两种基于RAJI细胞的抗CD20单抗新型定量方法的比较及在药物代谢动力学中的应用

建立和比较基于RAJI细胞的流式细胞法(Flow cytometry assay,FCA)和细胞放射免疫法(Immuno-radiametric assay,IRA)测定重组抗CD20人源化单克隆抗体(r-anti-CD20zumAb)的浓度.两种方法均利用标记后抗体和被检测抗体竞争性结合RAJI细胞表面的CD20抗原,由标记后抗体的荧光或放射性变化而间接反应检测抗体的浓度.FCA和IRA定量范围分别为0.1～100 mg/L和0.04～20 mg/L,FCA的日内及日间精密度分别小于4.0%和3.0%,准确度为-1.7%～1.1%,IRA的日内及日间精密度值均小于7.0%,准确度为-8.9%～13.2%.方法学确证研究表明,两种方法均具有良好的特异性、灵敏度、精密度和准确度.血浆样品分析结果显示,两种方法具有良好的一致性,是检测猕猴血浆中人源化单克隆抗体浓度的理想方法.     

酸化吹气-重铬酸钾法测定高氯地表水中化学需氧量方法适用性研究

为研究酸化吹气-重铬酸钾法测定高氯地表水中化学需氧量的适用性,6家实验室使用酸化吹气-重铬酸钾法对高氯地表水中化学需氧量进行测定。结果表明,该方法的检出限为4mg/L,6家实验室对3种浓度的标准溶液(氯化物浓度均为2万mg/L)进行精密度测试,实验室内相对标准偏差范围分别为3.4%～9.6%、2.9%～4.4%、1.7%～7.5%,实验室间相对标准偏差分别为3.2%、2.3%、3.4%;对2个不同浓度的高氯地表水实际样品进行精密度测试,实验室内相对标准偏差范围为2.7%~5.7%、2.1~7.5%,实验室间相对标准偏差分别为4.1%、13.4%;对3种浓度的标准溶液(氯化物浓度均为2万mg/L)进行准确度测试,实验室内相对标准偏差范围为-1.0%～11.0%、-3.0%～3.5%、-5.3%～4.0%,室间相对误差的标准偏差分别为4.0%、2.3%、3.4%。方法去除氯离子干扰效果好,精密度、准确度及检出限较好,适用于高氯地表水中化学需氧量的测定。     

酸化吹气-重铬酸钾法测定高氯地表水中化学需氧量

为研究酸化吹气-重铬酸钾法测定高氯地表水中化学需氧量的适用性,6家实验室使用酸化吹气-重铬酸钾法对高氯地表水中化学需氧量进行测定。结果表明,方法的检出限为4mg/L,6家实验室对3种浓度的标准溶液(氯化物浓度均为20 000mg/L)进行精密度测定,实验室内相对标准偏差范围分别为3.4%～9.6%、2.9%～4.4%、1.7%～7.5%,实验室间相对标准偏差分别为3.2%、2.3%、3.4%;对2个不同浓度的高氯地表水实际样品进行精密度测定,实验室内相对标准偏差范围为2.7%～5.7%、2.1%～7.5%,实验室间相对标准偏差分别为4.1%、13.4%;对3种浓度的标准溶液(氯化物浓度均为20 000mg/L)进行准确度测定,实验室内相对标准偏差范围为-1.0%～11.0%、-3.0%～3.5%、-5.3%～4.0%,室间相对误差的标准偏差分别为4.0%、2.3%、3.4%。方法去除氯离子干扰效果好,精密度、准确度及检出限较好,适用于高氯地表水中化学需氧量的测定。     

液相色谱串联质谱法测定水果中复硝酚钠残留量

以甲醇提取样品,采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC–MS/MS)测定水果中复硝酚钠的残留量。以甲醇–10 mmol/L乙酸铵水溶液(体积比为60∶40)为流动相,质谱采用电喷雾负离子MRM检测模式。对硝基苯酚钠和5-硝基愈创木酚钠的线性范围为0.05~2.00 mg/L,检出限为0.01 mg/kg,邻硝基苯酚钠的线性范围为2.5~100.0 mg/L,检出限为0.5 mg/kg,线性相关系数均大于0.995。实际样品中对硝基苯酚钠、邻硝基苯酚钠和5-硝基愈创木酚钠的加标回收率分别为83.0%~93.4%,81.0%~87.4%,83.0%~91.8%,测定结果的相对标准偏差小于7%(n=6)。该法操作简单、快捷,精密度、准确度高,适用于水果中复硝酚钠的残留分析。     

阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法测定赣南脐橙中的氨基酸

建立了阴离子交换色谱-积分脉冲安培法测定脐橙中17种氨基酸的分析方法。样品用无水乙醇提取,经聚苯乙烯-二乙烯基苯型阳离子交换树脂(PS-DVB)003x7去除碳水化合物,采用AminoPac PA10保护柱(50×2mm)和AminoPac PA10分析柱(250×2mm)分离,积分脉冲安培检测器检测。所测17种氨基酸在一定浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均大于0.995,检出限为0.01~0.19mg/L。在2.0mg/L和8.0mg/L两个添加水平的平均回收率在72.5%~130.5%之间,相对标准偏差在0.5%~10.1%范围。该法具有较好的准确度和精密度,基本能满足实际样品分析的要求。     

凝血酶时间法测定家兔血浆中重组水蛭素

建立了凝血酶时间(thromb in tim e,TT)法测定国产重组水蛭素血药浓度的方法,以便为进一步研究该药在家兔体内的药物代谢动力学提供方法学基础。重组水蛭素血浆水平依其抗凝血酶活性(TT延长)予以测定。对该法的影响因素进行了探讨,最适测定条件确定为5 U/mL的凝血酶溶液,0.1 mol/L pH 7.4的Tris-HCL缓冲液及血浆各50μL;结果发现对凝血酶时间延长百分率的对数与浓度呈线性相关,r为0.98~0.99;线性范围为0.12~0.60 mg/L,定量限为0.12 mg/L。日内和日间精密度(RSD)分别为5.6%~9.1%和9.2%~11.5%;方法回收率97.5%~99.2%;超出线性范围的高浓度血浆样品作2~100倍稀释,其稀释回收率为92.4%~94.8%。血浆样品在-20℃冰冻保存,至少1星期内稳定。应用本方法测定家兔iv重组水蛭素2.0 mg/kg后不同时间血药浓度,表明该药符合二室模型、一级动力学过程。     

离子对反相液相色谱同时测定家兔血浆中的外源性磷酸肌酸及其代谢产物肌酸

建立了离子对反相高效液相色谱法(IP-RP-HPLC)同时测定家兔血浆中外源性磷酸肌酸(PCr)及其代谢产物肌酸(Cr)的方法,用于研究外源性PCr在家兔体内的药代动力学。以含离子对试剂四丁基硫酸氢铵(TBA)的磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相,在Kromasil-C18色谱柱上进行梯度洗脱。采用内标法定量、以基线扣除法计算外源性PCr和Cr的浓度。PCr和Cr的线性范围分别为10～7500 mg/L和10～1500 mg/L;日内和日间精密度均≤6.2%,准确度分别为99.7%~102.2%和96.5%~102.4%;萃取回收率均大于92%。静脉注射PCr后,血浆中PCr的消除为二室模型,消除半衰期为(20.4±2.7) min;表观分布容积为(0.179±0.037) L/kg;清除率为(0.019±0.002) L/(kg\5min);静脉注射PCr后血浆中迅即出现降解产物Cr,其达峰时间为30 min;消除半衰期为(43.7±4.5) min。本方法的专属性强,准确度和精密度高,能特异性地测定家兔血浆中的PCr和Cr。实际应用结果表明,该方法完全符合PCr药代动力学生物分析方法学的要求。     

HPLC-MS测定大鼠血浆中单硝酸异山梨酯

建立了高效液相色谱-质谱法测定血浆中单硝酸异山梨酯浓度的方法.以茶碱为内标,样品在碱性条件下,用乙酸乙酯提取,高效液相色谱-质谱(MSD)检测.线性范围为0.034 64~103.0 mg/L,回收率为93.1%~112.0%,相对标准偏差小于6%.该法处理血浆简单,检测结果准确度高,专一性强,适用于药代动力学和生物利用度研究.     

