磺化酞菁与人血清白蛋白复合物的光动力活性研究

通过光谱法研究了三种磺化酞菁(α位四磺化酞菁、β位四磺化酞菁和α位单取代磺化酞菁)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.结果 表明,HSA对α位四磺化酞菁的存在状态(单体、聚集体)影响显著,而对β位四磺化酞菁和α位单取代磺化酞菁的存在状态没有明显影响.磺化酞菁与HSA均存在明显的相互作用,且.四磺化酞菁与HSA的结合作用...     

茜素红S光度法测定人血清白蛋白

１引言人体血液中的白蛋白是形成血浆胶渗压的主要成分，它在维持体液的正常分布，以及保持血容量及血压等方面起重要作用。同时，血浆白蛋白对人体具有营养作用。已有报道将它作为人体营养健康和疾病诊断、疗效观察的重要指标及资料数据。分析、测定、研究血浆中白蛋白的含量，对人体健康和生命科学的研究可提供重要的科学依据和研究价值。２实验部分２．１仪器与试剂ＵＶ－２６５分光光度计（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；７２４微机型分光光度计（上海光学仪器厂）；８２１型ｐＨ计（中山大学电子厂）。茜素红Ｓ（ＡＲＳ）５．０×１０－４ｍｏｌ…     

共振散射光谱法研究人血清白蛋白与二甲酚橙的反应

对二甲酚橙作为光散射探针测定蛋白质进行了研究,基于人血清白蛋白对二甲酚橙的共振光散射强度的增强效应,建立了测定蛋白质的共振散射光谱法。在pH 4.00的NaOAc-HOAc缓冲溶液中,二甲酚橙只有微弱的光散射强度,但它与蛋白质的缔合物却有较强的共振光散射信号,在λ=517 nm处,光散射强度达到最大,并且与蛋白质浓度在为0.0~10.0 mg.L-1范围呈线性,检出限为0.044 mg.L-1。运用摩尔比法测定二甲酚橙和蛋白质的结合数为132,用于实际样品的分析,测定值与考马斯亮蓝法的结果一致,分析结果的RSD值(n=5)均小于5%。     

厚朴酚与人血清白蛋白的相互作用研究

利用荧光光谱、CD和FTIR技术研究了模拟生理条件下厚朴酚与人血清白蛋白的相互作用,计算了反应的结合常数、结合位点数和热力学参数。厚朴酚在人血清白蛋白上的结合位置与色氨酸残基间的距离为2.34 nm。分子模型研究表明,厚朴酚与HSA在亚结构域IIA结合,二者间的作用力主要为疏水作用。CD结果表明,厚朴酚与HSA的键合使HSA中α-螺旋结构含量从46.6%降到39.9%。     

荧光法研究苯胺蓝与人血清白蛋白的相互作用

用荧光光谱、同步荧光光谱研究了苯胺蓝和人血清白蛋白的相互作用。研究表明,苯胺蓝对人血清白蛋白的荧光发射有明显的猝灭作用,根据不同温度下的猝灭数据,由Stern-Volmer方程推断苯胺蓝对人血清白蛋白的猝灭属于静态猝灭。计算得到了结合常数KA、结合位点数n,同时计算得到的热力学常数表明苯胺蓝和人血清白蛋白作用力类型为静电作用和疏水作用结合。同时用同步荧光光谱探讨了苯胺蓝对人血清白蛋白构象的影响。     

白藜芦醇类似物与人血清白蛋白的相互作用

采用荧光光谱、三维荧光光谱、紫外吸收光谱研究白藜芦醇类似物(Z)-2-(3,4-二甲氧苯基)-3-(4-二甲氨基苯基)丙烯腈(HCQ)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用,探讨其作为抗肿瘤药物的可能。结果发现HCQ与HSA形成了基态配合物,HCQ主要结合于HSA的位点Ⅰ,与位点Ⅱ也有微量的结合,反应为自发的放热反应,其ΔH、ΔS、ΔG均小于零,二者之间的结合力为氢键或者范德华力,结合常数为104～105数量级。HCQ与HSA的结合使HSA构象发生变化,Trp-214所处的环境疏水性增加,使得其内源性荧光显著降低。说明合成的白藜芦醇类似物能够与人血清白蛋白结合。     

考拉维酸对人血清白蛋白结构的影响

利用多种荧光光谱法、紫外光谱法并结合分子模拟等方法, 表征了模拟生理条件下一种植物药活性组分考拉维酸(KA)影响人血清白蛋白(HSA)的结构信息. 同步荧光及紫外光谱证实考拉维酸的存在影响了HSA的微环境; 二维及三维荧光光谱表明考拉维酸可以猝灭HSA的内源荧光, 使其构象发生变化. 荧光偏振的测定提供了考拉维酸与HSA作用后生成的配合物弛豫时间与聚集特性的信息, 揭示KA的存在使HSA的流动性和微粘度发生变化. 定量求得不同温度下(298、308 和318 K)考拉维酸与HSA作用的键合参数和热力学参数. 分子模拟表明考拉维酸键合位点于HSA分子的疏水腔内, 并与赖氨酸Lys195 和天冬氨酸Asp451 形成三个氢键, 与HSA的键合模式主要是疏水作用; 位点竞争实验证明考拉维酸在HSA亚结构域的位点Ⅱ位发生作用. 另外, 获得的相关物理化学参数从分子水平上揭示了考拉维酸与HSA相互作用的机制. 结果表明, HSA对考拉维酸有较强的结合能力, 提示人血清白蛋白对考拉维酸可起到储存和转运的作用.     

