甲壳素脱乙酰酶产生菌的筛选及产酶条件

采用固体平板培养和液体发酵筛选产生甲壳素脱乙酰酶的真菌,并且研究了产酶条件.结果显示在42株真菌中有26株有甲壳素脱乙酰酶活性,最终确定了构巢曲霉和蓝色犁头霉两株产酶活性较高的菌株,它们产生的酶活性分别是343U.mL-1和289U.mL-1.不同的菌株的产酶培养基中的碳源均为含乙酰基的碳源,最适氮源分别为酵母粉和蛋白胨,产酶能力都受Mn2 和Co2 促进,受Cu2 、Fe2 、Fe3 的抑制;构巢曲霉的最适温度、最适pH分别为29℃,7.0~7.5,蓝色犁头霉的最适温度、最适pH分别为31℃,6.5~7.0,最适发酵时间均为96h.     

四羧基锰酞菁作为超氧化物歧化酶和过氧化物酶模拟酶的研究

用核黄素 蛋氨酸光照法和黄嘌呤氧化酶 细胞色素C还原法证实,在1.0×10-6～1.0×10-5mol/L范围内四羧基锰酞菁(TcPcMn)表现出良好的清除超氧阴离子自由基(O—·2)的活性;用黄嘌呤氧化酶 NBT还原法测算出的TcPcMn清除O—·2的二级反应速率常数为7.77×105mol-1·L·s-1,表明TcPcMn作为超氧化物歧化酶(SOD)模拟酶能很好的抑制O—·2的还原性.TcPcMn既能催化H2O2与4 氨基安替比林和酚的显色反应,也能催化邻苯二胺的聚合,表明TcPcMn具有过氧化物酶(POD)活性.用邻苯三酚自氧法得出,TcPcMn将O—·2的氧化性转化成了POD和H2O2的氧化性.因此只要牺牲一定的POD底物,TcPcMn就可以清除掉因歧化O—·2而产生的H2O2,继而能避免因发生Fenton反应而产生氧化性高于O—·2的羟自由基,从而彻底消除O—·2的氧化性,与SOD相比,这是TcPcMn的一个优势.     

Pb2+胁迫对草鱼过氧化氢酶和髓过氧化物酶的影响

摘要:铅及其化合物是水体中常见的重金属污染源,会对鱼类产生巨大的危害.为了研究铅及其化合物对草鱼血清的抗氧化能力的影响,本文分别用不同浓度的Pb2+溶液处理草鱼,探究草鱼血清中过氧化氢(H2O2)含量的变化以及与草鱼血清中过氧化氢酶(CAT)和髓过氧化物酶(MPO)活性的关系.结果表明,低浓度的Pb2+对草鱼血清中H2O2具有刺激作用,其含量随着Pb2+浓度的增加而升高,当Pb2浓度为0.25 mmol·L-1时达到最高值.与H2O2含量变化相反,草鱼血清中CAT和MPO的活性随Pb2+浓度的增高而降低.在0.01mmol·L-1Pb2+作用时,CAT在48h时活力最强,以后逐渐衰减;而MPO的活力普遍增强,在72h最强,并在96h后维持较强的活力.在高浓度(0.25 mmol· L-1)Pb2+作用时,CAT和MPO活性是受抑制的,其中CAT在48 h最低,然后酶活逐渐恢复,96h时达到正常水平;MPO活力一直没有恢复,在72 h时活力最低.     

水解酶的结构及酶的模拟

一前言生物体内的化学变化几乎全部是在酶的催化作用下完成的。酶的催化效率极高,一般比非生物体催化剂高一千万倍到十万亿倍,而且,具有高度专一性。因此,深入研究酶的结构与功能,并模拟酶的作用原理来制造化学工业上有用的催化剂,将会引起化学工业上的一场     

