肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性分析

目的：通过实验的方式,熟悉通辽地区革兰氏阴性杆菌中肺炎克雷伯菌产超广谱β—内酰胺酶（ES-BLs）的情况,并初步掌握该种细菌对常用的抗生素耐药状况,为临床合理使用抗生素提供有效的依据.方法：样本采集区间为2012年1月至2012年12月,采集地点为内蒙古民族大学附属医院样本分离出的肺炎克雷伯菌共258株,通过采用双纸片协同扩散法检测革兰氏阴性杆菌产超广谱β—内酰胺酶,并且采用K-B法做药敏试验,对肺炎克雷伯杆菌做具体耐药性分析,最终将分析出的耐药性结果按照世界卫生组织细菌耐药性监测网提供的WHONET5.6软件进行数据统计分析,并根据美国国家临床实验标准化委员会订立的标准（2009年版）做出敏感性和耐药性的分析报告.结果：肺炎克雷伯菌在ICU、呼吸内科、神经外科分布较多.肺炎克雷伯菌及其产酶菌株耐药性强,给临床治疗带来很大麻烦,其中亚胺培南是治疗首选,另外对头孢类复合制剂药物也相对敏感.结论：临床可以使用交叉用药方案,避免耐药菌的出现.     

PCR检测乳粉中肺炎克雷伯氏菌

利用PCR技术直接检测乳粉中的肺炎克雷伯氏菌,无需增菌.通过滤膜法成功地从人工污染肺炎克雷伯氏菌的乳粉中提取了肺炎克雷伯氏菌的DNA.以肺炎克雷伯氏菌的间区序列(ITS)为靶基因,经过PCR扩增得到158 bp的产物,经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物.该方法灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为10CFU/mL,可在6 h内完成对乳品中肺炎克雷伯氏菌的检测,比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12-24 h.     

肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的免疫活性研究

利用临床分离的肺炎克雷伯氏菌致病株制备其荚膜多糖（CPS），对CPS的免疫活性进行了研究。结果显示，CPS具有很强的免疫原性，以其免疫家兔制备的多克隆抗体效价达1：32000，且对CPS具有高度特异性；体外免疫活性实验表明，CPS对细胞免疫具有双向调节作用，即低浓度CPS对小鼠脾细胞增殖具有显著的促进作用，而高浓度CPS对小鼠脾细胞增殖具有显著的抑制作用；溶血空斑实验结果显示，CPS对体液免疫刺激作用显著（P〈0．01）；同时CPS能激活巨噬细胞．促进细胞因子TNF-α的生成。     

一株罕见不携带rmpA、rmpA2的多药耐药高毒力肺炎克雷伯菌临床分离株（英文）

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一种臭名昭著的机会致病菌,尤以高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulent K. pneumoniae, hvKp)为重。幸运的是,多数hvKp对抗生素敏感。然而,近年来,多药耐药hvKp(multidrug-resistant hvKp, MDR-hvKp)引发病症的报告剧增,威胁着全世界人民的健康和安全。本研究报告了一例感染了不携带rmpA和rmpA2的MDR-hvKp的92岁慢性阻塞性肺疾病患者的病例。患者在住院后第8天去世。对患者痰液中分离得到的肺炎克雷伯菌21072329进行表型实验和全基因组测序,结果显示,21072329属于ST11-KL47 MDR-hvkp,该菌株对大蜡螟具有较高的致死率。同时,21072329有着较强的粘性,难以将其完全离心。21072329携带ESBL(extended spectrum beta-lactamase)基因(bla_CTX-M-65, bla_SHV-158,和bla_TEM-1)和碳青霉烯酶基因(bla     