血清白蛋白对紫杉醇的化学修饰

采用两种方法由牛血清白蛋白和人血清白蛋白修饰紫杉醇,提高了水溶性.红外和紫外数据证实了修饰结果.     

考拉维酸对人血清白蛋白结构的影响

利用多种荧光光谱法、紫外光谱法并结合分子模拟等方法,表征了模拟生理条件下一种植物药活性组分考拉维酸(KA)影响人血清白蛋白(HSA)的结构信息.同步荧光及紫外光谱证实考拉维酸的存在影响了HSA的微环境;二维及三维荧光光谱表明考拉维酸可以猝灭HSA的内源荧光,使其构象发生变化.荧光偏振的测定提供了考拉维酸与HSA作用后生成的配合物弛豫时间与聚集特性的信息,揭示KA的存在使HSA的流动性和微粘度发生变化.定量求得不同温度下(298、308和318 K)考拉维酸与HSA作用的键合参数和热力学参数.分子模拟表明考拉维酸键合位点于HSA分子的疏水腔内,并与赖氨酸Lys195和天冬氨酸Asp451形成三个氢键,与HSA的键合模式主要是疏水作用;位点竞争实验证明考拉维酸在HSA亚结构域的位点II位发生作用.另外,获得的相关物理化学参数从分子水平上揭示了考拉维酸与HSA相互作用的机制.结果表明,HSA对考拉维酸有较强的结合能力,提示人血清白蛋白对考拉维酸可起到储存和转运的作用.     

血清蛋白-荧光素复合物单扫极谱波与应用

在0．08mol／L的HAc中，荧光素与牛血清白蛋白(BSA)或人血清白蛋白(HSA)相互作用形成复合物。复合物使荧光素在-0．58V(vs．SCE)处的还原峰电流增大，峰电流的增大值与加入的BSA或HSA的浓度在一定的范围内呈线性关系。BSA在2—24μg／mL范围内呈线性关系，检出限为1μg／mL；HSA在2—22μg／mL范围里呈线性关系，检出限为0．8μg／mL。应用该法测定了人血清蛋白样品，结果令人满意。     

人血清白蛋白柱上药物的手性拆分

考察了４种酸性药物和１种中性药物对映体在人血清白蛋白手性固定相上的保留行为。这５种药物与人血清白蛋白结合的亲和力高，难于实现快速分离，作者提出在流动相中加入短链脂肪酸－正己酸，可快速手性拆分非诺洛芬、萘普生和布洛芬。酮基布洛芬对映体分离选择性随乙腈浓度升高而增大，流动相中加入适量异丙醇可使对映体选择性大大增加（α～１．２３），华法令同样可取得很好分离。     

洛美沙星与人血清白蛋白的相互作用机理

利用荧光及紫外光谱法研究了水溶液中洛美沙星(LMX)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用机理. 结果表明洛美沙星对人血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用, 其猝灭类型主要为静态猝灭. 在不同温度下求得了洛美沙星与人血清白蛋白的结合常数K, 发现随反应温度上升K值下降. 由热力学参数确定了洛美沙星与人血清白蛋白的结合作用主要为色散力. 用同步荧光技术考察了洛美沙星对人血清白蛋白构象的影响, 又根据Fōrster理论, 测得了洛美沙星与人血清白蛋白之间的能量转移效率, 相互结合距离. 进一步证明了该反应是单一静态猝灭过程, 阐述了其猝灭机理是通过能量转移产生的.     

丁基锡化合物与人血清白蛋白相互作用的研究

通过紫外、荧光和CD光谱, 研究了船体防污漆中主要防污成分——三丁基锡(TBT)化合物及其降解产物——一丁基锡(MBT)和二丁基锡(DBT)与人血清白蛋白(HSA)相互作用的方式与程度, 考察了浓度、酸度、有机溶剂和离子强度等因素对相互作用的影响. 结果表明, 丁基锡与HSA的相互作用是双重的, 既有丁基锡中锡离子与HSA的配位作用, 又有丁基锡中丁基基团的疏水作用, 导致HSA二级结构破坏, α-螺旋结构减少和构象转变. 一般情况下, MBT以配位作用为主, TBT以疏水作用为主, DBT两者兼而有之.     

