一种快速检测弗氏柠檬酸杆菌免疫层析试纸条的研制

为了制备弗氏柠檬酸杆菌快速检测试纸条,联合卵黄抗体技术和胶体金免疫层析技术,采用弗氏柠檬酸杆菌抗原免疫母鸡,制备抗弗氏柠檬酸杆菌卵黄抗体(IgY);采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用以标记IgY;在结合垫上包被用胶体金标记的IgY,硝酸纤维膜上包被弗氏柠檬酸杆菌抗原和羊抗鸡IgY作为检测线和质控线;将样品垫、金标结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫组装成试纸条,测试其灵敏度、特异性、稳定性,并与ELISA结果进行比较.结果表明:该试纸条检测线为105 cfu?mL~(-1);试纸条与恶臭假单胞菌、铜绿假单胞菌、迟钝爱德华菌、哈维氏弧菌和溶藻弧菌均无交叉反应;该试纸条在4℃保存4个月后依然十分稳定;具有易操作,特异性、灵敏度高,不需要专业的操作人员和特殊的仪器设备,5～10 min即可获得结果等优势,适合弗氏柠檬酸杆菌的现场检测.     

抗迟钝爱德华氏菌卵黄抗体制备及其抑菌、吞噬调理活性分析

迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是常见人畜共患病病原.为获得高效抗E.tarda卵黄抗体(Immunoglobulin of Yolk,IgY),将纯培养的迟钝爱德华氏菌灭活,免疫蛋鸡,由蛋黄纯化IgY,用间接ELISA法检测IgY效价.对制备的IgY进行了抑菌活性检测和动物保护实验:分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(2×10~3 CFU·mL~(-1))孵育,涂平板,菌落计数;分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(2×108 CFU·mL~(-1))等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),记录各组成活率.检测抗E.tarda IgY的吞噬调理活性:分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(103 CFU·mL~(-1))及小鼠血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果发现:制备的IgY质量浓度为8.8 mg·mL~(-1),每个鸡蛋可以获得IgY约130 mg,效价为1:10 240;体外相对抑菌率为86.6%;对克氏原螯虾的平均保护率为66.7%;能促进细胞吞噬E.tarda,相对吞噬率为79.8%.     

鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼免疫效果

为建立一种环境友好型防治黄颡鱼鮰爱德华氏菌病的方法,利用从患病黄颡鱼脑部组织分离出的致病菌株JXHS制备黄颡鱼鮰爱德华氏菌的灭活疫苗。以平均体重为15~20g的健康黄颡鱼为实验对象,免疫组腹腔注射0.2mL浓度为3.0×109 CFU·mL-1的免疫原,对照组注射等量0.65%灭菌生理盐水,分别在注射7、14、21、28d后随机从两组各取30尾实验鱼,尾静脉采血,检测免疫鱼的血清凝集抗体效价、白细胞吞噬活性(PP)、吞噬指数(PI)、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)等免疫指标的变化。结果表明:鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清凝集抗体效价在免疫14、21和28d显著升高;PP、PI和LSZ在所有采样时间点均显著上升;LSZ在免疫7、14、21和28d均显著上升;AKP在免疫14、21和28d活力显著上升;ACP在免疫7、14和21d活力显著上升。血清凝集抗体效价、PP、PI、LSZ和AKP均在21d达到峰值,而ACP在免疫7d后达到峰值。免疫30d后鮰爱德华氏菌攻毒结果表明,鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼有较高的免疫保护作用,免疫保护率达到70.2%。由此可见,利用从病鱼体内分离的鮰爱德华氏菌菌株制备的灭活疫苗可提高黄颡鱼的免疫力并有效抵御鮰爱德华氏菌的攻击。     

