用于人血浆中蛋白质分离的在线阵列式二维常规柱液相色谱系统的建立

构建了一种在线阵列式二维常规柱液相色谱系统,并将其应用于分离血浆中的完整蛋白质。该系统以1根强阴离子交换柱作为第一维分离柱,8根阵列式反相色谱柱作为第二维分离柱。强阴离子交换柱分离的馏分通过十通阀被依次转移到第二维预柱上并得到保留富集,随后第二维流动相通过分流器同时将预柱上的蛋白质反冲至分析柱上进行分离。二维之间以及第二维阵列色谱柱之间均相互独立,从而可以提高系统分离的通量和总峰容量。采用该系统对血浆中的蛋白质进行了完整蛋白质水平上的分离。该系统具有高通量和高分辨率的特点,为血浆样品中高丰度蛋白质的去除以及血浆样品的深入研究提供了一种有效的手段。     

一种规模化蛋白质组分离和鉴定新方法研究及其应用

建立了一种规模化的蛋白质组分离和鉴定新方法。通过对在生命发育过程中具有重要研究价值的人胎肝线粒体蛋白质组的分离分析，表明与毛细管液-质联用的不同分离方法的组合可以增大检测动态范围和分辨率。研究共鉴定了2977个肽段，归属于915种蛋白质。去除批次间冗余后，鉴定的蛋白质为477种，其中291种为唯一蛋白质，186种为蛋白质簇，144种蛋白质明确定位于人胎肝线粒体中。所鉴定蛋白质的分子量分布范围为7000Da～330000 Da，pI值分布在4．0～11．89，克服了两维凝胶电泳在分子量和pH方面的歧视性问题。实验中发现的蛋白质簇以及确定一种蛋白质需要最少肽段数的问题还需要进一步研究。     

毛细管整体柱在线二维分离系统应用于人体软骨的蛋白质组分析

将已建立的 7 cm 柱长的磷酸基团强阳离子交换富集整体柱与85 cm柱长的C12烷基反相整体柱结合的在线二维分离平台应用于软骨提取蛋白的蛋白质组分析。对20 μg软骨提取蛋白的酶解产物进行14个盐梯度的分级,然后对14个馏分进行反相色谱梯度分离及串联质谱鉴定,成功地鉴定得到了7434个独立肽段对应的1901个非冗余蛋白质。对所鉴定到的蛋白质进行定位分类,结果表明鉴定到的大部分蛋白质是来自于软骨细胞内部的低丰度蛋白质,这对于许多关节类疾病的研究有重要意义。     

在线固相萃取-二维液相色谱串联质谱法测定人脑脊液中替考拉宁浓度

建立测定人脑脊液中替考拉宁浓度的在线固相萃取-二维液相色谱-串联质谱( SPE-2DLC-MS/MS)法。脑脊液样品经在线固相萃取处理后,通过阀切换二维色谱技术,转载至Shiseido CAPCALL-PAK C18分析柱上进行分离,以25mmol/L乙酸铵(pH 6.0)-乙腈为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min。采用电喷雾离子源( ESI),以选择反应监测( SRM)方式进行正离子检测,采用氢溴酸东莨菪碱为内标,对脑脊液样本中替考拉宁浓度进行定量检测。本方法中替考拉宁浓度在25~5000μg/L的范围内线性关系良好(R2=0.9993,n=6);日间和日内精密度RSD均小于6％,低中高3个浓度的回收率在100.8％~109.9％之间。结果表明,本方法的选择性好,线性、精密度、准确度和灵敏度高,可用于临床监测替考拉宁浓度。     

基于在线二维色谱的不同生长时期鹿茸的比较蛋白质组分析

建立了基于在线二维弱阴离子交换色谱-反相液相色谱(2D-WAX-RPLC)的蛋白质分离系统,并用于不同生长时期鹿茸的比较蛋白质组分析。以5种标准蛋白质的混合物为样品,考察了系统的重现性。通过改变标准蛋白质之间的浓度比,研究了该系统进行蛋白质相对定量的能力。在此基础上,针对4个不同生长时期的鹿茸样品,分别采用5种不同的方法进行蛋白质提取,经2D-WAX-RPLC分离后,收集各生长时期对应蛋白质的峰高最大比超过2的组分。酶解后,采用微柱反相液相色谱-串联质谱(μRPLC-MS/MS)进行肽段的分离鉴定;共从9个差异蛋白质峰中鉴定到了22个差异蛋白质。研究结果表明,利用基于蛋白质水平的在线二维液相色谱分离技术找寻差异蛋白质,具有重现性好、自动化程度高等优点,可用于开展比较蛋白质组学的研究。     

