大鼠海马发育过程中CRMPs家族mRNA的表达

目的:探讨大鼠海马发育过程中坍塌反应调节蛋白(CRMPs)家族mRNA的表达规律.方法:用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段CRMPs家族mRNA的表达.结果:RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合.内参照β-actin电泳条带在发育各时期灰度无明显差异.CRMP-1 mRNA以新生鼠和幼年鼠表达最多,成年大鼠弱表达(P<0.05).CRMP-2从胚胎鼠至幼年鼠呈现逐渐增加的趋势,成年鼠相对较低(P<0.05).CRMP-3以幼鼠和成年大鼠表达较多,其中幼鼠表达最多(P<0.05),新生鼠表达最少(P<0.05).CRMP-4在胎鼠、新生鼠和幼年鼠表达量接近,成年鼠表达相对较低(P<0.05).CRMP-5在各个阶段均呈较高表达,以新生鼠和成年鼠表达较多,其中成年大鼠表达最多(P<0.05),胎鼠表达最弱(P<0.05).结论:从胚胎期至幼年期,CRMPs家族除CRMP-4稳定于高表达水平外,其余成员表达量均逐渐增多,其中CRMP-3和CRMP-5区别于其他成员,在成年期表达量继续增高.     

HO-1蛋白在大鼠海马神经元中的发育

通过免疫组化及流式细胞仪计数等方法,观察生后P0～P300大鼠海马中血红素氧化酶-1蛋白阳性细胞的形态、数量与比例变化,研究血红素氧化酶-1蛋白在大鼠海马中的发育表达．结果表明：血红素氧化酶-1蛋白阳性细胞高峰出现在P14～P21之间,包括海马CA1,CA2 CA3,DG区,P0,P7,P30,P90 P300血红素氧化酶-1蛋白逐渐减弱．结果提示：血红素氧化酶-1在大鼠海马发育过程中的表达,可能受到海马特殊区域中不同类型细胞的调节．     

大鼠海马发育过程中突触蛋白-Ⅰ和生长相关蛋白-43 mRNA的表达

目的:探讨大鼠海马突触蛋白和生长相关蛋白-43 mRNA的表达,了解神经元的发育。方法:采用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段突触蛋白和生长相关蛋白-43 mRNA量的变化。结果:RT-PCR产物电泳后在731 bp、984 bp、324 bp处出现清晰的电泳条带,实际扩增长度与设计长度相吻合,未出现与DNA相同的杂带。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在孕期、新生和成年时亮度均一。突触蛋白的PCR产物电泳条带以成年大鼠表达最强,胎鼠次之,新生大鼠较弱。生长相关蛋白-43的PCR产物电泳条带以新生鼠亮度最强,胎鼠次之,成年大鼠最暗。结论:大鼠海马在新生期处在轴突生长旺盛的时期,而在胚胎期和成年期是突触形成和建立的主要阶段。     

Rho激酶对大鼠海马神经元骨架相关蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨Rho激酶对大鼠海马神经元突起生长和骨架相关蛋白mRNA表达的影响.方法:用Rho激酶的抑制剂Y-27632和激动剂溶血磷脂酸(LPA)干预海马神经元,观察突起的生长并用RT-PCR检测大鼠海马神经元神经丝结合蛋白(Dbn1)、微丝肌动蛋白(F-actin)、微管相关蛋白(Tau)、α-微管蛋白(α-tubulin) mRNA的表达.结果:用LPA干预2 h后突起从远端逐渐退缩,长度缩短,细小突起退缩明显;Y-27632干预2 h后细胞胞体和突起的远侧端新生出细小突起.RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合.内参照β-actin电泳条带在不同分组灰度较均一,呈高表达.Dbn1呈较高水平表达,激动剂LPA组表达下降(P<0.05),抑制剂Y-27632组表达量增多(P<0.05);F-actin和Tau表达呈低水平,激动剂作用后均使表达量相应的减少(P<0.05),抑制剂组表达增多(P<0.05);α-tubulin表达量最高,激动剂组表达量出现明显下降(P<0.05),抑制剂组表达增加(P<0.05).结论:激活Rho激酶下调Dbn、F-actin、Tau、α-tubulin mRNA的表达并诱导突起缩短,抑制则增加其表达并促进突起生长.     

