高效液相色谱与飞行时间质谱联用技术研究甲基对硫磷的细菌降解产物

用青岛曹家汶河口沉积物中分离出的细菌L-10(希瓦氏菌属)进行了水体中甲基对硫磷的细菌降解研究。研究表明,该菌对甲基对硫磷具有显著的降解性。采用高效液相色谱/飞行时间质谱(HPLC-TOF-MS)联用技术对甲基对硫磷及其细菌降解产物进行了分析。样品经SPE-C18小柱富集分离后,进行液相色谱和在线电喷雾飞行时间质谱分析。采用C18反相色谱柱(15 cm×4.6 mm i.d.5μm),线性梯度为:0 m in乙腈/水(30/70),5 m in乙腈/水(30/70),20 m in乙腈/水(80/20),25 m in乙腈/水(80/20);流速0.8 m l/m in,甲酸铵缓冲溶液浓度为0.1%(V/V);电喷雾正离子(ESI)模式,m/z扫描范围50~1000进行TOF-MS扫描、测定,测定结果用AnalystQS软件进行分析。结果表明,与甲基对硫磷光降解产生甲基对氧磷和对硝基酚不同,在降解菌L-10的存在下,甲基对硫磷发生了取代、氧化、还原等一系列反应,产生了相应的降解产物。降解过程的机理很复杂,从甲基对硫磷及其降解产物的分子结构式来分析,推断可能与细菌本身的代谢有关。     

高效液相色谱与飞行时间质谱联用技术研究

用青岛曹家汶河口沉积物中分离出的细菌L-10(希瓦氏菌属)进行了水体中甲基对硫磷的细菌降解研究.研究表明,该菌对甲基对硫磷具有显著的降解性.采用高效液相色谱/飞行时间质谱(HPLC-TOF-MS)联用技术对甲基对硫磷及其细菌降解产物进行了分析.样品经SPE-C18小柱富集分离后,进行液相色谱和在线电喷雾飞行时间质谱分析.采用C18反相色谱柱(15 cm×4.6 mm i.d. 5 μm), 线性梯度为0 min 乙腈/水(30/70),5 min 乙腈/水(30/70),20 min 乙腈/水(80/20),25 min 乙腈/水(80/20);流速0.8 ml/min,甲酸铵缓冲溶液浓度为0.1% (V/V);电喷雾正离子(ESI)模式,m/z扫描范围50～1000进行TOF-MS扫描、测定,测定结果用Analyst QS软件进行分析.结果表明,与甲基对硫磷光降解产生甲基对氧磷和对硝基酚不同,在降解菌L-10的存在下,甲基对硫磷发生了取代、氧化、还原等一系列反应,产生了相应的降解产物.降解过程的机理很复杂,从甲基对硫磷及其降解产物的分子结构式来分析,推断可能与细菌本身的代谢有关.     

高效液相色谱-飞行时间质谱法筛查大豆中残留的多种除草剂和杀虫剂

应用高效液相色谱-飞行时间质谱建立了筛查大豆中77种除草剂和杀虫剂残留的新方法。在不同添加浓度下获得了精确的分子离子质量,质量偏差的绝对值低于3×10-6。所有除草剂和杀虫剂在0.03～1.00 mg/kg范围内线性关系良好（r≥0.99）。除一些除草剂外,多数除草剂和杀虫剂的添加回收率为60%～120%,在大豆基质中的检测限为0.003～0.026 mg/kg。该方法适合于大豆中多种除草剂和杀虫剂残留的分析检测需要,方法简便、高效、准确。     

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法快速鉴定甘舒诺丹胶囊化学成分

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱（UPLC-Q-TOF/MS）法对甘舒诺丹胶囊的化学成分进行快速鉴定。根据质谱数据结合自建数据库,利用相对分子质量、碎片离子信息以及裂解规律等方式鉴定甘舒诺丹胶囊中的化学成分,应用UNIFI 2.0软件的二元比较功能实现了各化合物的归属。从甘舒诺丹胶囊中鉴定出76种化学成分,包括21种醌类成分,18种黄酮类成分,11种有机酸类成分,7种萜类成分,3种香豆素类成分,1种木脂素类成分,15种其它成分,全面反映了甘舒诺丹胶囊中具有药理活性的化学物质和各个药材的特征性成分,为中药复方胶囊化学成分的快速鉴定、药效物质基础的发现以及临床的合理应用提供了数据参考。     

