蛋白质顺序测定的策略

近年来蛋白质顺序测定在自动化、微量化与策略方面都有显著的进展。用DNA顺序分析技术间接地测定蛋白质顺序的策略已被广泛地采用,它能加快但不能代替蛋白质的顺序测定。质谱技术测定蛋白质顺序的途径也有了可喜的突破。高效液相色谱分离肽技术的发展、限制性酶切及各种选择性的化学与酶的降解方法的出现,为蛋白质顺序测定提供了更多可选用的工具。     

依波西隆蓝与蛋白质作用的共振光散射光谱及其分析应用

微量蛋白质对依波西隆蓝的共振光散射产生增强作用，且增强程度与蛋白质浓度有良好的线性关系，由此建立了测定蛋白质的灵敏共振光散射分析方法。利用该方法测定合成样品和血清样品中的蛋白质，均获得了可靠的分析结果。     

二碘荧光素测定微量蛋白质研究

研究了试剂2,7-二碘荧光素与蛋白质的显色反应,建立了一种测定蛋白质的新方法。在pH=7．00的缓冲溶液中,2,7-二碘荧光素与蛋白质发生灵敏的显色反应,生成1：1的复合物。最大吸收波长为505nm,且吸光度在4h内稳定,蛋白质在15～200mg／L范围内符合比耳定律,回收率在95％～104％之间,探讨了氨基酸及金属离子对测定的影响。用本法测定了果汁中蛋白质的含量,结果满意。     

蛋白质的反射散射光度研究

研究了微晶石蜡吸萃蛋白质-偶氮胂Ⅲ-镝(Ⅲ)复合物的条件,并设计了固相反射散射分光光度直接测定石蜡相中蛋白质的方法。所拟定的方法有较好的选择性,可以用于实际生物样品中蛋白质含量的测定。     

以溴甲酚绿为电化学探针线性扫描极谱法测定人血清白蛋白

蛋白质含量的测定是临床检测、生化分析等方面的重要内容。本研究以溴甲酚绿为电化学探针,考察了其与蛋白质相互作用的最佳条件,建立了测定蛋白质的电化学分析方法,该方法试剂和反应体系稳定,测定方法简单,灵敏度高,应用此法对人血清实际样品进行了测定,结果同传统的考马斯亮蓝G-250光度法一致。     

偶氮氯膦Ⅲ-KIO4体系阻抑反应动力学光度法测定蛋白质

基于KIO4在H2SO4介质和沸水浴中可氧化偶氮氯膦Ⅲ褪色, 而蛋白质能灵敏地阻抑该氧化褪色反应, 建立了测定痕量蛋白质的新方法. 蛋白质测定范围为0～6 μg/mL, 方法的检出限为2.9×10-10 g/L, 回收率为96%～109%. 测定了动力学参数, 并对反应机理做了研究. 该方法可用于实际样品的测定.     

浅谈蛋白质含量量值溯源传递体系的构建

简述了蛋白质含量测定结果溯源到SI单位的重要性,结合中国计量科学研究院开展的工作及当前国际蛋白质计量发展的趋势,阐述了实现蛋白质含量测定结果溯源到SI单位的两种方案,方案中蛋白质标准物质的定值结果可以通过同位素稀释质谱法、滴定法、凝固点下降法等权威计量方法最终与SI单位连接,因此保证了蛋白质标准物质定值结果的准确和可溯源.以蛋白质标准物质作为量值的载体,可实现蛋白质含量量值在应用领域的传递,从而构建起蛋白质含量量值溯源和传递体系.     

奶粉中蛋白质的快速测定法

劣质奶粉的出现严重地损害了人民群众的健康,劣质奶粉的主要特点是蛋白质含量远低于正常值。寻求一个简单、快速地测定奶粉中蛋白质含量的方法对于在大范围内,迅速鉴定奶粉的质量,及时发现劣质奶粉非常必要。经典的测定奶粉中蛋白质的方法为凯氏定氮法,该法要经过消化、蒸馏、滴定等步骤,手续繁琐,耗费时间长。本文在文献基础上,建立了一个快速测定奶粉中蛋白质的方法。     

茜素绿-蛋白质体系的共振瑞利散射光谱及其分析应用

基于蛋白质对茜素绿共振瑞利散射的增强作用,建立了一种测定水溶性蛋白质的新方法.在酸性BR缓冲溶液中,茜素绿在365 nm处的共振光散射增强与蛋白质浓度呈线性关系.对人血清白蛋白、牛血清白蛋白、γ-人球蛋白、卵白蛋白测定的检出限均低于14 ng/mL.该方法灵敏、稳定、选择性好,适用于人血清、尿液中总蛋白质的测定.     

蛋白质—四氯苯醌荷移反应的分光光度研究

本文用分光光度法研究了蛋白质—四氯苯醌荷移反应。通过对影响反应各因素的研究,确立了以四氯苯醌形成荷移络合物的方法测定蛋白质的最佳条件,测定了最大结合数及反应平衡常数。     

蛋白质与铜(Ⅱ)-偶氮胂Ⅲ络合物的作用及分析应用

蛋白质是一类重要的生物大分子,其定量分析是生命科学、临床检验及生化研究等领域的重要课题.以金属络合物为光谱探针测定蛋白质的含量,可获得更高的灵敏度和选择性[1,2].本法研究表明,在pH 2.0～2.4介质中,蛋白质与铜(Ⅱ)-偶氮胂Ⅲ络合物发生作用,生成三元复合物,其λmax为635 nm.研究了该体系的光谱变化,试验了影响因素及最佳条件,建立了以该金属络合物作为光谱探针测定蛋白质的方法.用于人血清样品中蛋白质总量的测定,结果满意.     