慢性不完全性睡眠剥夺大鼠对海马、前脑皮质NG及血清TGF-β1表达的影响

为探讨慢性疲劳大鼠睡眠剥夺后对血清转化生长因子(TGF-β1)、海马、前脑皮质NG含量的影响,采用负重力竭游泳法制备CFS大鼠模型,用小平台水环境法剥夺睡眠12 h,连续应激21 d后,Morris水迷宫测量大鼠学习记忆能力,ELISA检测血清TGF-β1的含量,Western blot法检测海马、前脑皮质NG含量,LDH释放法检测脾脏NK细胞活性。结果表明:与对照组相比,睡眠剥夺组,Morris水迷空间搜索实验,总路程、平均速度显著提高(P0.05),经过平台次数降低(P0.05);血清TGF-β1和海马NG含量升高(P0.05);前脑皮质NG含量降低(P0.05);脾脏NK细胞活性降低(P0.05)。说明TGF-β1抑制NK细胞活性使机体免疫功能低下可能是CFS发生的重要病理机制之一。     

大鼠急性心肌缺血死亡后心肌HIF-1α、Egr-1 mRNA的表达

目的研究大鼠心肌缺血死亡后不同时间点HIF-1α及Egr-1mRNA的表达规律，为因急性心肌缺血死亡的法医学诊断提供客观依据。方法建立SD大鼠急性心肌缺血模型。随机将大鼠分为正常对照组、假手术组、急性心肌缺血试验组。采用免疫组织化学、RT—PCR死亡不同时间点大鼠心肌点HIF-1α及Egr-1mRNA的表达规律。结果大鼠心肌结扎1h缺血心肌中HIF-1α及Egr-1mRNA明显表达，随着死后时间的延长，表达降低，至术后96h仍可测到；正常对照组与假手术组均未测到HIF—1α及Egr-1mRNA表达。结论HIF—1α及Egr-1mRNA可作为诊断因急性心肌缺血死亡的敏感指标。     

联合应用生长激素和谷氨酰胺对短肠大鼠小肠粘膜IGF-1 mRNA表达的影响

选用 4 0只手术成功的SD短肠大鼠 ,按 2× 2析因实验设计随机分为 4组 ,分别给予常规全肠外营养 (TPN组 ,n =10 )、附加谷氨酰胺 (TPN +Gln组 ,n =10 )、附加生长激素 (TPN +GH组 ,n =10 )及附加谷氨酰胺和生长激素全肠外营养 (TPN +Gln +GH组 ,n =10 ) ,持续 6天 ,取 8只正常大鼠模拟手术后第 1天处死 ,作为基础对照组 (n =8)。应用放免分析法检测血生长激素和血IGF 1的水平 ,Northernblot方法检测残留小肠粘膜IGF 1mRNA表达。探讨了联合应用生长激素和谷氨酰胺防止小肠粘膜萎缩的可能分子机制。结果表明 ,GH组和GG组血浆GH和IGF 1水平较TPN和TPN +Gln组明显增高 (P <0 .0 1) ;TPN组小肠粘膜组织IGF 1mRNA表达明显低于对照组 (P <0 .0 1) ,TPN+Gln组和TPN +GH组小肠粘膜IGF 1mRNA的表达较TPN组明显增高 ;TPN +Gln +GH组小肠粘膜组织IGF 1mR NA的表达水平提高显著 ,高于TPN +GH组和TPN +Gln组 (P <0 .0 1)。这说明 ,生长激素和谷氨酰胺的联合应用可能通过上调小肠粘膜细胞IGF 1mRNA的表达 ,增加IGF 1的自分泌和旁分泌 ,发挥其促进细胞分裂增殖和抑制细胞凋亡作用 ,从而防止小肠粘膜萎缩的发生。     