超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法筛查水果中多种农药残留

应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-Tof MS)建立了三华李和葡萄等水果中34种农药残留的的筛查方法。样品经QuEChERS净化处理,以电喷雾(ESI)正模式电离,UPLC-Q-Tof MS筛查检测。结果表明,大部分农药获得了精确的分子离子质量,质量偏差的绝对值低于3×10-6;34种农药在0.005～1.0 mg/L范围内线性关系良好(r≥0.99),方法检出限为0.002～0.027mg/kg;在0.05 mg/kg和0.10 mg/kg两个添加水平,平均回收率(n=6)在45.7%～121.8%之间,相对标准偏差(RSD)在2.3%～14%之间。该方法适用于三华李和葡萄等水果中多种农药残留的快速筛查检测。     

超高效液相色谱-飞行时间-串联质谱法用于大白菜叶片中的脂质成分分析

建立了超高效液相色谱-飞行时间-串联质谱(UPLC-TOF-MS/MS)分析大白菜叶片中脂质的种类、结构、脂肪酸组成并检测其相对含量的方法。以Acquity UPLCTMBEH C8色谱柱为固定相,采用飞行时间质谱全扫描-信息关联采集-子离子扫描(TOF-MS scan-IDA-product ion scan)复合模式实现一次进样分析,同时获得脂质的一级和二级质谱信息。在大白菜叶片中共鉴定得到232种脂质,包含104种磷脂、63种糖脂和65种甘油酯。其中,磷脂、糖脂和甘油酯中的主要成分分别为磷脂酰胆碱、单半乳糖二酰甘油和甘油二酯、甘油三酯。结果表明,该方法具有灵敏度高、准确度高和高通量等优点,为植物脂质的代谢研究提供了可靠的分析技术平台,并为进一步的脂质生物学功能研究奠定了基础。     

QuEChERS/高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法测定巧克力中的18种合成大麻素

建立了检测巧克力中18种合成大麻素的QuEChERS/高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法。通过优化提取溶剂种类、提取条件和净化条件,确定200.0 mg巧克力采用1 mL甲醇超声提取10 min,取上层清液加入0.05 g C₁₈和0.05 g PSA净化后,以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用ZORBAX Eclipse Plus C₁₈(3.0 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱进行色谱分离,利用四极杆-飞行时间质谱检测。18种合成大麻素在11 min内实现了分离,5F-EMB-PICA与5F-MDMB-PICA同分异构体通过色谱保留时间和二级质谱碎片实现分辨;5F-EMB-PINACA与5F-ADB同分异构体通过二级质谱碎片实现分辨。18种合成大麻素在1～200μg/L范围内呈良好线性关系,相关系数均不小于0.997 0,检出限为0.02～0.20μg/L,定量下限为0.07～0.66μg/L,在50、100、150μg/kg加标水平下样品的回收率为86.2%～104%,仪器的相对标准偏差(RSD)为0.040%...     

快速高分离液相色谱-串联质谱法检测原乳中活性β-内酰胺酶

建立了原乳中活性β-内酰胺酶拮抗剂的快速高分离液相色谱-串联质谱(RRLC-MS/MS)检测方法.利用活性β-内酰胺酶能够酶解青霉素族药物的特性,在原乳中加入适量氨苄青霉素,酶解1 h后,检测原乳中氨苄青霉素酶解率,定性检测活性目标物.试样中氨苄青霉素经乙腈溶液提取,HLB固相萃取柱净化和浓缩后,RRLC-MS/MS多反应监测模式定性与定量分析.本方法对活性β-内酰胺酶检出限为4 U/mL;对原乳中添加1 mg/kg水平氨苄青霉素的加标回收率为92.3%～95.5%;相对标准偏差RSD≤10%(n=6).本方法的定性结果与生物杯碟法完全一致.     