中华鳖肺炎克雷伯氏菌病的病原研究

从患病中华鳖血液,肝脏,腹水,肌肉中共分离到2株细菌,腹腔注射感染试验均出现与自然发病相似的症状,死亡率为100%,此2株细菌的形态特征及生理生化反应完全一致;革兰氏阴性杆菌,无鞭毛,不运动,兼性厌氧,发酵葡萄糖产酸产气,过氧化氢酶,七叶苷,VP,赖氨酸脱羧酶,ONPG反应,膛酶均为阳性,发酵肌醇,甘露醇,蔗溏,阿拉伯糖,乳糖,麦芽糖,草糖,鼠李糖,蜜二糖,木糖,棉子糖,纤维二糖产酸,氧化酶,精氨酸双水解酶,吲哚,鸟氨酸脱羧酶,苯内氨酸脱氨酶,明胶酶,H2S均为阴性,能还原硝酸盐等,其形态特征及生理生化反应同肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种基本相同,故鉴定为肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种,该菌对先锋霉素VI、复达欣、头孢呋肟、菌必治等药物高度敏感。     

以TGase催化交联鱼皮明胶为壁材制备罗伊氏乳杆菌微胶囊工艺

通过谷氨酰胺转氨酶（Transglutaminase, TGase）对鱼皮明胶进行交联改性,交联度为15.45%,乳化性为64.25 m2/g,起泡性为140.00%,提高了其成膜性能。采用复配麦芽糊精等壁材制备罗伊氏乳杆菌NCUF 203.1的微胶囊,并通过单因素和响应面试验对微胶囊制备工艺进行优化。结果表明,最佳喷雾干燥制备微胶囊的工艺参数为进风温度117℃,进料流量7.8 m·min-1,菌壁比0.5。在此条件下,测得活菌数为8.57 log CFU/g,此工艺方法为罗伊氏乳杆菌微胶囊的生产提供了一种新型的低成本、高活性产品的技术方案。     

酸性矿坑水中一株兼性菌及其胞内聚合物的分离及表征

从取自江西德兴铜矿的酸性矿坑废水中分离出一株菌株（DX1-1），对其形态特征、生理生化、底物利用等特性进行了分析，结果表明该菌具有兼性菌的典型特征．该菌的生长温度范围是20～35℃，pH范围是2．0～5．0．提取该菌基因组DNA，扩增其16SRNA基因并进行序列测定，经系统发育分析确定该菌是一株Acidiphilium菌，进一步分析了其全细胞脂肪酸和DNA G＋C含量，中国典型培养物保藏中心将其定为隐藏嗜酸菌（Acidiphilium cryptum）．透射电镜显示该菌胞内可积累大量颗粒状聚合物．取该聚合物并进行红外、紫外吸收光谱检测，结果显示该聚合物具有聚-β-羟基丁酸酯（PHB）的典型特征．研究表明DX1-1菌株具有生产生物可降解材料（PHB）的潜力．     

低能氮离子注入三孢布拉氏霉诱变育种方法研究

为探索筛选β-胡萝卜素高产菌株的诱变育种方法,采用低能氮离子对三孢布拉氏霉负菌孢子进行辐照.研究了不同剂量对三孢布拉氏霉存活率、菌丝长势、菌落形态、产孢特性和突变率的影响,并采用高效液相色谱法测定了β-胡萝卜素含量.结果表明:随着注入剂量的增加,其存活率呈现先减小后增大再减小的"马鞍型"剂量效应曲线;除14×1015N+/cm2外,其它剂量下平板培养菌丝均密度增大、长度减小、长速加快、颜色变黄且长出一定量褐色的隐性孢子;其总突变率和正突变率呈现先增加后减小的变化趋势,当剂量为12×1015N+/cm2时,总突变率和正突变率均达到最大,且筛选出1株β-胡萝卜素产量达到1.252g/L,比出发菌株1.044 g/L提高了25%的高产菌株BT12-12-05,通过传代实验发现其遗传稳定.     

