根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的百脉根(Lotus corniculatus L.)的转化

本文报道一个简单有效的豆科植物转化再生实验系统。百脉根(品种:里澳)子叶外植体,被含非致瘤性Ti质粒载体的根癌农杆菌感染。该载体带有一个嵌合的npf-Ⅱ基因和一个胭脂碱合成酶基因。在合卡那霉素的选择培养基上,有40％的外植体在3周内出芽。长大的芽可在生根培养基上生根并移栽成活,开花结实。从一个切块得到了16个抗性再生植株。对再生植株的胭脂碱检测、NPT-Ⅱ活性检测及DNA分子杂交实验及种子后代的胭脂碱检测结果表明,外源基因整合到百脉根基因组上,获得表达并能通过有性生殖过程传递。     

致瘤农杆菌能够转化大麦和小麦

直到现在,单子叶植物特别是禾谷类作物的基因工程还没有合适的载体系统。本文首次报道了致瘤农杆菌T37,A208和B63个菌种能够感染大麦和小麦的部分品种,形成突起和肿瘤。并且发现,酚类化合物乙酰丁香酮对转化有促进作用。另外,在合适的植物组织接种农杆菌也是转化成功的关键。文中讨论了农杆菌的宿主范围以及Ti质粒作为禾谷类作物基因工程载体的可能性。     

玉米醇溶蛋白基因Z_4在双子叶植物龙葵(Solanum nigrum)中的表达

本文将含有玉米醇溶蛋白基因Z_4的玉米基因组克隆插入Ti质粒pTiT_(37)的T-DNA区。用带有此质粒的根癌农杆菌感染龙葵,得到了能合成胭脂碱的转化愈伤组织和转化植株。DNA分子杂交和RNA点杂交表明,Z_4基因确实转化并整合进了龙葵的核基因组,并且被转录成mRNA。但在转化体中,没能检测出玉米醇溶蛋白。实验证明,单子叶植物基因的启动子能够在双子叶植物中发挥功能。文中讨论了Z_4基因在双子叶转化植物的种子中受发育调节的可能性。     

用于转化玉米的增效载体的鉴定及PEG介导的转化方法研究

本文用类质粒S-1构建了专门用于转化玉米的遗传工程载体pBIS5,通过PEG介导的转化方法,对玉米自交系BMS细胞的原生质体进行转化,转化频率比对照提高一倍,具有明显的增效作用。对PEG介导的转化方法进行了研究,发现PEG的浓度以6—10％(W/V)较好;PEG处理时间以30 min为最好,而DNA浓度则以40μg/ml为最好。上述参数配合特定的实验系统可以获得令人满意的转化效果。     

应用农杆菌Ti质粒系统将外源基因转入籼稻细胞研究

本文证明经复合酚类化合物预处理的菌株与籼稻培养细胞在普通培养液。特别是在复合诱导培养液(培养过番茄下胚轴切段、胡萝卜细胞及农杆菌的培养滤液)中共培养时,均可发现有较多的细菌附着于水稻细胞表面,并且菌体周围有纤维丝的形成。在复合处理组中,位于pGV3850::1103neo嵌合质粒T-DNA上的NPT Ⅱ基因及NOS基因在籼稻培养细胞中获得了转移与表达。Southern blot分析证明了外源基因整合到受体细胞的基因组中。     

诱导根癌农杆菌vir区基因表达水稻代谢物的分离,鉴定和生物活性研究

从孕穗期至开花期水稻(oryza sative L. cv. lndia IR 72)的茎叶提取液中, 筛选并分离出二种能高效诱导根癌农杆菌(Agrobacterium tumfaciens) vir 区基因表达的信号分子,这两种信号分子的化学结构分别是5,7,4'-三羟基-3'-5'-二甲氧基黄酮和5,4'-二羟基-3',5'-二甲氧基-7-β-D-葡萄糖氧基黄酮.     

芸苔属作物Ri T-DNA转化根对根肿菌(plasmodiophora brassicae)的侵染反应

通过发根农杆菌的转化作用,在甘蓝、油菜和花椰菜幼苗的下胚轴切段上诱发产生了许多Ri T-DNA转化根.用根肿菌休眠孢子悬浮液接种转化根,分别在固体、液体和半固体MS培养基上培养. 在固体培养基上,根肿菌只侵入根毛内,不侵入根皮层组织,因而不表现根肿病的任何症状.在液体培养基内,根肿菌侵入根皮层,导致根皮层组织异常的增生和膨大,直至形成肿根症状.在半固体培养基内,根肿菌侵入根段切口处的细胞内,并很快使切口处膨大起来.     