高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中的阿莫西林残留量

建立了高效液相色谱-串联质谱测定蜂蜜中阿莫西林残留的方法。样品用磷酸氢二钾溶液提取,经固相萃取柱进行净化提取后,以C18柱为分离柱,甲醇和0.1%(v/v)甲酸水溶液为流动相,用串联质谱仪检测,选择1个母离子和2个子离子进行选择反应监测,选择信号最强的子离子进行定量测定。该方法采用外标法定量,在2.0～100.0 μg/L范围内,阿莫西林的峰面积与其质量浓度呈良好的线性关系(r2＞0.99),方法的检出限和定量限分别为2.0 μg/kg和5.0 μg/kg,回收率范围为74.2%～81.7%,日内精密度范围为2.8%～7.8%,日间精密度范围为9.1%～11.3%。该方法简便快捷,可以用于蜂蜜中阿莫西林残留量的测定。     

高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定猪肉中20种兽药残留量

采用高效液相色谱法(HPLC)和四极杆飞行时间质谱法(TOFMS)联用技术测定了猪肉组织中20种兽药的残留量,包括16种磺胺类药物和4种β-受体激动剂类药物。猪肉样品(2.00g)用基质固相分散法处理后先后2次用乙腈-甲酸(99+1)混合液(每次20mL)振荡提取5min,离心分离后,取其上清液吹氮至近干,用甲醇-水(1+9)溶液1.0mL溶解浓缩物。经过滤后在所选仪器工作条件下进行HPLC-TOFMS分析。结果表明:20种目标化合物的线性范围均在0.2~400μg·L-1之间,其测定下限(10S/N)在0.4~15μg·kg-1之间。在3个浓度水平上用标准加入法进行回收试验,测得回收率在70.4%~109%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在6.7%~19%之间。     

超高压液相色谱-飞行时间质谱法对比分析沙丁胺醇在猪尿液和血浆中的代谢产物

采用高分辨质谱及代谢物鉴定软件,系统分析了猪尿液和血浆中沙丁胺醇代谢产物。样品用乙腈沉淀蛋白,经离心过滤后,采用Agilent Plus C18色谱柱,以乙腈和醋酸溶液(含0.2%醋酸)作为流动相进行梯度洗脱,采用高分辨质谱(UHPLC-QTOF MS)±离子模式进行检测,利用软件Agilent MassHunter MetaboliteID与人工相结合分析检测数据。结果表明,经灌胃给药后猪尿液中鉴定出沙丁胺醇原形药和葡糖醛酸化、苯环羟基化、N-氧化、苯环甲氧基化、羟基化脱水共5个代谢产物,其中2个代谢物未见文献报道;而血浆中仅检测原型药物和2个代谢物,包括沙丁胺醇的葡糖醛酸化和N-氧化产物。     

液相色谱-离子阱-飞行时间质谱法定性分析未知着色剂

使用理化性质鉴别、紫外可见分光光度计、超快速液相色谱仪-二极管阵列检测器-离子阱-飞行时间串联质谱仪(UFLC-PDA-MS-IT-TOF)共同对用于"染色橙"的未知着色剂进行定性分析,并用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)进行确证。通过紫外光谱确定未知着色剂特征吸收波长,再用液相色谱分离,用PDA检测器可知其出峰时间,用质谱检测可知与其它干扰物质是否分离。在确定干扰物质与未知着色剂进行分离后,可以得到未知着色剂的分子离子峰和五级质谱碎片,根据碎片离子,推导出了裂解途径,并使用分子式软件预测了未知着色剂分子式。综合实验结果,最后定性了用于"染色橙"的未知着色剂为"橘红2号",其分子式为C18H16N2O3(m/z 309.1932)。用超高效液相色谱-串联质谱将未知着色剂与橘红2号标准品的保留时间、离子对m/z 309.3>153.3和m/z 309.3>278.3及离子比率进行比对,确证定性结果是准确的。本实验为未知物定性提供了一个有效的思路和方法。     

高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱法鉴定碱性嫩黄中的杂质及高效液相色谱法制备碱性嫩黄标准物质