漆树漆酶的催化氧化作用──Ⅵ．漆酶的催化氧化反应机理研究

在静止条件下，用分光光度法研究了底物２，３－二氰基－５，６－二卤氢醌（ＤＤＸＱＨ２，Ｘ＝Ｃｌ，Ｂｒ．Ｉ）的漆酶催化氧化反应，考察了底物离解与反应的关系，考察了半醌自由基的形成和衰减动力学，测定了不同ｐＨ条件下的表现反应速度常数（ｋｏｂｓｄ）、米氏常数（ｋｍ）、半醌自由基的形成速度常数（ｋｆ）和半醌自由基的衰减速度常数（ｋ２ｄ），探讨了环境对半醌自由基形成与衰减的影响，鉴定了反应最终产物的结构．结果证明：１）、底物的一级离解种是底物参与反应的必要形式；２）、半醌自由基阴离子是酶反应的直接产物；３）、半醌自由基的衰减是非酶的歧化反应，４）、由酶反应和非酶反应两部分构成的反应全过程是通过半醌自由基的形成和衰减作纽带联系着的，两个反应部分既独立又偶联，表现为一种特殊的连串反应属性．在此基础上，提出了邻、对苯二酚的漆酶催化氧化反应机理．     

漆树漆酶的催化氧化作用 Ⅶ．稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用

以５，６－溴－２，３－二氰基氢醌为底物，在ｐＨ４．０～６．０条件下，用分光光度法考察了稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制作用，探讨了抑制特征、抑制位点和作用方式．结果证明，稀土金属离子对漆酶催化活性的抑制属竞争性抑制过程．稀土金属离子的抑制作用是通过它与漆酶活性中心周围的酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子的配位相互作用实现的；在这种作用下，ω－羧基阴离子对废物酚羟基的氢键或碱催化作用被削弱，使田羟基中的氢以Ｈ＋方式离去的速度受到阻碍．在ｐＨ４．５条件下，Ｌａ３＋离子与ω－羧基阴离子配合反应的解离常数（Ｋｉ）经测定为２．４×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１．研究表明，漆酶分子中的酸性氨基酸残基对于酶－底物复合物的形成及进一步反应，尤其是酚羟基中氢的离去起着十分重要的作用．     

产漆酶真菌筛选、鉴定及酶促去除苯酚的条件优化

以愈创木酚为底物,从自然环境中成功筛选到一株高产漆酶的粗毛革孔菌(Coriolopsis gallica)NCULAC F1。对其漆酶诱导表达条件进行探究,结果表明,9种芳香化合物对NCULAC F1表达漆酶均无显著诱导作用(P>0.05);而硫酸铜具有显著诱导作用(P<0.05),且硫酸铜与2,6-二甲基苯酚具有显著的协同诱导作用(P<0.05);最佳协同诱导条件下,摇瓶发酵5 d漆酶活力达11.29 U·mL-1,比未添加任何诱导剂的对照组显著提高了138.69%(P<0.05)。提取纯化漆酶,进一步探究漆酶对苯酚的去除效果,结果表明,酶促去除苯酚的过程遵循Michaelis-Menten动力学模型,R2为0.984 3,km为52.45 mg·L-1,Vmax为181.82 mg·L-1·h-1;最佳催化条件为温度70℃,pH 6.0,加酶量5 U·mL-1,介体2’2-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)浓度0.6 mmol·L-1,在此条件下,10 min内苯酚去除率达100%。研究结果为粗毛革孔菌漆酶的高效生产和在酚类污染物控制方面的应用提供了理论参考。     

氮掺杂石墨烯/Zn(CN)_2复合材料的一步法合成及其储锂性能

在氮气保护下,以含Zn金属有机骨架化合物与双氰胺为原料,采用高温处理方法,一步法合成了氮掺杂石墨烯/Zn(CN)_2纳米复合材料(N-GO/Zn(CN)_2),通过XRD、XPS、N_2吸附/脱附、SEM、TEM和AFM等测试技术对样品进行表征,并考察了材料的电化学储锂性能。结果表明,合成的复合材料中氮掺杂石墨烯片层呈褶皱薄膜状,厚度约为5 nm,负载了粒径约20 nm的Zn(CN)_2纳米粒子,复合材料的比表面积为603 m~2/g,孔体积为0. 35 cm~3/g;用于锂离子电极材料时,该材料表现出较高的放电倍率和良好的循环稳定性。该制备方法避免使用有机还原剂,为制备石墨烯复合材料提供了一种绿色合成方法。     

正常棉苗细胞保护酶的分析

过氧化物酶（ＰＯＸ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是细胞保护酶系统中的主要酶，它们在植物的抗逆与抗病中有着重要作用。本文研究了棉花４个品种（ＸＹ－３１，泗棉２号，８９Ａ－４２和苏棉４号）在无菌条件上生长的三个时期（种期Ｓ１，芽期Ｓ２，苗期Ｓ３）的ＰＯＸ活性变化及其同工酶谱带变化，结果表明：ＰＯＸ在Ｓ１期不显示活性，而在Ｓ２和Ｓ３期酶活性逐渐增高。ＳＯＤ酶活力和同工酶酶谱则呈逐渐减弱趋势。它们可能与棉花     