肺炎克雷伯菌第1类整合子的鉴定和耐药性分析

目的 了解来源于不同临床标本的肺炎克雷伯菌的耐药性、携带第1类耐药整合子的特征及基因盒的种类.方法 使用常规方法分离肺炎克雷伯菌;运用法国梅里埃VITEK细菌分析系统进行鉴定;应用纸片扩散法对15种抗生素进行耐药性监测和分析;应用PCR法扩增第1类整合子;对PCR产物纯化、测序,并对结果进行分析.结果 来源于不同临床标本的64株肺炎克雷伯菌100%耐药,32株(50%)表现多重耐药,9株耐4种抗生素,耐药谱为氨苄西林-链霉素-复方新诺明-四环素;20株(31.2%)为第1类整合子阳性株,其中17株整合子大小为1.0 kb,2株为1.6 kb,1株含有1.0 kb和1.6 kb两个整合子;PCR产物测序显示1.0 kb整合子携带pse-1-aadA1基因盒,1.6 kb整合子插入了pse-1-aadA2,pse-1-aacA1基因盒,双重整合子株插入了pse-1-aadA1和pse-1-aacA1基因盒.结论 第1类整合子存在于各种临床标本分离的肺炎克雷伯菌中,且与多重耐药性相关,主要决定着对β内酰胺类和氨基糖苷类抗生素的耐药性.     

肺炎克雷伯菌铁载体对喹诺酮类抗生素耐药性的影响

为载体与喹诺酮类抗生素耐药性之间的关系,采用K-B纸片法及微孔稀释法确定细菌对抗生素的药物敏感性,使用CAS琼脂法和紫外可见分光光度法分别对肺炎克雷伯菌铁载体进行定性和定量检测,使用统计学软件SPSS分析细菌铁载体与其耐药性的关系.CAS琼脂法分析表明,临床分离的70株肺炎克雷伯菌均产铁载体（100%）,紫外分光光度法分析表明肺炎克雷伯菌中铁载体产量不同.根据统计学取中位数的方法能够将细菌分为铁载体高产组和低产组两组,喹诺酮类耐药株中铁载体产量高于敏感株（P〈0.01）;铁载体高产组对环丙沙星（CIP）和左氧氟沙星（LEV）的耐药率高于低产组（P〈0.01）;肺炎克雷伯菌铁载体与细菌对喹诺酮类抗生素的耐药性呈正相关性（P〈0.01）.研究表明细菌铁载体参与了细菌耐药,干预了抗生素的杀菌过程.     

肺炎克雷伯氏菌D-乳酸脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增并克隆出D-乳酸脱氢酶的基因（ldhD）,将其连接到表达载体pET-22b(+)质粒上,构建pET-22b(+)-ldhD重组质粒,测序结果100%正确。将重组质粒pET-22b(+)-ldhD转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,通过氨苄霉素抗性平板筛选,构建大肠杆菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-ldhD基因工程菌。重组菌株经IPTG诱导表达,SDS-PAGE蛋白电泳分析,目标条带出现在分子量约37000处,表明D-乳酸脱氢酶基因ldhD在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达。采用紫外分光光度法测定其酶活,底物丙酮酸终浓度为10mmol/L时,在丙酮酸还原为D-乳酸反应方向D-乳酸脱氢酶表现出119.04U/mL的酶活力;底物D-乳酸终浓度为50mmol/L时,在D-乳酸转化为丙酮酸的逆反应方向中表现出0.89U/mL的酶活力。比酶活则分别为9.16U/mg和 0.07U/mg。通过Lineweaver-Burk双倒数作图法,计算出酶反应的米氏常数K_M为10.54mmol/L。经摇瓶发酵后,通过高效液相色谱测定产物,D-乳酸的产量达到3.09g/L。     

新型氨气传感器检测肺炎克雷伯菌的应用

提出了一种通过自行研制的聚苯胺/TiO2-PQC新型氨气传感器来实现迅速定量检测肺炎克雷伯菌的方法。该方法是利用肺炎克雷伯菌在有尿素的存在下能够产生大量的氨气和二氧化碳,此时产生的氨气能够与自制的聚苯胺/TiO2-PQC氨气传感器反应,并引起其表面电参数的变化,信号通过电脑输出,从而达到检测肺炎克雷伯菌的目的。经过研究结果显示,与SPQC相比新方法操作简单,更加灵敏以及不需要特定的培养基等特性,而且能够实现定量实时监测肺炎克雷伯菌。     