茜素红S与人血清白蛋白相互作用的分光光度研究

在ｐＨ４．３左右的Ｂｒｉｔｏｎ－Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（Ｂ－Ｒ）缓冲溶液中,茜素红Ｓ（ＡＲＳ）与人血清白蛋白（ＨＳＡ）结合,生成红色的复合物,吸光度值与ＨＳＡ含量呈线性关系。复合物的吸收峰值λｍａｘ为５３０ｎｍ,比ＡＲＳ试剂本身红移１１０ｎｍ。其表观摩尔吸光系数ε＝１．０×１０４Ｌ·ｍｏｌ－１·ｃｍ－１。ＨＳＡ标准曲线在其质量浓度１０～９００ｍｇ／Ｌ间呈线性关系,最低检出限为３ｍｇ／Ｌ。研究了该配合物用于蛋白质分光光度法测定的基本条件。应用该法测定了人血清样品,回收率在９６．９％～１０２．１％范围内。实验表明该反应选择性、重现性和对照性均好,操作简便,适用测定浓度范围宽     

吡虫啉与人血清白蛋白相互作用热力学行为

在模拟人体生理条件下,综合利用荧光光谱、紫外吸收光谱、圆二色谱和分子模拟等方法,研究了吡虫啉(IMI)和人血清白蛋白(HSA)相互作用的热力学行为。荧光光谱和紫外吸收光谱的分析表明：吡虫啉能有效猝灭HSA的内源荧光,猝灭机制为静态猝灭;通过所获取的相互作用热力学参数,可知两者之间的相互作用是一个吉布斯自由能降低的自发过程,且二者之间的主要作用力为氢键和范德华力。位点竞争实验和分子模拟的结果表明：吡虫啉在HSA的主要结合位置为位点?。圆二色谱、同步荧光光谱和三维荧光的分析发现：吡虫啉引起HSA的构象发生改变,其α-螺旋含量降低,无规卷曲含量升高,肽链结构在吡虫啉的作用下有所伸展。     

流动注射化学发光法灵敏检测人血清白蛋白

基于人血清白蛋白(HSA)在碱性介质中对luminol-H2O2化学发光体系有很强的增敏作用,提出了一种流动注射化学发光测定HSA的新方法。在优化条件下,HSA的线性范围为7.5×10-10～2.8×10-7mol/L,检出限为9.1×10-11mol/L,样品检测频率达102个/h。对2.0×10-8mol/L HSA平行测定11次,RSD为0.9%。方法可应用于实际样品人血清中HSA含量的测定。结合化学发光光谱和紫外可见吸收光谱,对该反应机理进行了探讨。     

表面等离子体共振法检测人血清白蛋白抗体活性

表面等离子体共振法是研究生物大分子间相互作用的有效方法之一,和非直接方法（如酶联免疫）相比,具有实时、快速和免标记等特点。我们在甲羧基化葡聚糖修饰的传感片表面直接交联固一人血清白蛋白（ＨＳＡ）,用于ａｎｔｉ－ＨＳＡ抗体活性的检测,并用Ｈ３ＰＯ４（０．１ｍｏｌ／Ｌ）溶液再生。结果表明表面等离子体共振（ＳＰＲ）生物传感器能快速实时检测ａｎｔｉ－ＨＳＡ抗体的活性,且传感片能够重复使用１００次以上。     

刚果红与血清白蛋白相互作用的极谱分析

在pH4．7HAc-NaAc缓冲溶液中，刚果红与蛋白质(BSA或HSA)作用形成络合物，使刚果红-0．35V(vs SCE)的还原峰电流下降，峰电流的降低值同所加的BSA或HSA质量浓度在一定范围内呈线性关系；BSA和HSA的线性范围分别为0．5～12mg／L和0．5～11mg／L，检出限分别为0．25和0．20mg／L；运用该法测定了人血清白蛋白样品，结果令人满意。     

喹诺酮类药物对人血清白蛋白的荧光猝灭研究

观察了喹诺酮药物萘啶酸及氟哌酸对人血清白蛋白荧光的猝灭现象。根据药物对天然白蛋白及变性白蛋白荧光猝灭的不同表现,研究了萘啶酸和氟哌酸对人血清白蛋白荧光的猝灭机理,并探讨了药物与血清白蛋白的结合情况。     

甲磺酸培氟沙星与人血清白蛋白相互作用研究

以光谱技术和微量热技术相结合的方法研究水溶液中甲磺酸培氟沙星分子及其铜离子存在时与人血清白蛋白之间结合作用的机制,用荧光淬灭法测得两反应的结合常数分别为K＝1.7 × l0⁵L.mol^-1和1.61×10⁵L.mol^-1，结合位点数1.05和1.5。甲磺酸培氟沙星对人血清白蛋白的猝灭为静态猝灭。依据Fōrster非辐射能量转移机制，得到甲磺酸培氟沙星—人血清白蛋白间的结合距离。用同步荧光技术考察甲磺酸培氟沙星对人血清白蛋白构象的影响。微量热法测得甲磺酸培氟沙星与人血清白蛋白反应的△H≈0, △S﹥0 表明其作用力主要为疏水力,而甲磺酸培氟沙星分子在铜离子存在时与人血清白蛋白反应的△H﹤0并且△S﹥0表明主要是静电作用。由于焓熵互补的作用,两反应的自由能没有发生大的变化。