固定化血红蛋白氧载体的研究：Ⅰ.聚乙烯醇包埋血红蛋白

固定化血红蛋白可以作为氧载体，从海水中提取氧气，为人类在水下提供氧源。以聚乙烯醇为载体材料，固定化血红白、制备氧载体。研究了该氧载体的氧解离性能以及戊二醛和六磷酸肌醇对氧载体氧解离性能的影响。     

固定化血红蛋白氧载体的研究（Ⅱ）：氧化纤维素共价键联 …

以纤维素为载体，经高碘酸钠氧化后共价键联血红蛋白，制备氧载体。研究了氧化条件对血红蛋白固定量的影响。纤维素只有经过预氧化，碱处理和再氧化三步活化反应，才能使血红蛋白大量化，每克纤维素固定血红蛋白量达１．０ｇ。氧载体稳定性好，血红蛋白不脱落。经铁氰化钾氧化，氧载体放氧效率为３３．１％。     

Methylomonas Z201 细胞在戊二醛活化DEAE 纤维素上的共价固定化

以戊二醛活化的ＤＥＡＥ纤维素为载体，采用共价键法固定化ＭｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓＺ２０１细胞．固定化细胞催化丙烯环氧化的最优细胞／载体比为３２ｍｇ干重细胞／（ｇＤＥＡＥ纤维素），最适ｐＨ值和最适温度分别为７．８和３５℃．用纯氧代替空气作为氧源，分别使游离和固定化细胞的ＭＭＯ活性提高了８％和３５％．外源性电子给体甲酸钠对固定化细胞ＭＭＯ活性的激发作用小于游离细胞．失活动力学分析结果表明，固定化细胞的稳定性高于游离细胞．     

壳聚糖固定化胰蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，采用两种方法制备了固定化胰蛋白酶。考察了固定化反应中pH值，戊二醛的浓度，以及给酶量对固定化胰蛋白酶活力的影响，并研究了这两种固定化胰蛋白酶的性质。实验结果表明，以戊二醛预交联的网状壳聚糖为载体制备的固定化胰蛋白酶具有更加优良的性能，在最佳固定化反应条件下，酶的活性加收率可达56％。此固定化胰蛋白酶的最适pH为7．0－8．5，最适温度为60℃，Km值为2．52mol/L，固定化胰蛋白酶表现出较好的热稳定性，pH贮存稳定性，以及在乙醇水溶液中的稳定性。     

磁性高分子微球固定化中性蛋白酶的研究

以表面带羟基的磁性高分子微球为载体，对位苯醌活化后，通过共价结合修饰中性蛋白酶，得到比活性为１０００Ｕ／ｇ的磁性固定化酶。偶联蛋白量２０～３０ｍｇ／ｇ载体，固定化酶活性保持达４０％，自由酶和固定化酶相比，最适温度从５０℃变到５０～６０℃，最适ｐＨ从７．５变到６．５，Ｋｍ从０．０５４％变到０．０８８％酪蛋白溶液，ｐＨ稳定性、热稳定性、贮存稳定性都有较大提高．     

固定化血红蛋白氧载体的研究(Ⅱ)——氧化纤维素共价键联血红蛋白

以纤维素为载体,经高碘酸钠氧化后共价键联血红蛋白,制备氧载体.研究了氧化条件对血红蛋白固定量的影响.纤维素只有经过预氧化、碱处理和再氧化三步活化反应,才能使血红蛋白大量固定化,每克纤维素固定血红蛋白量达1.0g.氧载体稳定性好,血红蛋白不脱落.经铁氰化钾氧化,氧载体放氧效率为33.1%.     