该文建立了一种高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱（HPLC-IT-TOF-MS）分析非法食品添加剂碱性嫩黄样品中杂质成分的方法。对碱性嫩黄样品中的杂质进行多级质谱分析,根据各碎片离子的精确质量数推测出该杂质的具体组成,确定这个杂质为4-（亚氨基（4-（甲基氨基）苯基）甲基）-N,N-二甲基苯胺盐酸盐,从而推断出碱性嫩黄的合成方法及杂质的可能来源。同时建立了制备碱性嫩黄标准物质的方法,分别选用了粒径为10μm和5μm的制备液相色谱柱进行两次制备高效液相色谱分离纯化,进样量分别为1 mL和500μL,最终采用分析型高效液相色谱峰面积归一化法得到纯度为99.52%的碱性嫩黄标准物质。扣除0.34%水分含量,0.13%灰分含量,采用质量平衡法确定制备的物质最终纯度为99.05%,并通过UV、IR、LC-MS和NMR四大谱图进行化学结构的确认。该方法简单、高效,可拓展应用于其他非法食品添加剂标准物质的制备。     

液相色谱-高分辨飞行时间质谱法快速筛查食品中香港规例农药残留

建立了液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱法测定食品中249种香港《食物内残余除害剂规例》农药残留的筛查方法.样品经1％甲酸-乙腈提取,改进的QuEChERS方法提取净化,Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱(150 mmx3 mmi.d.,2.7 μm)分离,流动相为0.1％甲酸水和甲醇溶液,梯度洗脱,电喷雾离子源,正模式下侦测,建立了一级精确质量和二级碎片离子质谱数据库,并且对11种典型食品的基质效应进行考察,基质匹配外标法定量.结果表明,在10～ 500 μg/kg浓度范围内,249种目标化合物线性关系良好(r＞0.99),方法定量限为10～ 100 μg/kg(S/N≥10),在大米、香菇、黄豆、菠菜、西红柿、西兰花、柚子、韭菜、胡萝卜、生菜、黄瓜中3个添加水平的平均回收率范围分别为23.2％～133.2％,35.6％～137.6％和38.7％～140.2％,相对标准偏差(RSD)在1.3％ ～19.2％之间(n=6).方法操作简便,耗时短,灵敏度高,稳定性好,用于日常筛查检测可显著降低检测成本,具有实际应用价值.     

超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法测定牛奶中51种激素

基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS),建立了牛奶中51种激素的高通量筛选和定量方法,并采用信息依赖型采集(IDA)模式建立了51种激素的定性筛选数据库。牛奶样品经乙腈沉淀蛋白后,采用氧化锆包覆硅胶(Z-Sep)填料进一步净化。采用Waters Acquity BEH C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱进行分离,UPLC-Q-TOF MS测定,基质匹配曲线外标法定量。牛奶中51种激素的线性范围为0.10～500μg/L,相关系数(r2)均大于0.99;检出限为0.03～1.67μg/kg,定量下限为0.10～5.00μg/kg;在5、10、50μg/kg加标水平下的回收率为44.6%～120%,相对标准偏差为0.90%～20%。利用该方法测定了20份市售牛奶样品,其中19份样品检出孕酮,检出量为0.80～4.51μg/kg;1份样品中含有痕量的氢化可的松,检出量为0.62μg/kg;其他激素均未检出。该方法具有良好的线性、灵敏度、准确度和精密度,可用于多种激素的同时定性定量分析。     

高效液相色谱-离子阱质谱法测定尿液中β2-受体激动剂及β-受体阻断剂

建立了尿液中23种β2-受体激动剂及5种β-受体阻断剂的高效液相色谱-离子阱质谱(HPLC-IT-MS)测定方法。尿液样品采用冷冻高速离心沉淀蛋白,上清液过ExtrelutTM硅藻土柱,用乙酸乙酯洗脱后,洗脱液经旋转蒸发仪浓缩并复溶待测。HPLC分离采用AtlantisT3-150 mm色谱柱,以甲醇和含0.1%甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱,IT-MS采用电喷雾离子源在多反应离子监测模式下测定。定量分析选择9种经过氘代同位素标记的β2-受体激动剂为内标。各化合物的线性范围为0.005～0.16 mg/L,尿液中的检出限均能达到0.2 μg/L。空白尿液样品中不同加标水平的回收率为57.1%～127.1%,相对标准偏差为1.1%～31.1%。该方法简便快速,灵敏度高,适用于人或动物尿液中23种β2-受体激动剂及5种β-受体阻断剂的定性和定量分析。     

