凡纳滨对虾在不同实验条件下感染白斑综合症的研究

本研究目的是探讨在不同实验条件下的凡纳滨对虾人工感染白斑病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的死亡率变化。研究结果如下,当凡纳滨对虾感染10-3、10-4、10-5WSSV(每尾注射剂量0.1mL),15天后的死亡率分别为(100±0)%,(78±2.3)%,(21±1.4)%。当养殖在高(100尾/m3)、中(50尾/m3)和低密度组(25尾/m3)的凡纳滨对虾感染10-4WSSV,15天后的死亡率分别为(91±2.7)%、(78±1.3)%、(63±1.9)%。在相同养殖密度下的凡纳滨对虾感染10-4WSSV,雌虾组和雄虾组15天后的死亡率分别为(67.3±1.83)%,(51±2.1)%(p<0.05),白天的死亡率比晚上的低,差异显著(p<0.05)。另外,凡纳滨对虾注射感染的死亡率与投喂感染的死亡率比较,差异不显著(p>0.05)。     

凡纳滨对虾生命周期环境影响模型分析评价研究

【目的】以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为原料,针对凡纳滨对虾养成和综合利用(同时获得冷冻无头虾、调味基料、多功能饲料添加剂等3种产品)模式,评价整个过程的环境影响。【方法】引入生命周期环境影响评价(Life Cycle Assessment,LCA)概念和方法,构建了由确定目标和范围、清单分析、影响评价、结果解释等4个步骤组成的评价体系,并对其生产过程中的资源消耗、富营养化、温室效应、酸化、烟尘与粉尘、固体废弃物排放等进行了定量评价。【结果】在以养成及综合利用1000kg凡纳滨对虾为功能单元的评价体系中,总环境影响负荷为0.386,单类型环境影响负荷分别为温室效应(0.179)、酸化效应(0.112)、富营养化(0.055)、粉尘和烟尘(0.034)及工业固废(0.006)。【结论】各子系统对总环境负荷值的贡献大小依次为养殖阶段、加工阶段、繁殖阶段及废水处理阶段。     

凡纳滨对虾精子超微结构及遗传失活的研究

本文研究使凡纳滨对虾精子遗传失活的方法,用波长365nm和照射距离10.5cm的不同剂量紫外线照射凡纳滨对虾精液稀释液或精荚,然后进行人工授精。结果表明,新鲜精液稀释液在0~20s照射范围内,受精作用都仍能正常发生,与卵子人工体外授精仍可获得5%的平均受精率,但胚胎在孵化前死亡;新鲜精荚在5~10min照射范围内,采用精液移植授精法可获得20%的平均受精率和3%的平均幼体孵化率。精子在2×105个/cm2的条件下,精液稀释液厚度2cm,经30s以上紫外线照射后,精子染色体可完全失活,而精荚经20min以上紫外照射后,精子染色体亦可完全失活。应用透射电镜对正常和不同时间紫外辐射的凡纳滨对虾精子形态和超微结构进行观察,结果发现,凡纳滨对虾正常精子系单一棘突类型,主要由前端棘突、中间帽状体和后主体部构成,精子无尾部,不主动运动。紫外辐射凡纳滨对虾新鲜精液稀释液10~20s的精子形态和超微结构与正常活精子无明显变化。紫外辐射30s的精子表现为顶体和棘突形态正常,而染色质散乱,后主体部壁变薄;紫外辐射60s时精子就出现明显的受损状态,主要表现为细胞核变形,核区缩小,核膜受损部分破裂,染色质散乱甚至溢出,后主体部或前部胞壁加厚、膜表面皱缩、底部凹陷,顶体部局部受损,细胞质带囊泡化,双层膜肿胀,膜间腔增大。     

凡纳滨对虾多酚氧化酶的纯化及性质分析

通过硫酸铵盐析、DEAE-Cellulose离子交换、Phenyl-Sepharose疏水层析、Hi-Trap Capto-Q强阴离子交换层析等方法,从凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)虾头中分离纯化出一种多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)显示其分子质量约为210 ku。肽质量指纹图谱的比对结果表明,纯化得到的PPO中含有187个氨基酸残基的14个片段与NCBI数据库中酚氧化酶原(gi|147724160)序列相似性为100%。该酶的最适温度和最适pH值分别为40℃和6.0,且在温度0～50℃及pH=5.0～8.0可保持相对稳定的活性。圆二色谱分析结果表明,对虾PPO的二级结构主要为反平行结构及无规则卷曲。抗坏血酸、茶多酚和特丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,TBHQ)等具有生物活性羟基的抑制剂对其均有较好的抑制效果。     