刚果红分光光度法测定血清蛋白质

1　引　　言蛋白质的定量测定在生物化学、药学及食品等学科中有重要意义 ,也是临床诊断疾病及检查治疗效果不可缺少的分析项目。蛋白质含量测定方法很多 ,目前研究最多、应用最广的为染料结合法 ,但未见有刚果红作显色剂测定蛋白质的报道。研究了刚果红与蛋白质反应的基本条件 ,建立了以刚果红测定蛋白质的分光光度分析法 ,用于实际人血清样品中总蛋白质的测定 ,取得了满意的结果。与经典的考马斯亮蓝法比较 ,本法简便灵敏 ,稳定性好 ,线性范围较宽 ,颇有实用意义。2　实验部分2 .1　主要仪器及试剂　Ｌａｍｂｄａ 3 5紫外 可见分光光度计 …     

蛋白质顺序测定技术(一)

引言自从1955年F.Sanger测定了胰岛素结构以后,促进了蛋白质一级结构测定技术的发展。目前世界上搞清一级结构的蛋白质已有一千多个,其中最大的为β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase),它由1021个氨基酸组成。氨基酸自动分析仪,自动顺序仪和高效液相层析技术的出现,更使蛋白质一级结构测定技术突飞猛进。目前仅须几个毫克的样品就能进行一级结构的测定。在我国,蛋白质一级结构的研究比较落后,但目前已有很多单位开展蛋白质一级结构的研究。为了更快促进我们这方面工作的进展,1980年10月西德马-普学会分子遗传研究所的B.Wittmann-Liebold     

液相色谱/电喷雾质谱(LC/ESI/MS)在蛋白质分析鉴定中的应用

对液相色谱／电喷雾质谱（LC／ESI／MS）在蛋白质分子量测定、一级结构的分析、蛋白质和多肽纯度的鉴定、肽质量酶谱、蛋白质分子内二硫键的定量和定位、磷酰化位置的测定以及在蛋白质组中的应用等方面进行了综述和讨论。     

以溴甲酚紫为电化学探针测定血清白蛋白

常见的蛋白质定量分析方法、电化学行为及其分析应用已有报道．本文基于酸性条件下蛋白质可与溴甲酚紫(BP)结合生成一种超分子复合物,使溴甲酚紫还原峰电流降低,建立了一种测定蛋白质的新方法,并用于测定人血清样品中的白蛋白含量．     

以偶氮胂I极谱分析法测定蛋白质的研究

蛋白质含量的测定在生化分析、临床检测中有着重要的意义.常用于测定蛋白质的方法有分光光度法、电化学分析、荧光法和光散射技术等.本文选择了具有电活性的偶氮类物质偶氮胂Ⅰ,利用其在酸性条件下能够和蛋白质分子发生静电作用形成生物超分子复合物的原理,详细研究了结合反应的条件和电化学测定条件,建立了以偶氮胂Ⅰ为电化学探针测定人血清白蛋白的方法,并应用电化学方法求解了结合常数与结合比.     

刚果红与蛋白质相互作用的分光光度研究及其分析应用

在pH4.1的Britton-Robinson缓冲介质中,刚果红与蛋白质在室温下能迅速结合生成红色复合物,其最大吸收波长为488nm,比刚果红本身紫移了32nm。用光度法研究了该结合反应的最佳条件,并在此基础上建立了测定蛋白质的方法。测定蛋白质(BSA)的表观摩尔吸光系数4ε88为2.876×105L.mol-1.cm-1,该法简便、快速、选择性好、灵敏度高,用于人血清样品和含乳饮料中蛋白质的测定,结果与考马斯亮蓝法一致。     

荧光镓-SDS共振瑞利散射法测定蛋白质的研究

在pH 2.21的B-R缓冲溶液中, 蛋白质的加入导致荧光镓共振瑞利散射信号增强, 基于此, 建立了一种测定蛋白质的新方法. 表面活性剂SDS的加入显著提高了体系的灵敏度, 牛血清白蛋白的浓度在0～4.5 μg/mL之间与体系的散射强度呈线性关系, 检出限为8.14 ng/mL. 方法已应用于人血清样品中蛋白质含量的测定. 同时, 利用分光光度法测定了其不同温度下的结合数、结合常数. 利用热力学方程研究发现荧光镓与蛋白质之间的主要作用力为静电引力.     

用尺寸排阻色谱法研究蛋白质的热稳定性

用尺寸排阻色谱ＺｏｒｂａｘＧＦ－２５０凝胶过滤柱研究了核糖核酸酶Ａ,马心肌红蛋白和溶菌酶的热稳定性。测定了蛋白质在尺寸排阻系统中的分配系数Ｋｄ并用荧光检测器分析了加热引起的蛋白质内源性荧光的改变,从而计算出了蛋白质的热变性转化点温度,测定了蛋白质天然态、热变性和盐酸胍诱导变性状态下的斯托期斯半径,实验结果进一步证帝了热变性后蛋白质不是呈真正的随机线状,而是保留了部分紧密的结构区域。用本方法研究了Ｐ     

质谱技术在蛋白质、多肽化学中的应用

文中介绍了几种新的质谱技术: 快原子轰击质谱(fast atom bombardment-MS, 简称FAB-MS)、串联质谱(tandem mass spectrometry, 简称MS/MS)、电喷雾电离质谱(electrospray ionization-MS, 简称ESI-MS)和基质辅助的激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time offlight MS, 简称MALDI-TOF-MS), 这几种技术的相互补充使得质谱比较有效地用于蛋白质结构测定。文中例举了几个实例说明了它们在蛋白质的分子量测定,蛋白质和多肽的纯度鉴定, 糖肽的结构测定及特殊的N-端封闭的或一般的蛋白质和多肽的顺序测定中的应用。