α—胰凝乳蛋白酶的固定化及其对DL—苯丙氨酸的光学拆分

以氨丙基多孔球为载体，戊二醛为交联剂制得固定化α－胰凝乳蛋白酶。其含酶量为３．６ｍｇ／ｇ，米氏常数Ｋｍ＝１．２×１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ，最适宜温度为３５℃，ｐＨ值为７．０，对热、酸碱、甲醇以及尿素的稳定性有较大提高，Ｃａ＾２＋激活效应明显。用该固定化酶连续拆分ＤＬ－苯丙氨酸制备Ｌ－苯丙氨酸时，拆分产率高于９０％，产品纯度超过９６％；连续使用２个月后仍能保持较高酶活力。     

MethylomonasZ201细胞在戊二醛活化DEAE—纤维素上的共价固定化

以戊二醛活化的ＤＥＡＥ－纤维素为载体，采用共价键法固定化ＭｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓＺ２０１细胞，固定化细胞催化丙烯环氧化的最优细胞／载体比为３２ｍｇ干重细胞，最适ＰＨ值达温度分别为７．８和３５℃，用纯氧代替空气作为氧源，分别使游离和固定化细胞的ＭＭＯ活性提高了８％和３５％，外泊性电子给体甲酸钠对固定化细胞ＭＭＯ活性的激发作用小于游离细胞，失活动力学分析结果表明，固定化细胞的稳定性高于游离细胞。     

固定化乳杆菌细胞的离子交换吸附发酵生产乳酸

本文提出了固定化乳杆菌细胞的离子交换吸附发酵生产乳酸的新方法，该法以海藻酸钙凝胶为载体包埋固定化细胞用于生产乳酸，将离子交换树脂填充柱与发酵反应器相连接，用于从发酵液中及时地分离出产物乳酸。这种新方法成功地消除了产物乳酸对乳酸菌生长和产物形成的抑制作用。与常规的发酵法相比，利用离子交换树脂吸附发酵使糖转化率和乳酸生产速率分别由８６．２％和０．３２８ｇ／Ｌ·ｈ提高到９４．７％和０．４８２ｇ／Ｌ·ｈ。     

谷氨酸脱羧酶在新型羧甲基化交联烯丙基葡聚糖凝胶树脂上的 …

本文首次用合成的羧甲基化的以Ｎ，Ｎ’－甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡聚糖（简称ＣＭ－ＣＡＤＢ）凝胶生化树脂为新型载体，研究了谷氨酸脱羧酸在ＣＭ－ＣＡＤＢ树脂上的固定化与环境的信赖关系。确定了酶固定化最佳条件：缓冲体系为ｐＨ４．４，０．１０ｍｏｌ／Ｌ磷酸氢二钠－０．０５ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸，载体为交联度３５％，交换容量３．０ｍｅｑ／ｇ的ＣＭ－ＣＡＤＢ凝胶树脂，吸附平衡时间４ｈ以上，酶用量为３０．０ｍｇ／ｇ     

Coagulation of Nickel-modified Hemoglobin

Kinetics of coagulation of hemoglobin, in particular, of bovine oxyhemoglobin, in the presence of a Ni(II) salt was measured for the first time. The initial coagulation rate is several times lower than the initial rates of hemoglobin coagulation in the presence of Hg(II), Cd(II), and Zn(II) salts. In hemoglobin at neutral pHs, there is a center of preferential binding with nickel ions (presumably, reactive thiol groups of cysteine), but increasing temperature and pH disturb the selectivity of binding with this center. Hydroxide anions essentially slow down the coagulation rate, which is attributable to their competition for nickel cations.     

Coagulation of Zinc-modified Hemoglobin

At a sufficiently high concentration of bovine oxyhemoglobin, the effect Zn(II) ions exert on its coagulation compares with that of Hg(II) ions. It is suggested that the center of preferential stoichiometric binding with Zn(II) ions in the protein is the sulfur atom of reactive SH groups. However, the binding of Zn(II) ions with groups other than thiolic equally affects the protein aggregation. Analysis of the pH dependence of the protein aggregation rate showed that the most likely alternative binding centers are histidine residues of the protein.     

