重组人源METTL3蛋白的表达与纯化

m6A受到甲基转移酶(METTL3,METTL14,WTAP等)/去甲基化酶(FTO,ALKBH5等)以及一些RNA 结合蛋白(YTHDF1/2/3, ELAVL1 等)的共同调控,在细胞内是一个动态可逆的过程 . 甲基化转移酶METTL3 是甲基转移酶复合物中重要的组成部分,参与调控真核生物mRNA的甲基化水平.目前关于METTL3的分子结构基础以及整个甲基化转移酶的复合物的组装机制还不是很清楚.本研究中构建了原核表达载体pET.32M.3C-METTL3 ^(1-305) ,利用大肠杆菌原核表达系统表达出了可溶性的目的蛋白,通过镍柱亲和层析,凝胶过滤层析以及离子交换层析获得了纯度高,构象均一的蛋白METTL3 ^(1-305) .除此以外,还分别利用超速离心和圆二色谱的技术对蛋白的构象以及二级结构进行了分析.已获得的高纯度融合蛋白METTL3 ^(1-305) ,为进一步研究METTL3蛋白的结构以及与复合体其他成分之间的相互作用提供了一定的基础.     

热预适应对大鼠肌肉组织中m6A修饰的影响

为了解大鼠肌肉中m⁶A修饰在热预适应过程中的变化,并初步探讨m⁶A在热预适应过程中发挥的作用.选用24只成年雄性SD大鼠,随机分为2组,12只为预热组,12只为对照组.热预处理组是42℃热处理15 min,每天3次,连续5 d,对照组不做任何处理.处理结束后检测关键酶的转录和翻译表达水平,以及总m⁶A的变化.与对照组相比,热预处理组的甲基转移酶METTL3和METTL14,KIAA1429的mRNA表达水平均有不同程度上升,METTL3最为显著;去甲基化酶FTO和ALKBH5的mRNA水平下降,FTO蛋白表达水平下降极显著;LC-MS检测发现m⁶A修饰水平升高.在热预适应过程中,大鼠骨骼肌中m⁶A甲基化修饰增强,去甲基化减弱,总体m⁶A水平升高,表明m⁶A信号通路在大鼠肌肉预适应过程中可能发挥正调控作用.     

人源性14-3-3σ真核表达载体的构建及鉴定

目的：构建人源性14-3-3σ真核表达载体pCMV-Myc-SFN,并观察其在真核细胞中的表达。方法：通过反转录-聚合酶链反应从HeLa细胞（人宫颈癌细胞系）中获得编码14-3-3σ的cDNA,定向克隆至真核表达载体pCMV-Myc中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内14-3-3σ的表达。结果：构建了真核表达载体pCMV-Myc-SFN,将其转染HeLa细胞48h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内14-3-3σ的表达显著增高。结论：成功构建了真核表达载体pCMV-Myc-SFN,为研究14-3-3σ在上皮细胞源性肿瘤中的作用奠定了基础。     

K2CuIn3Se6的固相合成、晶体结构和性能

采用反应性熔盐法以n(K₂Se₃ )∶n(Cu)∶n(In)∶n(Se) =2∶2∶1∶6的摩尔比,在773K下反应5d,得到四元金属硒化物K₂CuIn₃Se₆。该晶体属于单斜晶系,空间群为C2/c ,晶胞参数a =1 .1484(2)nm,b =1.1458(2)nm,c =2.1327(4)nm,β =97.81(3)^o,V=2.7802(1)nm³,Z=8.K₂CuIn₃Se₆具有层状结构,含有二维共价结构的负离子,²∞[CuIn₃Se₆]^2-.²∞ [CuIn₃Se₆]^2-由配位四面体[CuSe₄]和[InSe₄]共顶点连接而成。²∞[CuIn₃Se₆]^2-和K+ 以静电力堆积成晶体。漫反射光谱研究表明,该晶体具有1.6eV的光学能隙,属于半导体,对太阳能有选择吸收的特性。     

3-溴-6-甲基哒嗪的结构、光谱和热力学性质

3-溴-6-甲基哒嗪是一种新近合成的哒嗪重要衍生物,从理论上对其结构、光谱和热力学性质的研究还未见报道。采用Gaussian03计算程序在B3LYP/6-311＋＋G^＊＊水平对3-溴-6-甲基哒嗪进行结构优化和频率、热力学性质计算,得到它们的红外光谱以及热容、熵、焓等热力学性质与温度之间的函数关系式,有助于哒嗪类化合物的合成及其它性质研究。     

H6M4(N2H2)3(M=Al,Ga)簇合物的结构、红外光谱和热力学性质研究

采用自洽场方法(HF)和密度泛函(DFT)的B3LYP方法,在6-31G*水平下,研究了H6M4(N2H2)3(a-M=Al,b-M=Ga) 簇合物的几何构型、电子结构、红外光谱及热力学性质.结果表明N-N键比肼中N-N键长,有进一步裂解的趋势.振动频率计算表明铝、镓的肼簇合物为基态稳定结构.     

（顺）-3-（氯代亚甲基）-6-甲基-硫色满-4-酮对SMMC-7721细胞抑制作用及对Bcl-2/Bax表达的影响

目的初步探讨（顺）-3-（氯代亚甲基）-6-甲基-硫色满-4-酮（CMMT）抗肿瘤作用机制。方法 MTT法检测CMMT对SMMC-7721细胞抑制率,RT-PCR法检测CMMT对Bcl-2、Bax、P53基因表达。结果 CMMT能够明显抑制SMMC-7721细胞的生长,p53,Bcl-2和Bax分别是对照组的（2.46±0.129）,（1.39±0.08）和（0.36±0.049）倍。结论 CMMT对SMMC-7721细胞有较好的抑制作用,通过下调Bcl-2的表达和促进Bax,p53基因的表达来诱导细胞死亡。     

西松烯内酯的合成研究Ⅲ．苏式－7，14－二羟基－3，9，13－三甲基－6－异丙烯基－（2E，8E，12E）－十四碳三烯苯硫醚的合成

本文报道苏式－７，１４－二羟基－３，９，１３－三甲基－６－异丙烯基－（２Ｅ，８Ｅ，１２Ｅ）－十四碳三烯苯硫醚（８）的２条合成路线，路线１以溴化物（３）和牛儿醛为原料，经缩合，基团保护、氧化和去保护基四步反应合成（８），总产率２４％，路线２则经氧化和缩合两步反应得到（８），总产率４８％。     

三七中2－（1‘,2’,3‘,4’－四羟基丁基）－6－（2^〃，3^〃，4^〃－三羟基丁基）吡嗪的分离、纯化和结构鉴定

从三七水溶性成分中首次分离得到一个多羟基吡嗪衍生物,该化合物经MS,NMR,^1H-^1HCOSY,^13c-^1HCOSY,HMBC等鉴定其结构为2－（1‘,2‘,3‘,4‘-四羟基丁基）－6－（2^〃,3^〃,4^〃－三羟基丁基）－吡嗪。将分离样品与化学合成的化合物进行了对照,进一步证明了该化合物的结构。