大理学院附属医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的:对大理学院附属医院2011年至2012年临床分离的大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌的耐药性进行分析,指导临床合理应用抗生素。方法:菌株分离及培养按常规方法进行,细菌鉴定采用VITET-2 Compact 60全自动微生物分析仪,药敏试验采用K-B法。结果:共收集标本183株,其中大肠埃希菌146株:口痰92株(63%)、分泌物17株(11.6%)、尿液16株(10.9%),脓液9株(6.1%),其他12株(8.2%);肺炎克雷伯杆菌37株:口痰27株(73%)、分泌物5株(13.5%)、脓液3株(8%)其他2株(5.4%)。药敏试验结果显示:大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌对头孢哌酮、阿米卡星、亚胺培南等耐药率较低,分别为10.3%、6.2%、2.7%和10.8%、13.5%、2.7%。结论:大肠埃希菌及肺炎克雷伯杆菌两年痰液中检出率呈上升趋势,对左氧氟沙星、头孢唑啉,氨曲南,头孢他啶等耐药率超过50%,特别是头孢他啶的耐药率相对于2008年显著升高,而对头孢哌酮、阿米卡星、亚胺培南等耐药性较低,临床应根据药敏实验合理选择抗生素。     

粪菌移植对肺炎克雷伯菌所致小鼠肝脓肿感染的抑制作用

探讨粪菌移植(FMT)对高致病性肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)所致小鼠肝脓肿(KLA)感染的抑制作用及相关机制.小鼠随机分为对照(Healthy)组、肺炎克雷伯菌(Kp)组和干预(FMT)组. Kp组小鼠经口灌胃10⁶ CFU K1血清型肺炎克雷伯菌;FMT组在给菌24 h后经口灌胃给予正常小鼠粪菌悬液(300 mg/mL,0.3 mL).结果表明,与Kp组相比,FMT处理明显降低了小鼠KLA感染率;16S rRNA高通量测序分析表明,FMT显著改变了小鼠肠道菌群组成,包括增加了Alloprevotella、norank＿f＿Muribaculaceae等益生菌的丰度;同时FMT处理明显降低了小鼠血清TNF-α和胃肠内防御素分子浓度,同时增加了肠黏蛋白2(MUC2)的表达.因此,肠道菌群和免疫防御因子可能一起参与了FMT对高致病性肺炎克雷伯菌所致小鼠KLA感染的抑制作用.     

同源重组在染色体DNA基因克隆中的应用方法

同源重组是生物界普遍存在的现象，从噬菌体、细菌到真核生物都有能发生同源重组的种类。如何把同源重组应用到基因克隆中成为近年来生物学家研究的热点。本文从宿主细胞的改造、重组功能的诱导、感受态细胞的制备、线性同源载体的获得及重组体的鉴定等几个方面具体叙述这种基因克隆的新方法，从分子水平上较为详尽地介绍了同源重组在染色体基因克隆中的应用、前景展望及存在的局限性。     

计算机辅助基因克隆的Oracle数据库系统

计算机辅助基因克隆的Oracle数据库系统利用SwissProt数据库获取已知的基因, 用 Blast程序从人类基因组序列中搜索与该基因同源的染色体DNA片段, 并将Blast返回的结果 存储于Oracle数据库. 使用者选择所感兴趣的Blast结果, 用本文所提供的算法及前端程序 合成这些DNA片段, 从而实现计算机辅助克隆新基因.     