凡纳滨对虾池塘不同混养模式技术的研究

2010年、2011年利用"南美白对虾疫病政策性互助保险"这一平台,对慈溪市凡纳滨对虾生产进行了全面调查和分析。结果表明:(1)凡纳滨对虾池塘进行套养鱼类能有效提高对虾产量,降低饲料系数,2010年提高产量0.026 kg/m2;2011年提高产量0.029 kg/m2,饲料系数降低21.4%;(2)凡纳滨对虾池塘套养银鲫与鳙鱼模式,凡纳滨对虾池塘套养甲鱼模式其产量与效益均好于其它模式。     

浙江地区凡纳滨对虾苗3种对虾病毒携带情况研究

对虾养殖过程中病毒病的频发是导致对虾养殖失败的最重要原因之一,其中对虾的白斑综合症病毒病(White spot syndrome virus,WSSV)、对虾传染性皮下及造血组织坏死病病毒(Infectious hypodermal&haematopoietic necrosis virus,IHHNV)和对虾桃拉病毒(Taura syndrome virus,TSV)每年给海水养殖造成的经济损失巨大.对2009-2010年间浙江地区近22家对虾苗种生产场的对虾苗种携带WSSV、IHHNV和TSV病毒情况进行调查,并对采用携带病毒的苗种进行养殖的3个对虾养殖场进行后期跟踪调查.调查共采集凡纳滨对虾苗种样品118份,其中80％样本来自福建,10％来自海南,10％来自广东.检测方法采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的PCR方法,检测结果显示:被检样品中32份呈现WSSV阳性结果,占27.1％;46份呈现IHHNV阳性,占38.98％; WSSV和IHHNV同时呈现阳性的有20份,占16.95％,而TSV均未分离到.后续跟踪调查发现采用携带WSSV病毒苗种进行养殖的对虾养殖塘均在8月上中旬陆续爆发对虾白斑病,造成极大经济损失.     

凡纳滨对虾养殖早期水体中氮磷营养盐变化规律研究

为探讨凡纳滨对虾养殖早期水体中主要营养盐含量及其变化,测定了对虾池水体中的氨氮、硝酸盐、亚硝酸和磷酸盐。结果显示,氨氮浓度变化范围：0．3-0．02mg／L,硝酸盐浓度变化范围：0．29-8．68mg／L,亚硝酸盐浓度变化范围：0．15-8．50mg/L,磷酸盐浓度变化范围：004-1．10mg／L。在养殖早期水体中,氨氮浓度呈波动变化,硝酸盐、亚硝酸盐和磷酸盐含量相对稳定。     

虾肝肠胞虫(EHP)在凡纳滨对虾养殖水环境中的分布情况及传播途径初步研究

针对近年来在舟山地区养殖户普遍反映的凡纳滨对虾感染虾肝肠胞虫(EHP)情况,本实验室运用巢式PCR检测方法,对凡纳滨对虾养殖水环境中EHP分布情况开展了调查;同时以携带EHP对虾对健康凡纳滨虾进行了人工感染试验,分析EHP在水体中的传播途径。实验结果表明,从采集的虾、蟹类和水样本中均扩增出了EHP,经测序比对与GenBank中EHP序列一致;其中虾类样本最高,阳性率达17.6%,而采集的水样中,从对虾携带EHP的养殖塘采集的水样阳性检出率最高,为100%;人工感染试验中,活病虾肝胰腺组织投喂组EHP的阳性检出率是45.8%,投喂冷冻病虾肝胰腺组的阳性检出率是12.5%,健康虾和病虾混合饲养组的阳性检出率是54.2%,对照组未有EHP检出。通过上述研究,初步认为EHP一旦在养殖水环境存在,即可以通过流水分布于养殖环境中,不仅在养殖水体中存在,还可以在其它水生生物体内存活;健康虾可以通过摄食寄生EHP的病死虾或养殖水环境中的孢子体而感染。     