鲭鱼中组胺降解酶产生菌的分离筛选和基本酶学性质研究

鲭鱼亚目的海洋鱼类在捕获后易产生组胺,导致鲭鱼中毒．为研究组胺消长与微生物的关系,通过平板分离和摇瓶发酵,以荧光光度法测定酶活力,从鲭鱼（Pneumatophorus japonicus）皮肉、内脏和腮中分离筛选组胺降解菌,并对所产组胺降解酶的酶学性质进行研究和分析．结果表明：自内脏中分离筛选到一株组胺降解酶活力较高的革兰氏阴性杆菌,从生长产酶曲线推测该酶为初级代谢产物．该酶反应的最适温度为35℃,最适pH为7．2．在pH6．0～8．0和温度20～35℃范围内有较好的稳定性．Mn^2＋、Ca^2＋、Na^-、Mg^2＋、K^＋等金属离子存在时酶活力增加。Zn^2＋、Al^3＋、Fe^3＋、Fe^2＋、Cu^2＋等金属离子存在时,酶活力下降,在EDTA存在条件下酶活力完全丧失．对其动力学研究表明,在甘氨酸-NaOH缓冲反应体系中,最大反应速度Vmax=156．25U·mL^-1,米氏常数Km=0．22mg·mL^-1．组胺降解菌国内还朱见报道,研究结果对进一步研究水产品组胺生物控制技术具有重要意义．     

漆树漆酶的催化氧化作用——Ⅷ.四卤代氢醌的漆酶催化氧化

在静止条件下,对四卤代氢醌(TXQH_2,X=Cl、Br、I)的漆酶催化氧化行为进行了考察。结果证明,四卤代氢醌的酶反应具有几个明显特征:1)一级离解种是底物参与反应的必要形式;2)半醌自由基阴离子是反应的产物;3)半醌自由基经歧化转变成相应的对醌;4)整个反应过程呈现出连串反应属性。这些特征反映了漆酶催化氧化反应的共性。结果还表明,由于卤原子的吸电子作用不强,不能使自由电子有效地离域,生成的半醌自由基寿命短,衰减快;但在二甘醇存在下,可以有效地延缓半醌自由基的衰减,实现提高半醌自由基动力学稳定性的目的。     

草鱼线粒体DNA酶切图谱的研究

用１０种限制性内切酶对草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｉｄｅｌｕｓ）肝脏线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行了分析，其分子大小约１６．５８ｋｂ．ＰｓｔⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＸｂａⅠ，ＢｇｌⅠ，ＨｉｎｄⅢ，ＢｇｌⅡ，ＰｖｕⅡ，ＸｈｏⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＳａｌⅠ在草鱼ｍｔＤＮＡ分子上分别具有２，３，３，４，７，３，６，２，４及０个切点．根据单酶解及双酶解结果建立了草鱼ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱     

桔园螨类酶免疫反应的初步研究

对桔园螨类的酶免疫反应进行了初步研究,主要内容包括：（１）抗原及抗血清的的制备;（２）螨类ＥＬＩＳＡ最适实验条件的确定;（３）螨类ＥＬＩＳＡ灵敏性、重复性、特异的考察;（４）尼氏钝缓螨的饥饿实验;（５）桔园柑桔全爪螨密度与捕食螨酶免疫反应的关系,本项研究为农业螨类的ＥＬＩＳＡ检测提供了依据。     

漆树漆酶的催化氧化作用──Ⅸ．含叔丁基的儿茶酚类底物的漆酶催化氧化

用分光光度法对６个含叔丁基的儿茶酚类底物在不同ＰＨ条件下的离解和漆酶催化氧化行为进行了考察，测定了它们在ＰＨ８．０时的反应速度常数．结果表明，叔丁基的疏水性较好地适应了漆酶对底物疏水程度的要求，使这类底物更容易为漆酶所包结；漆酶活性中心周围的酸性氨基酸残基中的ω－羧基阴离子所提供的ｐＨ环境和质子转移作用，促进了这类底物的离解，使这类底物能在远低于其一级离解所需ｐＨ的环境中进行反应．速度常数数据显示，取代基的疏水作用和取代基参与双齿配位的能力是影响这类底物反应速度的主要因素；在叔丁基的存在下，取代基的电子效应对这类底物的反应速度的影响变得不明显．     