抗鳗利斯顿氏菌鸡卵黄抗体制备及其活性研究

鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)是常见的水产动物致病菌.为获得高效抗 L. anguillarum卵黄抗体(egg yolk antibodies, IgY),用纯培养的L. anguillarum制备抗原,免疫蛋鸡,联用乙酸-乙酸钠稀释、(NH4)2SO4与 Na2SO4盐析、透析法由蛋黄分离纯化 IgY.对制备的 IgY进行了体内、外抑菌与吞噬调理活性研究:分别将抗L. anguillarum 的IgY、由普通鸡蛋IgY与L. anguillarum (103 CFU·mL-1)等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),计算成活率;分别将抗L. anguillarum的IgY、普通鸡蛋IgY与L. anguillarum (106 CFU·mL-1)及血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果表明,提取的IgY浓度为8.93 mg·mL-1,每个鸡蛋可获得IgY约120 mg,抗体纯度较高,效价为1:20480;体外抑菌率为65%;能促进细胞吞噬L. anguillarum,相对吞噬率为75%;对克氏原螯虾的保护率为33.3%.     

罗伊氏乳杆菌制剂的制备及性能评价

罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)常栖息于人和动物的肠道系统中,能产生一种特殊的抑菌物质——罗伊氏素,是调节肠道功能的益生菌.乳酸菌活菌制剂广泛应用于食品、医疗、饲料等相关行业.喷雾干燥的能耗较低,在同样生产出优质产品的前提下,冷冻干燥消耗的能量是喷雾干燥的6～10倍.本文通过吸附材料的筛选、保护剂的选择,并对喷雾干燥相关条件进行优化,利用优化的条件进行罗伊氏乳杆菌制剂的制备,并对制备的乳酸菌制剂进行热稳定性实验以及相关质量测定(电镜观察、水分含量、粒径、得率等).结果表明,利用改性硅藻土作为吸附材料的乳酸菌制剂活菌存活率优于改性沸石,选定脱脂牛奶和果聚糖作为保护剂,最佳喷雾干燥条件为:进口温度120?C,出口温度60?C,脱脂牛奶10 g,果聚糖5 g,硅藻土5 g,通过此优化条件制备的乳酸菌制剂其活菌存活率达到88%,活菌数达到5.14×109CFU/g.该乳酸菌制剂在70?C条件下水浴1h,乳酸菌活菌数为3.49×106CFU/g.研究表明,通过优化的喷雾干燥条件制备的乳酸菌制剂存活率高,热稳定性较好.     

罗伊氏乳杆菌NCU801对病原菌的粘附抑制性能

采用选择性平板计数法,考察罗伊氏乳杆菌NCU801活菌悬液、死菌悬液以及发酵上清液对大肠杆菌CMCC44496和金黄色葡萄球菌26003粘附Caco-2细胞的影响。结果表明:在竞争试验、排斥试验和置换试验中,罗伊氏乳杆菌NCU801活菌悬液和死菌悬液均能抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的粘附;活菌悬液比死菌悬液抑制效果更显著,其中最显著的是活菌悬液对大肠杆菌排斥抑制粘附,粘附抑制率达到(86.8±4.5)%;而发酵上清液在竞争实验中最显著,其次是置换试验,而在排斥实验中对病原菌无影响,说明发酵上清液中的细菌素能够杀死未粘附和已粘附的病原菌。更多还原     

太平洋多金属结核区深海沉积物细菌多样性分析

从太平洋多金属结核区东区两个站点沉积物中直接提取环境总基因组,通过PCR及TA克隆分别构建了16S rRNA基因文库．经序列分析结果表明,2个文库共93个克隆分属13个类群,包括α变形菌纲、β变形菌纲、γ变形菌纲、δ变形菌纲、浮霉菌门、酸杆菌门、噬纤维菌-黄杆菌-拟杆菌群、硝化螺旋菌门、放线菌门、绿弯菌门、厚壁菌门、异常球菌-栖热菌门和OP11类群．其中,γ变形菌纲的细菌在2个站点沉积物中都是优势种群,变形菌纲、浮霉菌门、放线菌门、噬纤维菌-黄杆菌-拟杆菌群、硝化螺旋菌门是2个站点共有的细菌类群．DOTUR和LIBSHUFF数据分析结果表明,两个站点的沉积物均具有丰富的细菌多样性,并且物种组成具有显著性差异．     