干酪乳杆菌同源整合载体的构建与鉴定

构建乳酸菌同源重组载体,以实现外源基因在乳酸菌中的整合型表达。PCR扩增lacZ基因表达盒lacZ-cassette,和upp基因表达盒upp-cassette,SOE-PCR扩增lacZ-P-upp,产物回收后连接到pORI28载体中,构建载体pORZP;根据干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393全基因组中lai基因序列设计引物,PCR扩增lai基因两端同源重组臂lai-up和lai-down基因序列,产物经回收后,连接至pORZP载体中,得同源重组载体pORZPlai。双酶切及DNA测序结果证实,成功构建了同源重组载体pORZP-lai,为实现外源基因在乳酸菌中的非抗性、整合型表达奠定了基础。     

克雷伯氏菌引起婴儿腹泻的病原分离鉴定及耐药性检测

通过对急性腹泻患儿粪便标本镜检、细菌分离培养、生化特性、药敏试验和致病性分析后分离鉴定出克雷伯氏菌．药敏试验结果显示对头孢哌酮、丁胺卡那霉索较敏感．在临床小儿感染性腹泻的诊治中，应注意肺炎克雷伯氏杆菌的分离鉴定和选用敏感抗生素对症治疗，以防止滥用广谱抗生紊及耐药性的形成，     

含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的家蚕同源重组质粒载体的构建

以含家蚕丝心蛋白重链基因同源片段的质粒pG350为出发质粒，插入增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因，构建成以EGFP为报告基因的同源重组质粒载体pMD-Fib-IE-EGFP，通过PCR及酶切鉴定表明EGFP以正确的方式插入到原始质粒中，通过脂质体介导法转染胃癌细胞能发出很强的绿色荧光，表明该质粒能够在真核细胞中表达，为进一步建立完善的家蚕转基因系统平台提供基因材料。     

聚合酶链式反应递缩基因组文库以克隆抗生素生物合成基因簇

在克隆阿维菌素(avermectin)生物合成基因簇的过程中,探索出了一条运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术对链霉菌基因组文库进行递缩法筛选、以克隆抗生素生物合成基因簇的新方法.依次以96孔培养板整板混合质粒、单排混合质粒和单个菌落为模板进行PCR扩增,以逐步递缩的方式定位包含目的基因的克隆.结果表明,与传统的菌落原位杂交方法相比,该方法具有简单、快捷、准确率高等优点.     

植物无标记转化的诱导表达Cre/loxP重组系统的构建

应用Cre/loxP系统位点专一性重组的特点构建诱导表达的定位重组系统,用以特异性的敲除转基因植物的标记基因.为了获得诱导表达启动子,从大豆基因组DNA中用pfu酶克隆热激蛋白启动子gmhsp17.5c,将其克隆到pUC118-HincⅡ载体并测序.结果表明,508nt的gmhsp17.5c与已报道序列(GenBank,AF544399)比较,核苷酸的同源性为99.8%.利用该诱导启动子分别构建了含gmhs p17.5c-cre基因组件和gmhsp17.5c-gus基因组的诱导型植物表达载体pC23HC和pC23HG.此外1个含有loxP-gus-loxP组件的组成型植物表达载体pC23LG被构建.通过对3个植物表达载体做多重酶切及亚克隆后测序分析表明载体pC23HC全长10947bp,载体pC23HG全长11396bp,载体pC23LG全长11900bp,符合预期设计.一套由pC23HC和pC23LG组成的植物无标记转化的诱导表达Cre/loxP重组系统被构建,为进一步将诱导表达的标记基因删除系统用于植物的无标记转化奠定基础.     

龙眼FLO/LFY同源基因cDNA片段的克隆

根据不同植物FLO/LFY同源基因3'端保守序列,设计简并引物,运用RT-PCR技术在龙眼花芽总RNA中扩增得到长度为408bp的cDNA片段,命名为lonFLO.序列分析表明,该片段与金鱼草FLO、苹果AFL2、AFL1、拟南芥LFY有较高的核苷酸同源性,分别达98.8%,81.6%,81.1%和76.2%.