小麦叶绿体DNA的提取与酶切

研究小麦叶绿体ＤＮＡ，需要快速，简便地获得质纯，量大的ｃｔＤＮＡ蒋高离子强度和抗坏血酸同时引入缓冲系统用于提取小麦ｃｔＤＮＡ利用高离子强度对ＤＮＡ与蛋白质之间的静电吸引造成襄胁损失的阻碍作用，及抗坏血酸提供低ｐＨ环境抑制酶活性等作用，得到较好的产率和纯度，并可得到清晰的限制性内酶图谱。     

延胡索酸酶生产菌的诱变和筛选

选用延胡索酸酶生产菌一黄色短杆菌（Ｂ１）为原始出发菌株，分别用紫外线和硫酸二乙酯进行诱变处理，经摇瓶复筛后，得到较（Ｂ１）酶活力高出２３％的新突变菌株Ｂ４，并且具有稳定的产酶性状。     

活性染料与酶蛋白之间的亲和作用

活性染料与酶蛋白之间有着特异性的亲和作用，可用于亲和层析或亲和分配提取蛋白质。染料末端结构的微小修饰会引起亲和作用的显著变化，且染料载体不同对亲和作用也有一定的影响。以游离活性染料为亲和配基，提出了从组织匀浆液中提取乳酸脱氨酶的二次萃取流程。     

酶促反应抑制动力学的微量热法研究——硫氰酸根漆酶催化氧化邻苯二胺的抑制

提出了一个适合米氏酶促反应各类可逆性抑制的热动力学方程：Ω０＝Ａ［Ｓ０］－１＋Ｂ根据方程中Ａ／Ｂ，Ｂ与Ｋｍ，Ωｍ的关系，给出了可逆竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制的热动力学判据以及表观米氏常数Ｋｍ，ａｐｐ、抑制常数Ｋｉ等酶促反应生化参数计算的热动力学公式，并实际应用于ＮａＳＣＮ对漆树漆酶催化氧化邻苯二胺抑制热动力学的微量热法测定，实验结果表明，此反应为非竞争性抑制，Ｋｍ，ａｐｐ为０．０９９１９±０．００７８２ｍｏｌ·Ｌ－１，Ｋｉ为０．０５２±０．００８ｍｏｌ·Ｌ－１．     

海螺酶的制备、性质和应用研究

报道了从食草性海螺粒蝾螺和锈凹螺中制备海螺酶的方法，并且初步研究了酶的组分、性质及其在海藻生产上的应用。酶学分析表明：两种海螺酶均为复合酶，含有纤维素酶、木聚糖酶、褐藻酸酶、几丁质酶、α－和β－半乳糖苷酶和β－葡萄糖苷酶；同时研究也表明除β-葡萄糖苷酶、α-和β－半乳糖苷酶外，大部分酶的最适pH在6－7之间。用复合酶I（粒蝾螺酶）和复合酶Ⅱ（锈凹螺酶）溶液分别水解条斑紫菜、海带组织，均获得大量单细胞和原生质体。将获得的单细胞在改进的PES培养基中培养，细胞能正常分裂、长成正常的植株。在实际生产上，将获得的大量紫菜单细胞附着于尼龙网上，经过实验室短期培养再移于海中可长成正常叶状体，初步表明该方法在实际生产上具有广阔的应用前景。     

气单胞菌几丁质酶的性质与发酵条件

从浙江省土样中分离出一株产几丁质酶的好氧菌,经鉴定该菌属于气单胞菌属(Aeromonas sp.),命名为CJ-5菌株.经研究发现,CJ-5菌产生的几丁质酶是一种诱导、分泌型酶,其产酶的最佳发酵条件为起始pH7.0,温度为30℃,几丁质底物质量浓度为2%～2.5%,培养基装量为三角烧瓶总体积的20%.在3 L发酵罐中进行了扩大培养,发酵液的最高几丁质酶活力为0.41 U·mL-1.该酶的酶促反应最适温度为36℃,最适pH为7.0.在进一步的研究中,还发现CJ-5菌株是一株产双酶的菌株,既产几丁质酶,又产壳聚糖酶.