龙须菜的无菌处理及其典型附生菌的分离鉴定

采用不同浓度的氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素以及放线菌酮单独及组合处理龙须菜, 利用16S rRNA基因序列和ITS序列对分离到的细菌和真菌进行分子鉴定, 比较获得无菌龙须菜的最佳抗生素处理方法. 结果表明: 100μg?mL-1氯霉素、100μg?mL-1氨苄青霉素及50μg?mL-1放线菌酮组合使用抑菌效果最好. 并从龙须菜的培养液中分离鉴定出4株细菌, 分别为鲁杰氏菌属(Ruegeria)、单胞菌属(Alteromonas)、Maribacter属和Fluviimonas属, 1株真菌为Urocystales或Fereydounia属, 其中鲁杰氏菌为龙须菜附生细菌的优势菌群.     

同源重组法构建枯草芽孢杆菌核黄素操纵子突变株

为了解除核黄素合成的反馈调节和提高核黄素的产量,以受体菌的核黄素操纵子为同源重组的指导序列,构建了整合表达载体pB1和pB2,通过双交叉同源重组的方法将线性化的pB1和pB2分别整合到受体菌的染色体上.构建了核黄素操纵子的rfn框和启动子ribPl被pB9启动子替换,并在ribB与ribA基因之间引入PnprE启动子的枯草芽孢杆菌核黄素操纵子突变株GJ04和GJ05.通过PCR方法验证了同源重组的正确性.基因工程菌遗传稳定.能分泌产生核黄素.发酵摇瓶实验结果表明:同源重组突变后的菌株GJ04和GJ05的核黄素产量明显高于具有玫瑰黄素抗性标记的菌株GJ02,发酵72 h分别提高了8.6%和11.2%.     

嗜盐古生菌AJ6的分离及系统发育分析

从新疆阿尔金山国家自然保护区阿牙克库木湖分离纯化得到嗜盐古生菌AJ6,革兰氏染色呈阴性、杆状、少数球形、菌体大小为0.2～0.6 μm×1.6～4.2 μm,最适NaCl和Mg2+质量浓度分别为15%和0.6%,在pH为6.0～7.0条件下生长良好.在此基础上,进一步通过PCR方法扩增了菌株AJ6的16S rRNA基因(16S rDNA),测定了该基因的核苷酸序列,并利用"Clustalw"软件和"PHYLIP"软件包分析16S rDNA序列,对其进行同源性比较和系统发育学分析,建立了嗜盐古细菌的系统发育树.结果表明菌株AJ6与Nnm.pallidum、Nnm.pellirubrum和Nnm.versiforme分在同一类群中,16S rDNA序列同源性分别为97.47%,96.44%和98.12%,菌株AJ6是Na-trinema属中的一个新成员,命名为Natrinema altuensis.菌株AJ6的1 6S rDNA序列已登陆到GenBank,其序列号为AY277584.     

乌鳢伊丽莎白菌的分离鉴定及致病性研究

为解明宁波某养殖场乌鳢死亡的原因,从患典型症状病鱼体内分离到1株细菌WLY01,经形态学观察、生理生化表型鉴定和16S rDNA序列分析,鉴定该菌为伊丽莎白菌(Elizabethkingia sp.).该菌最适生长温度为37℃,其对绵羊血、小鼠血、乌鳢血和鲫鱼血等都有较强溶血活性,呈β溶血.人工感染试验表明:该菌主要通过鱼体表受伤部位感染,发病症状和死亡速度与创伤程度呈明显相关性,其8 d的LD_(50)为1.69×10~6cfu·g~(-1),对乌鳢具有较强致病性.药敏试验显示:该菌对米诺环素、恩诺沙星、利福平、强力霉素、磺胺异唑、依诺沙星等6种药物较敏感,因此,可把米诺环素、利福平、强力霉素、磺胺异唑等作为治疗鱼类伊丽莎白菌病的候选药物.     