大鼠脑损伤后海马GAP-43 mRNA水平的变化

以DIG（Digoxigenin）标记的GAP-43 cDNA片段为探针,使用原位杂交方法,检测了大鼠皮层硬性脑挫伤后GAP-43 mRNA水平的变化。结果表明：海马CA3、CA1和DG区的GAP-43 mRNA水平在损伤后48h明显升高,其中CA3区变化最甚,而且伤侧比对侧显著。1周和2周后表达仍维持较高水平,但不如48h的高,这显示表达的峰值在1周之内。上述结果为研究脑损伤后生理及机能代偿的修复机制提供了有意义的信息。     

脉冲磁场对应激大鼠海马神经干细胞增殖的影响

建立大鼠束缚应激模型及脉冲磁场环境，观察应激大鼠在脉冲磁场环境中海马神经千细胞数及增殖变化．实验设对照、应激、磁场、应激磁场4个组，应用免疫组织化学法观察和计算各组海马巢蛋白（Nestin）和溴化脱氧核糖尿嘧啶（BrdU）的阳性细胞数．研究结果显示，Nestin在各组海马CA1和CA2区表达，BrdU在海马齿状回表达．实验各组Nestin和BrdU的阳性细胞比对照组明显增加，应激磁场组增加更显著，而磁场组和应激磁场组则无明显差异．这表明应激能引起大鼠海马神经千细胞内源性增殖，脉冲磁场能显著提高应激大鼠海马神经千细胞的增殖反应，提示在应激脑损伤的基础上，脉冲磁场作为外源性物理因素能刺激神经千细胞增殖，并可能修复受损神经元。     

大鼠海马锥体神经元外向电流特征分析

利用全细胞膜片钳技术研究了大鼠海马锥体神经元去极化激活的外向电流的特征.结果表明,短时去极化至-60mV以上电位可引发快速上升的外向电流,之后缓慢衰减至一平台.当保持电位改变时,该峰电流与平台电流的幅度均会发生变化,但前者较后者变化显著.试验中测得峰电流与平台电流的逆转电位分别为-(76.1±5.97)mV和-(83.6±4.13)mV,与用Nerst方程计算出的本试验细胞外液与电极内液的钾离子平衡电位Ek=-88mV接近,说明该外向电流是钾电流,且提示此外向电流包括两种成分.试验结果还表明,此外向电流的衰减过程可用双指数方程很好地拟合,而在500ms预脉冲刺激后再经去极化激活的快成分的失活过程则适合用单指数方程进行拟合,从而进一步证实大鼠海马锥体神经元的外向钾电流包括快慢两种成分(IA和IK).IA的稳态激活和失活过程均可用Boltzmann方程进行拟合,半数激活和半数失活电压分别为(7.40±3.01)mV和-(66.27±3.62)mV,但其稳态失活在测试电压范围内(-100mV至+30mV)不完全.     

IGF-1对绵羊皮肤中GHR、IGF-1、IGF-1R、kAP3.2和KAP6-1基因表达的影响

选取36只健康、体况一致的新疆细毛羊随机分成6组。在每只羊的左侧肩胛部皮下局部注射0．5mL（10ng／mL）的IGF-1,右侧肩胛部皮肤为未注射IGF-1的对照组,然后分别于第0、3、6、9、12、50d采集各皮肤样品,用反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）方法,定量分析绵羊皮肤中生长激素受体（GHR）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子1型受体（IGF-1R）、角蛋白关联蛋白KAP3．2和KAP6-1mRNA的相对丰度。试验结果表明,IGF-1对GHR基因的表达有下调的作用,对IGF-1、IGF-1R基因的表达没有显著的影响,而对KAP3．2、KAP6—1基因的表达具有显著的促进作用。说明IGF-1促进绵羊角蛋白关联蛋白基因的表达可能是通过生长轴以外的其他途径实现的。     

哺乳藏猪肠道CAT1、EAAC1和Pept1 mRNA的发育性表达分析

选取体重接近且健康的哺乳藏猪30头,其中1、7、14、21和28日龄各6头,运用实时定量PCR对Pept1、EAAC1、CAT1 mRNA表达的发育性变化进行研究。结果表明,在十二指肠中藏猪CAT1、Pept1 mRNA表达的发育性变化相似,14日龄时表达丰度最高;EAAC1、CAT1 mRNA在空肠中表达的发育性变化相似,CAT1在21日龄达到最高点,但与其他日龄相比差异不显著;回肠中Pept1与EAAC1 mRNA表达丰度具有相似的发育性变化,7日龄回肠Pept1 mRNA表达量最高,显著高于其他各发育阶段(P0.05)。     