婴幼儿配方乳粉中维生素C的测定方法比较

采用不同固定相填料的色谱柱探讨了应用超高效合相色谱法(UPC2)分离、测定婴幼儿配方乳粉中维生素C的可行性。最终选用Waters CSH Fluoro-Phenyl(3.0×100 mm,1.7μm)色谱柱,流动相以超临界CO2为主体,0.1%磷酸甲醇为助溶剂梯度洗脱。流速0.6 m L/min,检测波长为245 nm,方法检出限为5 mg/L,线性范围为5~200 mg/L;平均加标回收率范围为90.7%~95.4%,RSD为1.9%~2.8%。与国家标准GB 5413.18-2010进行比对,2种分析方法对婴幼儿配方乳粉中维生素C含量测定的准确度和精密度均能满足定量分析的要求。     

定量核磁共振波谱法同时测定中药虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的含量

建立了定量核磁共振波谱法同时测定虎杖中白藜芦醇和虎杖苷的方法。样品用80%乙醇和丙酮两次超声提取净化,再用定量核磁共振波谱法测定。考察了样品预处理和核磁共振实验条件对测定结果的影响,选择氘代二甲亚砜-重水(10∶1,V/V)为溶剂,用基准物质邻苯二甲酸氢钾标定的2,3,5-三碘苯甲酸为内标,选择脉冲延迟时间为5 s,采样次数为32次。定量峰为6.388~6.391(白藜芦醇:H-2,6,d,2H)和6.322~6.330(虎杖苷:H-4,t,1H)。结果表明,NMR测定的精密度均小于0.6%,线性相关系数(r)均大于0.999,白藜芦醇和虎杖苷的检出限分别为0.23和0.24 g/L,定量限分别为0.69和1.57 g/L,包括样品提取过程的回收率分别为97.7%~103.5%(RSD=2.4%)和94.5%~99.2%(RSD=1.6%),显示出定量核磁共振法在中药定量时的可靠性。实际测定4种虎杖饮片及配方颗粒样品中白藜芦醇和虎杖苷含量分别为3.57~5.69 mg/g和12.73~24.07 mg/g。     

保健食品中壮阳类西药成分的核磁共振氢谱定量分析

建立了保健食品中枸橼酸西地那非、他达拉非、伐地那非的核磁共振氢谱定量(1H q NMR)分析方法。采用布鲁克Avance DRX 500超导核磁共振波谱仪,以氘代二甲亚砜为溶剂,2,3,5-三碘苯甲酸为内标物,优化了仪器采集参数,并进行了方法验证。结果表明:当内标添加量为2 mg、内标与待测化合物摩尔比在1∶0.1~1∶1.2范围时,标准曲线线性良好,相关系数(r2)不小于0.999;枸橼酸西地那非、他达拉非、伐地那非的检出限分别为0.045,0.026,0.033 mg/m L,定量下限分别为0.218,0.128,0.159 mg/m L;日内精密度RSD值分别为0.38%,0.85%,0.34%;日间精密度RSD值分别为0.72%,1.2%,1.4%。利用所建立的方法对13种实际样品进行定量分析;并将测试结果与HPLC-DAD法测试结果进行比较,两种测试结果的RSD在1%~8%之间。     

气相色谱法测定铁皮石斛、浙贝母和人参中嘧菌酯残留

本文建立了铁皮石斛、浙贝母和人参三种中药材中嘧菌酯的残留检测方法。样品采用乙腈提取,二氯甲烷液-液萃取,弗罗里硅土-中性氧化铝-活性炭柱层析净化,乙酸乙酯定容,气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD)检测,基质外标法定量。结果表明:在0.01~1.0mg/L范围内,不同基质中嘧菌酯的峰面积与其质量浓度间呈良好线性关系,相关系数均大于0.999;在0.01、0.1和0.5mg/kg的添加水平下,嘧菌酯在3种中药材基质中的平均回收率为85.0%~94.9%,日内相对标准偏差(RSD)均小于5.2%(n=5),日间RSD均小于6.7%(n=15);其在铁皮石斛、浙贝母和人参基质中的检出限(LOD)为0.002~0.004mg/kg,定量限(LOQ)均为0.01mg/kg。方法的准确度和精密度均满足残留分析要求,适用于铁皮石斛、浙贝母和人参中嘧菌酯的检测。     