在线分析己烷中痕量四氢呋喃的气相色谱柱系统研究

 根据 30万t乙烯工程“橡胶”装置中生产工艺控制的实际需要 ,研究了在线分析己烷中痕量四氢呋喃的气相色谱柱系统。使用自制的 7μm特厚膜甲基硅氧烷大孔径弹性石英毛细管柱 ,通过试验不同条件下色谱柱的分离特性及研究组分在柱内的运动轨迹 ,给出了总的柱切换时间程序。在上述基础上 ,完成了正己烷、环己烷中 10 -6(体积分数 )级的四氢呋喃分析。现场应用一年多的实践表明 ,所研制的柱系统从分析时间、运行稳定性、定量准确性 (相对标准偏差小于 5 % )等方面均满足工艺控制的要求。     

基于液滴微流控接口的高效液相色谱-毛细管电泳二维分离平台初探

蛋白质组体系的高度复杂性需要更高分辨率的多维分离技术。近年兴起的液滴技术在微纳尺度样品操控方面具有微体积、低扩散、无返混等独特优势,有望为多维分离平台的接口提供解决方案。通过采用不同结构的液滴微流控芯片可以实现“液滴生成”与“油相排除”功能,进行样品由连续流-非连续流-连续流的高效转移,将不同的分离模式进行二维耦联。本研究利用液滴作为接口技术耦联高效液相色谱与毛细管电泳构建二维分离系统,以蛋白质降解的复杂多肽混合物为样品,考察了液滴接口二维分离平台的可行性和有效性,并获得3000以上的峰容量,初步展示了该接口技术在多维分离分析领域的应用潜力。     

离线2D-LC-MS系统的建立及其用于人肝蛋白质组学的研究

在蛋白质组学研究中,近年来提出的多维色谱-质谱联用技术有望成为继2D-PAGE-MS技术之后又一项重要的高通量技术平台,Yates,Davis,Wagner和Hancock等报道了二维强阳离子交换色谱-反相色谱-质谱(SCX-RPLC-MS)的在线联用分析系统,在该系统中,各维色谱的分离条件相互制约,只能从整体上加以平衡。     

在线分析脱丙烷塔顶中气体组分的气相色谱柱系统研究

 根据生产要求 ,对裂解装置中高压和低压脱丙烷塔顶中工艺气的气相色谱在线监控柱切换流程进行了研究。通过 3个进样器的二次异步进样 ,结合前吹、反吹等技术 ,应用 7根柱子 ,成功地在 6min内实现了对 C2 ' S、丙烷、丙烯、丙炔、丙二烯及 C4' S的在线分离分析。现场应用表明 ,研制的柱切换系统满足工艺监控要求。     

鼠肝蛋白质组的纳升级多维液相色谱分离

搭建了一个纳升级的二维液相色谱分离平台(nano-2D-LC),该平台可以自动完成进样、除盐、分离及鉴定。以离子交换色谱(SCX)为第一维,反相液相色谱(RPLC)为第二维,对鼠肝组织的蛋白质组进行了研究。SCX采用阶梯式洗脱,RPLC运用线性梯度洗脱,以200 nL/min的速度进行分离,峰容量可达620。     

人血清白蛋白柱上药物的手性拆分

考察了４种酸性药物和１种中性药物对映体在人血清白蛋白手性固定相上的保留行为。这５种药物与人血清白蛋白结合的亲和力高，难于实现快速分离，作者提出在流动相中加入短链脂肪酸－正己酸，可快速手性拆分非诺洛芬、萘普生和布洛芬。酮基布洛芬对映体分离选择性随乙腈浓度升高而增大，流动相中加入适量异丙醇可使对映体选择性大大增加（α～１．２３），华法令同样可取得很好分离。     

肝脏中的生物转化与人体健康*

许多疾病是非营养物质作用于人体的结果。生物转化是清除体内非营养物质的主要方式,肝脏是生物转化的主要场所。在各类生物转化和若干转化反应实例基础上提出了生物转化的基本方向是非营养物质灭活和增溶的观点。指出多数生物转化对机体起到了净化和保护作用,而少数偏离基本方向的转化反应一般对人体健康是有害的。阐明了肝脏健康、生物转化与人体健康3者的关系。     