Pyridoxylated Polymerized Hemoglobin Solution Processing

Glutaraldehyde hemoglobin polymerization gives too many high polymers, resulting in a too viscous solution. We describe here an alternate method leading to superior results, as compared to the classical one. This method includes a molecular fractionation step using a tangential flow ultrafiltration that secondarily lowers the unpolymerized tetramer’s content of a mildly polymerized, pyridoxylated hemoglobin solution (Pyr-Poly Hb). This leads to an adequately polymerized product with a lesser high polymer content, implying a lower viscosity. We thus obtain a pyridoxylated, polymerized molecular fractionated solution presenting suitable features as a blood substitute: A 7.5 g% hemoglobin 2 g% albumin solution had a 16% unpolymerized tetramer’s ratio, a 1.8 mPas viscosity, a P₅₀ of 2.8 kPa, a Hill coefficient of 2.1, a binding coefficient of 1.3 mL/g, a colloid osmotic pressure of 2.4 kPa, and a methemoglobin concentration of 3% Male Sprague-Dawley rats undergoing an isovolumic blood exchange with this Pyr-Poly Hb solution, down to a 2% hematocrit, present a mean survival time of 20 h.     

催化分光光度法测定血红蛋白

基于血红蛋白的过氧化物酶特性,建立了一种测定血红蛋白的催化动力学光度分析法.在pH 9.5的缓冲溶液中,血红蛋白对过氧化氢氧化酸性铬蓝K反应体系的褪色作用明显加速.在最佳试验条件下,由于褪色作用的加速所引起的吸光度下降(△A)与血红蛋白的浓度在7.0×10-10～9.0×10-8 mol·L-1范围内呈线性关系.表观摩尔吸光率为3.9×108L·mol-1.cm-1,检出限为1.7×10-11mol·L-1.用于尿液中血红蛋白含量的测定,测定结果的相对标准偏差(n=5)在1.9%～4.2%之间,回收率在96.0%～102.0%之间.对此酶催化反应的机理也作了探讨.     

胶束增敏催化荧光法测定血红蛋白

基于血红蛋白（Ｈｂ）的过氧化物酶活性,催化过氧化氢氧化对甲基酚的反应体系,发现表面活性剂ＳＤＳ对该体系反应速率有明显的增强效应;从而建立了新的高灵敏测定Ｈｂ的催化荧光分析法。在１．５×１０－３ｍｏｌ／Ｌ　ＳＤＳ存在下,测定Ｈｂ的线性范围１×１０－９～８×１０－８ｍｏｌ／Ｌ,检出限为３．４×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ,用于尿中Ｈｂ的测定,结果满意。     

Hemoglobin dendrimers: functional protein clusters

A cluster of cross-linked hemoglobin tetramers was prepared by conjugating active esters to amino groups of a starburst dendrimer. Comparison of oxygen-binding properties of the protein cluster to those of nonclustered species reveals an increase in affinity and a decrease in cooperativity in the cluster. The altered oxygen-binding properties are assigned to protein-protein interactions.     

一种无氰化物测定血红蛋白的分光光度法

在pH 2.3～5.2的酸度条件下,红色的氯磺酚S能与血红蛋白作用,生成蓝色离子缔合物,其最大吸收波长为637 nm,摩尔吸收系数(为2.8×105L·mol-1·cm-1;最小吸收波长为560 nm,摩尔吸收系数(为3.5×105 L·mol-1·cm-1,线性范围均为0～100 mg/L.优化了反应条件,测定了主要分析参数并探讨了初步反应机理.该法克服了使用KCN剧毒和高白细胞、高球蛋白血症干扰的弱点.用于临床人血液中血红蛋白含量的测定,结果满意.     

血红蛋白的过氧化物酶催化特性研究

探讨了用血红蛋白（Hb)作为辣根过氧化物酶（HRP）的替代物，用于率H2O2氧 化对甲基酚的反应体系，研究了血红蛋白的过氧化物酶特征及其酶催化动力学特性 。稳态速率法测定了米氏常数（Km)、米氏速率（Vm)及反应级数等动力学参数。讨 论了对甲基酚作为血红蛋白的氢供体底物的酶催化反应机理，确立了反应速率方程 。实验比较发现血红蛋白作为过氧化物酶（HRP）的替代物，其催化活性比氯化血 红素（Hemin)，β-环糊精－氯化血红素（β－CD－Hemin)等过氧化物模拟酶要高。