家具白乳胶中苯系物含量测定

建立了气相色谱内标法测定家具白乳胶中苯系物含量的方法。样品中苯系物经甲醇提取、离心,上清液用60 m EN-20色谱柱分离,气相色谱检测,内标法定量。优化条件下苯系物回收率在96.84%~103.86%,相对标准偏差(RSD)为0.79%~2.28%,定量下限2.4~2.9 mg/L。方法操作简单,准确度和精密度较高,是一种检测白乳胶产品中苯系物含量的有效方法。     

微液液提取或固相萃取法净化、气相色谱-质谱联用检测葡萄酒中19种农药多残留

建立了红葡萄酒中19种农药多残留的气相色谱-质谱联用选择离子模式进行监测的检测方法,比较了固相萃取(SPE)和微液液提取(MLLE)两种前处理方法并考察了基质效应。两种方法在0.01~10 mg/L范围内线性关系良好,相关系数大于0.997。在0.01~1.0 mg/kg添加水平范围内,SPE法的平均添加回收率在77.8%~109.1%之间(四螨嗪为137.5%);MLLE法的平均添加回收率在83.3%~116.7%之间(四螨嗪为43%)。SPE法的最低检出限(LOD)0.001~0.01 mg/kg之间,定量检出限(LOQ)为0.005~0.05 mg/kg,相对标准偏差小于10%;MLLE法为LOD在0.02~0.10 mg/kg,LOQ为0.06~0.30 mg/kg,相对标准偏差小于14%。所有目标化合物均存在基质增强效应,可用基质匹配标准溶液来减少其对测定结果的影响。     

加速溶剂萃取-QuEChERS-气相色谱质谱联用法测定土壤中增塑剂

建立加速溶剂萃取-QuEChERS-气相色谱质谱联用法对土壤样品中17种增塑剂进行检测.土壤样品以正己烷饱和乙腈萃取,经25 mg乙二胺-N-丙基硅烷和25 mg硅胶净化,气相色谱质谱联用法选择离子监测(SIM)模式下检测,以外标法进行定量分析.17种增塑剂在0.01~2 mg/L质量浓度内线性关系良好,各化合物相关系数均在0.999以上.方法的检出限在0.01~0.05 mg/kg之间,定量限在0.03~0.15 mg/kg之间,17种增塑剂在0.5、1.0、5.0 mg/kg添加水平下,加标回收率和精密度分别为72.8%~116.2%和1.73%~6.15%.方法简易便捷、灵敏度和准确度高,适合于检测土壤中17种增塑剂.     

蔬菜中百菌清及其代谢产物残留的ELISA检测方法研究

以2,4,5-三氯-6-(2-羟基乙氧基)间苯二腈为反应物制备半抗原,利用琥珀酸酐法制备人工抗原。以百菌清-牛血清蛋白(BSA)为免疫原免疫新西兰大白兔,制备特异性兔抗百菌清(CHT)及其代谢产物羟基百菌清(Hydroxy-chlorothalonil,CHT-OH)的多克隆抗体。采用非竞争酶联免疫法(ELISA)以百菌清-卵清蛋白(OVA)偶联物作为包被抗原,当其质量浓度为0.1 mg/L时,测得抗百菌清血清的效价约为1∶1×104。据此建立了百菌清间接竞争ELISA检出方法,并用于蔬菜中百菌清及其代谢产物的残留分析。实验结果表明,该方法对百菌清的检出限(IC20)为0.012 3μg/L,回收率为87%~92%;对其代谢产物的检出限(IC20)为0.019 5μg/L,回收率为105%~111%;总残留量的检测回收率为85%~107%。对百菌清的结构类似物交叉反应率均小于0.01%。ELISA方法的测定结果与高效液相色谱法的测定结果有良好的一致性。建立的方法适合于蔬菜中百菌清和羟基百菌清总残留量的测定。     