QuEChERS/超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法筛查鲜桃中的农药残留

采用QuEChERS前处理技术结合超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-QTOF MS）筛查了鲜桃中的农药残留。鲜桃均质后经1%乙酸乙腈提取,加入无水醋酸钠和无水硫酸镁,以PSA和石墨化炭黑（Carb）净化,利用UPLC-QTOF MS进行数据采集,经UNIFI软件进行峰谱识别后,利用自建农药谱库进行检索筛查。在23份鲜桃中检出33种农药,其中杀虫剂占49%,抗菌剂占33%,其余为除草剂和植物生长调节剂。所有样本中均筛查出一种或多种农药,其中18种农药有国家限量标准,2份鲜桃中的抗菌剂多菌灵和氟硅唑分别超过标准限量。研究表明UPLC-QTOF MS高分辨质谱技术是筛查水果中农药残留的有效手段,鲜桃中存在多种农药残留,需进一步对其残留水平和暴露风险进行研究。     

高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中9种β_2-受体激动剂残留量

采用高效液相色谱-串联质谱法测定了猪肉中9种β-受体激动剂的残留量。样品经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解后加入高氯酸沉淀蛋白并离心,取上清液过PCX阳离子固相萃取小柱净化,用氨水-甲醇(5+95)混合液洗脱,氮气吹干后用乙腈定容至1 mL。以CAPCELL PAK CR色谱柱为分离柱,以10mmol·L-1乙酸铵溶液-乙腈(55+45)混合溶液(含体积分数为0.1%的甲酸)为流动相进行洗脱,采用电喷雾正离子源及选择反应监测模式进行测定,内标法进行定量。9种β-受体激动剂的质量浓度在4.00~100μg·L-1范围内与其峰面积呈线性关系,方法的检出限(3S/N)在0.09~0.50μg·L-1之间。对空白样品进行加标回收试验,回收率在83.2%~102%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在5.0%~12%之间。     

高效液相色谱-四极杆/飞行时间质谱法测定粮谷中茚嗪氟草胺及其代谢物

建立了高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF/MS)同时测定粮谷中茚嗪氟草胺及其4种代谢物(1-氟乙基三嗪二胺、茚嗪氟草胺-乙酸、三嗪-茚满酮、茚嗪氟草胺-烯烃)残留量的方法.样品经乙腈提取、盐析离心分层后,取上清液进行净化.在优化的色谱及质谱条件下,采用ESI离子源正离子扫描方式进行数据采集.5种化...     

成骨细胞膜色谱/超高效液相色谱-飞行时间质谱法快速筛选六味地黄汤抗骨质疏松活性成分

采用成骨细胞建立了细胞膜色谱/超高效液相色谱-飞行时间质谱（CMC/UPLC-TOF/MS）的分析方法。该法可快速筛选中药方剂六味地黄汤中潜在的抗骨质疏松活性成分，通过细胞试验和斑马鱼骨质疏松模型试验验证了筛选结果梓醇的体内外药效作用。以六味地黄汤水提物（90 g/L）为样品，通过CMC/UPLC-TOF/MS分析，快速鉴别细胞膜色谱柱保留成分群，高选择性获取六味地黄汤中16种潜在活性成分。该文以前沿色谱法分析梓醇、丹皮酚、齐墩果酸与细胞膜色谱固定相的亲和强度，选择亲和强度和含量较高的梓醇进行体内外药效验证，发现梓醇在对小鼠成骨细胞有显著促生长作用，能提高骨质疏松斑马鱼头部骨矿化面积。CMC/UPLC-TOF/MS筛选方法能在复杂中药方剂中快速得到抗骨质疏松活性成分，具有操作简便、快速、高效灵敏的优势。