甘蔗渣悬浮颗粒和芽孢杆菌在凡纳滨对虾高位池养殖中的应用

向凡纳滨对虾高位池(面积均为0.067 m~2)养殖环境中添加甘蔗渣悬浮颗粒与芽孢杆菌,设置不同梯度放养量,分别放养6万与16万尾虾苗,各处理组为对照组6、蔗渣和菌组6,对照组16、蔗渣和菌组16,通过测定水质、细菌数量和对虾生长等指标,评估对养殖环境和对虾生长的影响,实验结果表明:各组生物絮团含量最大值分别为1.1 m L/L,1.0 m L/L,0.4m L/L,0.4 m L/L,都维持在较低水平,各养殖密度条件下添加蔗渣和菌组都大于相应对照组,这说明甘蔗渣悬浮颗粒和芽孢杆菌的添加,对水体中生物絮团的形成有一定的促进作用。各养殖密度下蔗渣和菌组水体中芽孢杆菌数量维持在10~4 cfu/m L左右,而对照组都则维持在10~2 cfu/m L左右,蔗渣和菌组分别大于相应对照组,而弧菌数量在实验后期要低于相应对照组,原因可能是甘蔗渣悬浮颗粒的添加,为芽孢杆菌提供了大量的附着基,有效增加了水体中芽孢杆菌数量,抑制了弧菌生长。收获时,蔗渣和菌组6对虾体重为9.09±0.43 g,对照组6为8.19±0.36 g,显著大于对照组(P0.05);蔗渣和菌组16(10.42±0.55g)也显著大于对照组16(8.33±0.51 g)(P0.05);蔗渣和菌组6的产量为325 kg,比对照组6高100 kg;蔗渣和菌16组最终产量为381 kg,比对照组16高276.5 kg。研究表明:甘蔗渣悬浮颗粒和芽孢杆菌的添加,能促进生物絮团的形成,增加和维持水体中芽孢杆菌等有益菌的数量,改善养殖环境,促进对虾生长,提高对虾产量和成活率。     

微生态制剂对凡纳滨对虾生长及水质的影响

以初始体质量4.5±0.1 g的凡纳滨对虾为研究对象,探讨了几种微生态制剂添加到饲料中和直接添加到养殖水体中对凡纳滨对虾生长和水质的影响。使用微生态制剂是乳酸芽孢菌、地衣芽孢杆菌:枯草芽孢杆菌(1:1)和复合菌虾乐333,添加饲料的剂量均为1‰,添加水体的量0.5 g/200 L。实验设7个处理,每个处理设3个重复,每个重复放养25尾对虾,实验周期是4周,温度为(28±5)℃,盐度5‰。试验开始后,每隔3 d测定水体的pH、氨氮和亚硝酸盐。实验结果表明:微生态制剂添加到饲料中或直接添加到水中都能促进对虾的生长,降低饵料系数(P<0.05),而添加到水中的实验组比添加到饲料中的实验组生长效果更显著。实验组的pH、氨氮和亚硝酸盐比对照组都有降低的趋势,其中pH和亚硝酸盐在试验后期有显著性差异(P<0.05),而各添加组间差异不显著(P>0.05)。     

凡纳滨对虾养殖水体中浮游生物群落的多样性分析研究

为探讨凡纳滨对虾养殖水体中浮游生物群落的演替,对虾池水体中浮游生物群落组成和其多样性进行了分析.研究结果表明:在凡纳滨对虾养殖水体中,浮游植物的优势种主要由小球藻(Chlorella sp.)、波吉卵囊藻(Oocystis borgei)、小环藻(Cyclostella sp.)、新月拟菱形藻(N.closterium sp.)、角毛藻(C.mueeleri sp)、平裂藻(Merismopedia sp).和席藻(Phormidium sp)组成.浮游植物多样性指数变化范围为0.08～1.89,平均值为1.36±0.25,优势度指数变化范围为0.20～0.98,平均值为0.51±0.26.浮游动物的优势种为许水蚤(Schmackeria.sp)和臂尾轮虫(Brachionus.sp),其中,水体中许水蚤无节幼体的数量呈规律性波动,波动周期为15d.     