我国高效杀蚊球形芽孢杆菌BS10的43kd毒素蛋白基因的定位

从国内高效杀蚊球形芽孢杆菌BS10的质粒pFWI,克隆杀蚊毒素基因的～1.4kb Hind Ⅲ DNA片段,在大肠杆菌表达杀蚊幼虫活性的43kd毒素蛋白,首次为球形芽孢杆菌杀蚊毒素基因定位在质粒上提供了直接证据。通过Southern blot和Western blot对10株BS无杀蚊活性菌株进行分析,揭示出无毒株为杀蚊毒素基因缺失突变株,这是从基因及蛋白质水平对杀蚊和不杀蚊球形芽孢杆菌的区别的首次报道。本文得到的pFL109克隆可作为探针区分杀蚊和不杀蚊球形芽孢杆菌,具有应用价值。     

枸杞润肤霜中两种酚酸类成分的高效液相色谱检测及质谱确证

建立了自制枸杞润肤霜中绿原酸和咖啡酸的高效液相色谱分析及液相色谱-串联质谱确证方法。枸杞润肤霜样品经甲醇超声提取,提取液离心处理后,取上清液经微孔滤膜过滤后测定。采用Aglient HC-C18色谱柱(250×4.6mm,5μm)分离,以甲醇-0.5%乙酸水溶液(27∶73,V/V)为流动相,等度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长327nm。绿原酸、咖啡酸分别在3.3~250μg/mL、3~225μg/mL间线性关系良好(r=0.9993);平均加标回收率分别为98.28%、99.26%,相对标准偏差(RSD)均为1.93%。自制枸杞润肤霜中绿原酸、咖啡酸含量分别为0.0398 mg/g、0.0323mg/g。该方法快速、准确,适用于同时测定枸杞润肤霜中绿原酸、咖啡酸的含量。     

Ti^Ⅳ取代的Keggin型钨磷酸盐的合成及状态转化研究

以钛酸异丙酯为Ti源,在不同酸度条件下合成了一钛取代的钨磷多金属氧酸盐.用IR、元素分析、31P NMR对样品的结构进行了表征,并对样品的存在状态以及各状态间的相互转化进行了研究.结果表明,合成体系的酸度强烈影响着产物的状态,低酸度条件下得到的产物为一钛取代物的质子化单体,而高酸度条件下得到的产物则为质子化单体和其二聚体的混合物.二聚体和单体在酸、碱条件下可以相互转化,溶液的浓度以及溶液的久置也会导致单体、二聚体间发生转化.     

动物组织中粘杆菌素、杆菌肽及维吉尼霉素残留量的液相色谱-串联质谱检测

建立了动物组织(肌肉、肝脏、肾脏)中粘杆菌素、杆菌肽和维吉尼霉素等多肽类抗生素残留量的检测方法.样品经甲醇-0.1%甲酸提取,Oasis HLB固相萃取柱净化后,利用液相色谱-串联质谱进行定性、定量分析.3种多肽类抗生素的检出限分别为粘杆菌素25 μg/kg,杆菌肽50 μg/kg,维吉尼霉素20 μg/kg;平均回收率分别为粘杆菌素89% ～98%,杆菌肽90% ～99%,维吉尼霉素92% ～100%;相对标准偏差为1.91% ～9.81%.方法具有快速简便、准确度和灵敏度高、重复性好等特点,适于动物组织中多肽类抗生素的测定.方法的技术指标满足国内外对多肽类抗生素残留量检测的要求.     

荧光假单胞杆菌胞外蛋白酶的纯化及热稳定性

从原料乳中分离获得一株荧光假单胞菌Rm12, 该菌株分泌的胞外蛋白酶具有很强的耐热性, 其发酵上清液经过硫酸铵沉淀、阴离子层析、疏水层析和分子排阻层析纯化得到SDS-PAGE均一蛋白酶, 经鉴定确认该酶是一种新的金属蛋白酶, 命名为Ht12, 对Ht12的基本特性和热稳定性进行了研究. 结果表明, 此蛋白酶分子量为45000, 含有较高的脯氨酸和二硫键, N末端氨基酸残基序列为MSKVKDKAIVSAAQAS, Mn2+对蛋白酶活力有促进作用. 该蛋白酶具有较高的热稳定性, 于160 ℃加热20 s, 保留活力3.8%.     

鲍曼不动杆菌LpxC的同源模建及分子对接

鲍曼不动杆菌已成为最普遍的医院致病菌,且耐药情况严峻.LpxC作为新抗菌药物靶点被大量研究,但鲍曼不动杆菌LpxC晶体尚未解析得到,基于其结构的药物设计等工作无法开展.以铜绿假单胞菌LpxC晶体结构为模板,通过同源模建方法获得鲍曼不动杆菌LpxC结构模型.较好的Ramachandran plot分布和Profile-3D结果验证了模型的合理性.用分子动力学模拟优化鲍曼不动杆菌LpxC模型,修补部分不合理构象.后续分子对接结果显示S构型的苄氧乙酰基羟肟酸类抑制剂比R构型分子能更有效地结合在F191,H237和K238组成的较浅口袋中,这可能是S构型抑制剂活性更高的主要因素,模拟结果与实验数据吻合较好.     

