在最佳实验条件下,体系同步荧光强度与HSA浓度在6.0×10-8～3.4×10-6 mol·L-1范围内的线性相关系数为0.9997.运用该方法对人血清、唾液和尿液等样品进行测定并进行加标回收实验,回收率在99.3％～103.5％之间.该方法具有简单、快速、准确度高、重现性好等优点,可直接用于血清、唾液和尿样等生物样品中蛋白质总量的快速测定.     

光谱法测定伊曲康唑与牛血清和人血清白蛋白相互作用

用荧光光谱和紫外吸收光谱法, 在pH=7.4±0.1的0.1 mol·L-1磷酸缓冲溶液中, 研究了伊曲康唑与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)的相互作用. 实验结果表明, 伊曲康唑与牛血清白蛋白和人血清白蛋白作用的猝灭常数均随着温度的升高而降低, 伊曲康唑可以有规律地使血清白蛋白内源荧光猝灭, 其猝灭机理可认为是伊曲康唑与白蛋白形成复合物的静态猝灭. 获得了在不同温度下, 伊曲康唑与血清白蛋白作用的结合常数以及△G、△H和△S等热力学参数. 根据所得结果可推断伊曲康唑与白蛋白的作用力主要为疏水作用力, 同时, 利用荧光共振能量转移理论(FRET)计算得出了伊曲康唑与白蛋白结合位置的距离d. 而且, 利用同步荧光光谱和紫外光谱揭示了该反应中蛋白的结构和其微环境的变化.     

水杨酸与人血清白蛋白的相互作用研究

采用荧光光谱法,紫外光谱法及圆二色谱法研究了具抗凝血作用的水杨酸与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.结果表明,水杨酸对人血清白蛋白荧光产生猝灭现象,猝灭方式为静态猝灭.通过同步荧光法和圆二色谱法发现水杨酸的存在明显改变人血清白蛋白的构象.     

苯胺蓝黑与人血清白蛋白的相互作用及对其构象的影响

利用荧光光谱和同步荧光光谱研究了不同温度下苯胺蓝黑与人血清白蛋白相互作用时的荧光猝灭及构象的变化情况。实验结果表明,苯胺蓝黑与人血清白蛋白之间可以发生相互作用,而且有较强的结合。同步荧光光谱研究了人血清白蛋白与苯胺蓝黑的相互作用中人血清白蛋白构象的变化,结果显示二者结合改变了蛋白质的微环境。热力学参数说明小分子与蛋白质的作用以疏水作用为主。     

罗丹明B硅纳米粒子探针及其在蛋白芯片检测中的应用

本工作将罗丹明B分子通过共价结合的方式成功地包裹在二氧化硅纳米粒子中,制备的纳米粒子荧光强度和罗丹明B分子相比提高了1000倍.对此硅纳米荧光粒子进一步进行了链亲和素修饰,成功制备了可特异性结合生物素修饰蛋白的纳米荧光检测探针.以反相蛋白质芯片检测为模式,研究了此探针对微量蛋白的检测性能.实验中将不同微量浓度的人IgG固定于醛基修饰玻璃片表面,并加入生物素标记的抗人IgG,结果显示在800fg～100pg含量的微量蛋白检测中此纳米荧光探针具有良好的线性关系,最小蛋白检测量可达100fg.与商品化亲和素偶联cy3荧光探针对比分析发现,本方法制备的荧光探针对蛋白的检测灵敏度可提高8倍,且具有成本低,生物修饰简单等优点.