铜绿微囊藻对凡纳滨对虾低盐度养殖的危害研究

通过池塘陆基围隔实验,研究了铜绿微囊藻对凡纳滨对虾低盐度养殖的危害。实验结果铜绿微囊藻在2‰~6‰低盐度养殖水体中可大量爆发,形成单一优势种,种群增长快、持续时间长,种群密度和优势度高达5.39×107个.L-1和88.9%。铜绿微囊藻毒性表现为时间和密度双重效应。对虾养殖期,微囊藻作为优势种持续时间30 d以上,平均密度达到1.0×107个.L-1或优势度达到35%,均致养殖对虾发病,并随密度升高和持续时间延长,对虾病情加重;平均密度低于4.0×106个.L-1或优势度低于15%,对虾养殖正常,平均密度低于2.0×106个.L-1或优势度低于6%对虾养殖安全。微囊藻为主要优势种,对虾养殖成活率平均为16.6%,体长和体质量平均生长速度为1.21 mm/d和0.15 g/d,对虾养殖成活率和生长速度显著降低。     

凡纳滨对虾"肌肉白浊病"病原的初步研究

从患"肌肉白浊病"的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的淋巴和肌肉中分离到3株细菌.人工注射感染显示,BDX-C分离菌在浓度达4.0×107cfu/mL时可使90%以上健康凡纳滨对虾死亡;4.0×106 cfu/mL时可使60%健康对虾死亡,并使凡纳滨对虾出现明显的白浊症状,试验结果表明该分离菌为致病菌.BDX-C菌的主要生理生化特性为:革兰氏阴性,单鞭毛,发酵葡萄糖,甘露醇、氧化酶、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶阳性,精氨酸脱羧酶、水杨素、枸橼酸盐(西蒙氏)阴性,在无NaCl及含10% NaCl的普通培养基中不生长,在含2%～8% NaCl的普通培养基中生长,在30～42 ℃下生长良好.鉴定该菌为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus).药敏试验结果表明,该菌对四环素、多粘菌素B、链霉素、庆大霉素、氟哌酸等药物敏感,对氨苄青霉素、青霉素G、先锋霉素G、先锋霉素V、利福平、卡那霉素、复方新诺明、新霉素、强力霉素、麦迪霉素等抗菌素不敏感.     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)ATG3基因克隆及其在WSSV感染中的表达

为了揭示凡纳滨对虾自噬相关基因LvATG3在对虾先天免疫过程中的作用,利用PCR技术克隆出LvATG3,利用荧光定量PCR方法检测LvATG3在凡纳滨对虾不同组织中的表达,用白斑综合症病毒(WSSV)侵染凡纳滨对虾,检测WSSV侵染后不同时间LvATG3的基因表达情况.LvATG3 ORF区全长948 bp,编码315...     

凡纳滨对虾选育系间杂交的生长性状及遗传多样性分析

对2个凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)选育系(A和B)的自繁与杂交后代的生长性状及遗传多样性进行了分析.养殖对比实验结果表明,杂交组合AB生长性状优于其他各组,表现出较好的杂种优势.使用11对荧光标记的微卫星引物对4个凡纳滨对虾自繁与杂交群体以及1个从美国引进的初代亲本SIS群体的基因组DNA进行扩增,结果显示除AA群体外,其余4个群体均表现出较丰富的遗传多样性,观测到的平均等位基因数(Na)为4.273~5.636,平均期望杂合度(He)为0.586~0.629,平均多态信息含量(PIC)为0.512~0.556.遗传距离分析结果显示,SIS群体和AA群体的遗传距离最远(0.670 4),而与AB群体的最近(0.131 4).研究结果表明,引自美国的凡纳滨对虾群体经多代自繁后,其遗传多样性水平降低;而选育系间杂交则可使杂交后代的生长性状和遗传多样性水平得到改善.     

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)Hsp70基因PCR扩增及序列分析

目的：为获得凡纳滨对虾的热休克蛋白70（Hsp70）基因并分析其基因序列．方法：根据GenBank中斑节对虾（Penaeus monodon）Hsp70基因的cDNA序列,设计引物,对经高盐法提取的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）基因组DNA,采用优化的降落PCR（Touch Downeca）程序,扩增凡纳滨对虾Hsp70基因的全长序列．结果：PCR扩增得到一条长1983bp的目的DNA片段,回收纯化该片段并测定其核酸序列．用DNAman软件分析发现,该核酸序列中不含内含子,编码区全长为1959bp;经BLASTn和BLASTx软件分析发现,该编码区核苷酸序列与斑节对虾、罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）的Hsp70基因序列的相似性分别为97％和62．2％．根据核苷酸序列所推导出的Hsp70氨基酸序列,其与斑节对虾、罗氏沼虾的相似性分别为99．9％和92．6％．结论：成功地从凡纳滨对虾基因组DNA中直接扩增出Hsp70基因的全长编码区序列。     