Evaluation of a Semi-Automated Multidimensional Gas Chromatography-Infrared-Mass Spectrometry System for Irritant Analysis

The use of a semi-automated, multidimensional gas chromatography (MDGC) Fourier transform infrared (FT-IR) mass spectrometry (MS) system in the determination of components causing contact dermatitis has been investigated. Fragrances are widely used in cosmetic and household products and are the leading cause of contact dermatitis. Such products contain numerous components such as emulsifiers, thickeners, solubilizers, pigments, antioxidants, and many other compounds, which can make it difficult to isolate the compound of interest. MDGC has the capability for component analysis in such complex matrices. A semi-automated MDGC system, which consists of a commercial instrument modified in our laboratory to include two computer controlled valves and a single trap which is manually controlled was evaluated for analysis of irritants in a total of thirteen soaps. Using heartcutting techniques, components causing dermatitis were identified in eight of the thirteen soaps by examining both the infrared and mass spectra obtained and matching them with computer spectral libraries. Results from these analyses show that a baby soap and three other mild soaps were free of irritants. Irritants were identified in the remaining eight soaps. In addition, to demonstrate the versatility of the semi-automated system, the enantiomeric composition of a chiral irritant in two soaps also was determined.     

毛细管电色谱中缓冲液离子强度对ODS柱分离行为的影响

介绍了毛细管电色谱中流动相的选择以及缓冲液的不同离子强度对ＯＤＳ柱分离行为的影响。     

Capillary Electrochromatography on Methacrylate Based Monolithic Columns: Evaluation of Column Performance and Separation of Polyphenols

Fused-silica capillary columns (100 μm I.D.) englobing a porous monolithic stationary phase were prepared by in situ copolymerization of 2-ethylhexyl methacrylate, ethylene glycol dimethacrylate and 2-acrylamido-2-methylpropanesulfonic acid (AMPS) in the presence of a porogenic mixture containing 1-propanol, 1,4 butanediol and water. The influence of the monomers ratio and the porogen solvent composition as well as the content of AMPS in the polymerization mixture on column total porosity and efficiency was investigated to attain minimum HETP values for the reversed-phase capillary electrochromatography separation of bioflavonoids. For the most promising column, the van Deemter plots, in both μ-HPLC and CEC, were also evaluated. In CEC the reduced plate height was found almost constant (1.6–2.0) within the range of linear mobile phase velocity between 0.2–2.0 mm s⁻¹. The chemical and mechanical stabilities of the monolithic column over a wide range of buffer pH (2-10) and time were satisfactory. Furthermore, the effects of mobile phase parameters, such as buffer concentration and organic modifier content, on the electroosmotic flow were studied systematically. CEC separations of standard mixtures of polyphenols, including flavonols, flavanones and flavanones-7-O-glycosides, were accomplished in less than 8 min. The CEC separation of the major flavanone glycoside constituents in the extract from a freshly squeezed grapefruit juice was also reported.     

有机聚合物整体柱及其在生物样品分离分析前处理中的应用

整体柱由于具有制备简单、内部结构均匀、重现性好、柱效较高和可进行快速分离等优点,在分离、催化等众多领域具有良好的应用前景。 本文综述了近年来有机聚合物整体柱在生物样品分离分析中的应用,并对其存在的问题和发展趋势进行了讨论。     

用反相液相色谱分离多肽时峰容量与色谱柱长度关系的研究

在蛋白质组学研究中,多肽混合物的有效分离对蛋白质鉴定和蛋白质之间相互作用的研究起着决定性的影响。基于此,用反相液相色谱研究了在两个不同长度的色谱柱上分离多肽混合物时色谱柱长度与峰容量的关系,同时考察了梯度洗脱时间对峰容量和峰宽的影响。实验结果表明,色谱柱长度对峰容量有显著的影响,而延长梯度洗脱时间不仅可以增加峰容量,而且可以增加峰宽。这说明用毛细管液相色谱 串联质谱联用方法对多肽混合物进行分离鉴定时,采用较长的色谱柱和较长的梯度洗脱时间有利于对更多的多肽进行分析鉴定。