Calcium signalling in the guidance of nerve growth by netrin-1

Pathfinding by growing axons in the developing nervous system is guided by diffusible or bound factors that attract or repel the axonal growth cone. The cytoplasmic signalling mechanisms that trigger the responses of the growth cone to guidance factors are mostly unknown. Previous studies have shown that the level and temporal patterns of cytoplasmic Ca2+ can regulate the rate of growth-cone extension in vitro and in vivo. Here we report that Ca2+ also mediates the turning behaviour of the growth cones of cultured Xenopus neurons that are induced by an extracellular gradient of netrin-1, an established diffusible guidance factor in vivo. The netrin-1-induced turning response depends on Ca2+ influx through plasma membrane Ca2+ channels, as well as Ca2+-induced Ca2+ release from cytoplasmic stores. Reduction of Ca2+ signals by blocking either of these two Ca2+ sources converted the netrin-1-induced response from attraction to repulsion. Activation of Ca2+-induced Ca2+ release from internal stores with a gradient of ryanodine in the absence of netrin-1 was sufficient to trigger either attractive or repulsive responses, depending on the ryanodine concentration used. These results support the model that cytoplasmic Ca2+ signals mediate growth-cone guidance by netrin-1, and different patterns of Ca2+ elevation trigger attractive and repulsive turning responses.     

大肠癌中MTA1和nm23 - H1蛋白的表达及其意义

目的：探讨大肠癌中MTA1、nm23-H1蛋白的表达及其意义。方法：用免疫组化留法检测84例大肠癌MTA1、nm23-H1蛋白的表达。结果：84例大肠癌中MTA1、nm23-H1阳性表达率分别为61．9％和51．2％;MTA1高表达与大肠癌组织分化程度、Duke’s分期和淋巴结转移关系密切（P〈0．05）;nm23-H1低表达与大肠癌组织分化程度、Duke’s分期和淋巴结转移关系密切（P〈0．05）;大肠癌中MTA1和nm23-H1蛋白表达呈负相关（P〈0．05）。结论：MTA1和nm23-H1蛋白表达与大肠癌分化程度、淋巴结转移和预后密切相关,可作为判断大肠癌患者转移复发的参考指标。     

内质网膜蛋白STIM1内质网内片段的重组表达与纯化结晶

将位于内质网内的STIMI的N端片段,包括EF手性区域和SAM结构域,分别标记上N端和C端6＊His标签,在大肠杆菌中重组表达,经过亲和层析和凝胶过滤层析的纯化,得到了大量、纯净的重组STIMIN端蛋白,通过悬滴气相扩散法得到了一些三维梭状晶体．     

C-erbB-2、MMP-1、MMP-2、MMP-7和MTA1在哈萨克族食管癌中的表达及其临床意义

通过观察C-erbB-2、MMP-1、MMP-2、MMP-7和MTA1 5个基因在哈萨克族食管癌组织中的表达,探讨其侵袭转移相关因子在新疆哈萨克族食管癌组织的表达和临床意义.采用RT-PCR方法检测75例哈萨克族食管癌标本中这5个基因的mRNA表达水平,分析它们与临床病理特征的关系.结果显示,5个基因在哈萨克族食管癌组织中表达较正常组织增高,达到差异显著(P<0.05);MMp-2、MMP-7、MTA1基因的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),MMP-1、MMP-7基因的表达与临床分期正相关(P<0.05):C-erbB-2与MTA1、MMP-2与MTA1、MMP-7与MTA1、MMP-7与MMP-1、MMP-1与MTA1基因的表达差异高度一致(P<0.01).由此得出,这5个基因表达上调在哈萨克族食管癌的发生发展过程中协同发挥作用;MMP-2、MMP-7、MTA1可能是哈萨克族食管癌发生侵袭、转移的主导因素.