凡纳滨对虾亲虾驯养、促熟、产卵及无节幼体培育

在水温27±2℃,盐度29±2;pH8.0~8.5,光强1 000 1x的条件下,对来自我国台湾的1 300对规格为35~45 g/尾的凡纳滨对虾亲虾进行为期73 d的驯养、促熟、产卵及无节幼体培育试验.结果表明,整个试验过程中,亲虾平均存活率为99.458%,波动区间[99.583%,99.333%],日产卵亲虾比例平均为3.506%,波动区间[3.89%,3.123%],雌虾单尾次日产无节幼体数量平均为18.928%,波动区间[19.691%,18.164%].无节幼体的日产量随繁殖驯养的延长,呈渐渐上升态势,从240万尾(第21天)至2 135万尾(第54天)平均为1 323万尾.此外,试验发现近成熟的雌虾也能接受交配行为.     

不同温度条件下溶壁微球菌和白斑综合症病毒对凡纳滨对虾的致病性

研究在3种不同温度(19±1℃、25±1℃、31±1℃)条件下不同浓度的溶壁微球菌和白斑综合症病毒对凡纳滨对虾的致病性。通过单独及合并感染对虾记录其死亡率并检测病毒携带量。结果显示:温度19±1℃条件下,至实验结束各组累积死亡率和病毒携带量分别低于7.7%,8.6×102 copy/g。温度25±1℃条件下,48~96 h单独感染WSSV累积死亡率与合并感染组差异显著(P0.05),而且合并感染组不同浓度之间存显著差异(P0.05),死亡率和病毒量最大值分别为71.1%,6.2×105copy/g(合并感染浓度9.5×107 cfu/m L组)。温度31±1℃条件下,各组累积死亡率在48 h迅速升高,合并感染组死亡率和病毒携带量(最大值:75.6%,2.0×106 copy/g)明显高于单独感染WSSV组(42.2%,2.2×104 copy/g)。随着感染时间延长,单独细菌感染组对虾死亡率随感染浓度升高而升高(最大值:71.1%)。因此合并感染对对虾养殖危害更大,且随着温度升高,溶壁微球菌和合并感染的致病力随温度升高而升高,即温度能显著影响溶壁微球菌和WSSV的致病力。     

阿奇霉素在鸡组织中的消除规律及临床毒性研究

探讨了阿奇霉素对仔鸡的临床毒性及其在鸡组织中的消除规律.阿奇霉素以0、50、100和200 mg/L的水溶液供麻花肉鸡连续自由饮用14 d后,测定血清生化指标、脏器系数,并进行组织病理学观察;同时,阿奇霉素按10 mg/kg的剂量连续对肉鸡灌服7 d后测定体内各组织中的残留量.结果显示,高剂量组肉鸡的肝脏系数和谷丙转氨酶活性存在显著差异(P<0.05),阿奇霉素在肉鸡肝脏中的残留时间最长,其他依次是肾脏、脾脏、肌肉和血清.表明肉鸡的肝脏为阿奇霉素的中毒靶器官;根据其在鸡组织中的消除规律,阿奇霉素的肉鸡休药期可定为15 d.     

呋喃西林和呋喃唑酮代谢物在大菱鲆组织中的消除规律

分别采用呋喃西林或呋喃唑酮单药给药及两种药物共同给药的方式,研究了其代谢物氨基脲(Semicarbazide, SEM)和3-氨基-2-噁唑烷基酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)在大菱鲆肌肉、肝脏和血液中的消除规律。结果表明,无论采用何种给药方式,呋喃西林和呋喃唑酮均能在大菱鲆组织中富集,并迅速代谢成SEM和AOZ。不同组织中,肝脏中SEM和AOZ的质量分数最高,其次为肌肉和血液;而同种组织则AOZ的质量分数远高于SEM,前者约为后者的10～30倍。而且两种给药方式下,SEM和AOZ在3种组织中都具有相似的消除规律:初始阶段均具有较高的消除速率,随后消除趋势趋于平缓,并在较长时间内维持一定质量分数,至实验结束时,3种组织中的SEM和AOZ质量分数都仍高于检出限。然而给药方式能够影响SEM和AOZ的富集质量分数及消除速率,如单药给药时SEM和AOZ在大菱鲆组织中的质量分数远高于共同给药下的质量分数,但消除半衰期(t_(1/2))却低于共同给药方式。结果表明硝基呋喃类药物的代谢物在大菱鲆组织中较难消除,具有较长的消除半衰期,应慎重将这类药物应用于大菱鲆疾病的治疗。