油茶苯丙氨酸解氨酶基因的cDNA克隆与序列分析

苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase, PAL)是苯丙烷类代谢途径的关键酶之一。以油茶(Camellia oleifera)近成熟种子cDNA文库和EST文库为材料,通过分子克隆方法鉴定了PAL全长cDNA。结果表明：油茶PAL基因的cDNA长2 118 bp,编码705个氨基酸,与其他物种的PAL具有较高的相似性,在进化上高度同源;油茶PAL编码的蛋白质序列包含与水稻、玉米PAL蛋白质相同的脱氨基位点和催化活性位点;PAL系统进化树表明, 油茶PAL基因与灌木类植物的PAL基因聚类关系最近。     

苯丙氨酸解氨酶菌株的选育及L─苯丙氨酸的合成

本文以粘红酵母ＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｇｌｕｔｉｎｉｓＡＳ２．１０２，１００１－２Ｏ－６Ｒ和深红酵母ＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｒｕｂｒａＡＳ２．２７９为出发菌株，经紫外诱变筛选得到一株苯丙氨酸解氨酶高活力菌株Ｒｈ．ｇｌｕｔｉｎｉｓＮＣ０６，其酶活力是亲株１００１－２０－６Ｒ的１．５倍。在最适转化条件下，肉桂酸转化率达５７．７％，每升转化液生成Ｌ－苯丙氨酸１１．５４克，另外对ＮＣ０６的生理特性进行了初步研究。     

刺槐幼苗中苯丙氨酸解氨酶的活力

<正>刺槐种子吸胀1h后,就显示出苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活力,随着刺槐幼苗的长大,PAL活性不断增强。30d苗龄的刺槐幼苗不同组织的PAL活力差别很大,以幼茎为最高,幼叶次之,幼根最低。PAL活力与刺槐胚轴或幼茎的维管系统即导管分子的数量和木质化程度增长趋势相一致。它可能对提高树苗品质、抗病虫能力有积极意义。     

百合提取物中苯丙氨酸解氨酶的固定化研究

以MR-MVA树脂为固定化载体,对苯丙氨酸解氨酶进行固定化研究,对保存温度、保存时间、pH稳定性、耐光性进行对比研究,结果表明:固定化酶耐热性增强,保存时间增加,耐酸性明显增强,耐光性增强.     

粘红酵母产L-苯丙氨酸解氨酶的研究

对粘红酵母(Rhodotorulaglutinis)产生L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)的产酶条件进行了研究.结果表明粘红酵母产酶最佳条件为培养基／g*L－1;葡萄糖5．0,豆饼水解液10．0(以氨基酸计),KH2PO40．5,Ph5．5;接种量5%,摇瓶转速170r／min,28℃培养15h后添加L-苯丙氨酸至终质量浓度0．5g·     

植物苯丙氨酸解氨酶的研究——Ⅱ 鹰嘴豆、无壳葫芦籽苯丙氨酸解氨酶的亲和层析纯化及其部分性质研究

鹰嘴豆和无壳葫芦籽黄化苗中苯丙氨酸银氨酶(PAL)经亲和层析纯化,聚丙烯酸胺凝胶电泳和SDS—FAGE鉴定均为一条蛋白带,用SDS-PAGE测得鹰嘴豆和无壳葫芦籽PAL亚基分子量分别为55000和74000。Sephadex G—200凝胶过滤法测得鹰嘴豆和无壳葫芦籽PAL分子量分别为205 000和280 000。表明这2科植物PAL均由分子量相同的4个亚基构成。     

产苯丙氨酸解氨酶重组大肠杆菌的培养

L-苯丙氨酸是人体8种必需氨基酸之一。酶法转化是目前生产L-苯丙氨酸的主要方法。为了提高苯丙氨酸解氨酶的产量,对可高效表达苯丙氨酸解氨酶基因的重组大肠杆菌JM105进行培养,对发酵过程中pH值对工程菌生长的影响进行了研究。结果表明,摇瓶培养条件下,控制发酵过程中发酵液的pH值可显著提高菌体产量,当控制pH值为7.0左右时,菌体量比对照高87%。在初始pH值为7.5的情况下,培养10h后将培养液pH值分别调整为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0,则以pH值为7.5时的菌体量最高。10L发酵罐中控制发酵液pH值为7.5,菌体密度可达A600=20mol/L（DCW=11g/L）,比不控制pH值高出33%。试验结果为进一步开展该工程菌的高密度培养提供了一定的参考。     

苯丙氨酸解氨酶印迹交联酶聚体的制备及部分催化性能研究

苯丙氨酸解氨酶(PAL)是酶法生产L-苯丙氨酸的关键酶,目前主要利用红酵母PAL进行转化,但红酵母PAL稳定性较差,妨碍了其工业化的应用。该研究将交联酶聚体和印迹酶的制备方法相结合,制备出新型固定化酶-苯丙氨酸解氨酶印迹交联酶聚体,筛选出最优的底物印迹分子,并考察了该固定化酶的部分特性。结果表明,反式肉桂酸是制备印迹PAL交联酶聚体的最适底物,所制备印迹交联酶聚体的最适催化温度和pH值分别是50℃和10.5,并表现出较好的重复使用性,连续催化9个批次后,仍保持了32%的酶活保留率。     

黄瓜花叶病毒感染引起甜瓜植株苯丙氨酸解氨酶和叶绿素的变化

研究黄瓜花叶病毒新疆株(cucumber mosaic virus-XJ,CMV-2-XJ)感染抗性不同的甜瓜品种后苯丙氨酸解氨酶和叶绿素含量的变化,结果表明：与健康对照相比,受感染植株的酶活性均有所增高,但抗性品种“新玉”增高的幅度是感性品种“网纹香”的2倍,酶活性峰早出现12 d,即抗性品种酶活性增高幅度大,酶活性峰出现早;叶绿素的变化则与抗性呈负相关,抗性品种“新玉”受CMV-XJ感染后的叶绿素含量与健康对照差异不大,而感性品种“网纹香”的叶绿素含量则比健康对照下降了62.9%.说明苯丙氨酸解氨酶和叶绿素含量的变化均与甜瓜品种对CMV-2-XJ的抗性呈现规律性的相关性,这种规律性可用于甜瓜品种对CMV-XJ抗性鉴定的生物化学分析.     

外源过氧化物酶提高植物抗性酶活性及可能机制分析

外源酶类常用于生物学研究,探讨外源萝卜过氧化物酶对苗期心里美萝卜根、茎、叶中抗性酶的影响.实验结果表明外源过氧化物酶能提高萝卜幼苗苯丙氨酸解氨酶和过氧化氢酶活性,降低H2O2含量,这些作用具有组织差异;质膜L-型钙通道阻断剂硝苯吡啶在单独应用时,对植物的抗性酶也有较明显的影响,并改变外源过氧化物酶的作用效果.因此,外源...     

粘红酵母产L-苯丙氨酸解氨酶发酵条件的优化研究

一、前言 L-苯丙氨酸有生理活性,是人体和各种动物所必需的.另外L-苯丙氨酸又是合成一些抗癌药物的中间体.最近10年来,L-苯丙氨酸最重要的用途是合成二肽甜味剂阿斯巴甜.