偶氮胂Ⅲ—Ba(Ⅱ)共振散射光谱法测定人血清蛋白

在pH 3.0~3.8的BR缓冲溶液中,偶氮胂Ⅲ-Ba(Ⅱ)与蛋白质结合形成复合物,导致体系的共振散射信号增强,据此建立了蛋白质测定的共振散射光谱法。结果表明,在优化的实验条件下,牛血清白蛋白(BSA)的线性范围为0~1.0 mg/L,检出限为21.4μg/L;将该法用于人血清中蛋白质的测定,与医院测定结果基本一致;方法的批内精密度为2.8%(n=6),批间精密度为3.5%(n=6),回收率为96.0%~100.0%。     

固相萃取/高效液相色谱-串联质谱法测定水中百草枯与敌草快残留

建立了水中百草枯和敌草快的固相萃取/高效液相色谱-串联质谱测定方法。样品直接经Cleanert PWCX小柱富集净化,HILIC亲水型液相色谱柱分离,5 mmol/L乙酸铵用(用甲酸调至pH 3.7)-乙腈梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子模式采集,选择性反应监测模式下检测,外标法定量。结果表明,百草枯和敌草快分别在10.0~200.0μg/L和1.0~200.0μg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数(r2)均不小于0.997,在30~200μg/L的加标水平下,百草枯和敌草快的平均回收率分别为96.8%~125.8%和97.2%~118.2%,批内相对标准偏差(RSD)分别为3.0%~6.3%和2.9%~6.0%;批间RSD分别为3.3%~8.2%和2.7%~7.9%。以3倍信噪比计算,百草枯和敌草快的方法检出限分别为5.0μg/L和0.3μg/L;以10倍信噪比计算,方法的定量下限分别为10.0μg/L和1.0μg/L。该方法简便、快速、灵敏,方法的线性范围、回收率、精密度和检出限均符合残留分析的要求,能满足水中百草枯、敌草快残留监控的要求。     

高效液相色谱法测定强化食品中维生素C的含量

建立了强化食品(饮料、奶粉、含乳饮料、大米、果泥及果冻)中维生素C含量的高效液相色谱检测方法。优化了样品处理方法,在水浴控温和避光条件下处理样品,避免维生素C被氧化。选用Tech Mate C18–ST(250 mm×4.6 mm,5μm)反相色谱柱,以0.05 mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液(p H 3)为流动相,流量为1.0m L/min,检测器为光电二极管阵列检测器,检测波长为266 nm。线性范围为0.2~100μg/m L,相关系数为0.999 6,果泥中维生素C的定量限为20 mg/kg,其它为100 mg/kg,加标回收率为82.2%~107%,测定结果的相对标准偏差为1.23%~6.86%(n=8)。该方法简单快速,其灵敏度、准确度和精密度均能满足强化食品中维生素C的检测要求。     

在线凝胶渗透色谱-二维气相色谱/质谱法测定鲫鱼样品中的14种农药残留

建立了在线凝胶渗透色谱-二维气相色谱/质谱(GPC-MDGC/MS)测定鲫鱼样品中14种农药残留的方法。样品用环己烷/乙酸乙酯(1：1,v/v)提取两次,合并提取液。提取液冷冻、过膜后,经在线凝胶渗透色谱净化后直接进行MDGC/MS分析,通过中心切割的方式将农药组分选择性切割进入二维色谱柱进行进一步分离分析,采用内标法进行定量。实验结果表明：14种农药在0.01~0.9 mg/L范围内具有较好的线性关系,相关系数均大于0.99。14种农药在3个添加水平(0.01、0.05、0.1 mg/kg)的加标回收率为83.0%~112.9%,相对标准偏差为3.2%~12.0%。该方法前处理简单,实现了在线GPC和MDGC的有效结合,准确度好、精密度高,具有很好的推广性。