腌冬瓜中具有抑菌活性乳酸菌的鉴定及其抑菌特性的研究

利用双层平板法从浙东传统腌制冬瓜中筛选得到1株具有抑菌活性的乳酸菌, 命名为L34. 以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌为指示菌, 利用牛津杯法测定乳酸菌发酵上清液的抑菌活性, 发现其抑菌活性物质具有热稳定性, 对部分蛋白酶敏感; 抑菌活性随pH值的降低而增强, 表现出对酸的依赖性. 结合生理生化实验和16S rDNA序列比对结果, 鉴定L34为植物乳杆菌.     

具有真细菌基因启动子活性的古生菌DNA片段

以大肠杆菌启动子探测质粒pKK232-8 为载体,用4 组限制性内切酶分别消化古生菌盐生盐杆菌R1(Halobacterium halobium )的染色体DNA,在体外进行重组,转化E.coliDH-5α感受态细胞,得到12 个转化子(T1～T12),其抗性水平分布在10～500 m g/L的区间内. 将这些转化子所含质粒分别命名为pSX1～pSX12,限制性酶切分析表明,这些质粒各插入了一段不同的外源DNA 片段,杂交分析表明,抗性最强的转化子T11 所含质粒pSX11 上插入了一段来源于盐生盐杆菌R1 染色体的DNA 片段. 该DNA 片段在大肠杆菌中具有启动子功能.     

314株下呼吸道感染革兰氏阴性杆菌的药敏分析与临床

目的：了解[院内下呼吸道感染革兰氏阴性杆菌的耐药性供临床参考。方法;院内下呼吸道感染患赌 痰菌分离,经法国bioMerieux Vitek 32GNI鉴定卡鉴定得314株革兰氏阴菌ATCC27853进行质量控制。B－内酰胺酶测定采用头孢硝噻吩法,超广谱B－内酰胺酶的测定采用生物梅里埃GNS－NT卡,结果：肺炎克雷伯氏菌,大肠埃希氏菌,铜绿假单胞菌分别占33．4％,16．6％,15．3％,亚胺硫霉素耐药率最低,仅为2％,对头孢噻肟,头孢哌酮,头孢泰克松的耐药率分别为30％,33％,16％,ESBLsS检测结果为19．1％,结论：已发现ESBLsS的存在,今后应密切关注。     

外源柠檬酸和乳酸对海州香薷吸收和转运镉的影响

利用水培法研究了不同浓度镉(Cd)胁迫下,添加柠檬酸或乳酸对海州香薷生物量、抗性,以及吸收和转运镉的影响.结果表明:较低浓度(2mg·L~(-1))的Cd可以促进海州香薷的生长;添加柠檬酸或乳酸均能提高海州香薷对Cd的抗性和吸收量,且添加乳酸20μmol·L~(-1)时抗性最强,添加柠檬酸3mmol·L~(-1)时吸收能力最强;添加柠檬酸或乳酸均能有效提高海州香薷转运Cd的能力,且添加20μmol·L~(-1)的乳酸时海州香薷的转运能力最强.     

响应面法优化芘降解菌的降解条件及降解基因分析

采用响应面法进行实验设计,选择p H值、温度、天数为影响因素,对芘浓度为50 mg/L无机盐培养基进行wp3-1菌株降解条件优化,得到了芘降解率与3种因素间的非线性回归方程,确定了降解芘的最优工艺条件:在温度为34.15?C,p H值为6.98,降解时间为4.28天时,预测芘的降解率为86.42%,实验验证值为85.70%,结果显示,建立的模型具有较高的精度.采用PCR技术克隆邻苯二酚-2,3-双加氧酶基因,生物信息学分析结果表明:C23O基因所编码的氨基酸序列具有双加氧酶基因保守结构域,编码的蛋白质也是一种稳定的酸性亲水蛋白质,分子量为35.01k D,等电点为5.45,二级结构由17%α-螺旋、36%β-折叠和45%的无规则卷曲组成,具有跨膜结构,不具有信号肽.三级结构预测结果与二级结构一致,三级结构有Fe2+结合位点.