多方法组合分析脲诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶去折叠和重折叠过程的构象转化

以变性和非变性电泳、体积排阻色谱、内源荧光发射光谱、荧光相图、荧光猝灭以及活性测定等组合分析方法,研究了脲诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子的去折叠和重折叠过程。结果表明,在脲诱导的芽孢杆菌α-淀粉酶分子的去折叠和重折叠过程中,芽孢杆菌α-淀粉酶分子始终以单分子形式存在,不会形成分子间的聚集体或聚集体沉淀。当变性液或复性液中脲浓度约为4.0mol/L时,芽孢杆菌α-淀粉酶分子的去折叠和重折叠过程中均出现一个部分折叠中间体,两个过程均符合"三态模型"。脲诱导的芽孢杆菌α-淀粉酶分子重折叠过程的复性曲线几乎与芽孢杆菌α-淀粉酶分子去折叠过程的残余活性率曲线重合。通过这些结果,并结合盐酸胍诱导的芽孢杆菌α-淀粉酶分子的去折叠和重折叠过程,推断脲和盐酸胍诱导的芽孢杆菌α-淀粉酶分子的去折叠和重折叠过程分别是相互可逆的。     

氧化亚铁硫杆菌的生长条件及低pH值高铁离子驯化的研究

从云南某硫化矿酸性废水中分离出一株氧化亚铁硫杆菌,研究结果表明,最佳培养温度为30℃左右,最佳生长pH为2.0~2.5,最佳生长初始Fe2 浓度为0.15mol/L左右,在进行细菌培养时接种量取10%比较恰当。低pH值和高浓度Fe2 驯化后,在培养温度30℃、初始pH值1.5、初始Fe2 浓度25g/L条件下,氧化亚铁硫杆菌仍能保持一定的Fe2 氧化活性,6天Fe2 氧化率可达82.28%,Fe2 平均氧化速率达3.43g/L/d,pH值的变化是先上升后下降,最后稳定在1.81。     

微塑料介导重金属在陆生植物中迁移及生物效应的影响

随着地膜在现代化农业中的广泛应用,微塑料在土壤中的残留问题日益严重。环境中释放的微塑料可能会与先前存在的重金属相互作用,导致生物效应(生物积累/毒性),并对人类健康和农产品安全构成威胁。目前,大多数研究集中于单一影响因素在土壤系统中的暴露和转化分析,有关微塑料和共存金属对环境联合影响的相当有限。本文综述了微塑料与重金属来源、相互作用机理与影响因素的研究现状,阐述了陆生植物对二者联合污染的生理响应。此外,未来的研究还应重点探讨微塑料与重金属共同在植物上暴露的具体分子机制、通过食物链对人类健康的影响、与其他混合污染物联合作用及微塑料老化过程对重金属迁移动态变化过程的影响。     

不同碳源下粪产碱杆菌的生长代谢及碳氮比对其反硝化能力的影响

近年来,地下水中硝酸盐的污染日益严重,饮用水中高浓度的硝酸盐或亚硝酸盐会对人类健康产生极大的威胁,而作为目前研究较多的异养微生物之一,粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)不仅能降解苯酚、苯胺等多种有机质[1,2],还具有反硝化能力。碳源种类及碳氮比是影响微生物生长和反硝化的两个重要因素。本文以粪产碱杆菌为实验菌种,选择柠檬酸三钠等5种不同碳源,观察其生长情况,进而在不同碳氮比条件下,以亚硝酸根为底物,研究了粪产碱杆菌的反硝化能力。结果表明,粪产碱杆菌可在乳酸钠、乙酸钠和柠檬酸三钠中快速生长,但在葡萄糖和低浓度甲醇中生长缓慢,即不能利用这两种物质作为其生长的碳源;粪产碱杆菌可以利用亚硝酸根作为其反硝化反应的底物,将其还原为低价态的氮氧化物或者氮气;不同碳氮比条件下,粪产碱杆菌反硝化的反应速率不同。     

黄色短杆菌中L-异亮氨酸同位素丰度及分布的分析方法研究

随着代谢组学、蛋白质组学等生命科学领域的迅猛发展,稳定同位素标记试剂,尤其是标记氨基酸,因无放射性、与非标记化合物理化性质一致等优势得到广泛应用。该文建立了一种稳健、快速的氨基酸同位素丰度分析方法。方法采用Hypersil Gold Vanquish(100 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,以水和含0.1%甲酸的甲醇为流动相,正离子模式下进行液相色谱-高分辨质谱联用(LC-HRMS)分析;测得细菌发酵液中L-异亮氨酸-¹⁵N的同位素丰度为98.58%,相对标准偏差为0.03%,可应用于不同稳定同位素(¹⁵N或¹³C)示踪的黄色短杆菌中L-异亮氨酸同位素丰度及分布的准确测定。该方法具有简便、灵敏、稳健等优点,有望在合成生物学、同位素示踪代谢流等研究中发挥重要作用。