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反相液相色谱对多肽的分离、纯化与制备 总被引:17,自引:2,他引:17
用反相高效液相色谱(RPLC)对两种化学合成多肽--32肽和21肽进行了分离、纯化和制备。在用分析型RPLC色谱柱对多肽样品的制备过程中,对其进样量和洗脱梯度进行了选择。每次进样量为5mg,在最优化色谱条件下,用RPLC一步就可对21肽进行分离纯化,其纯度达到98.6%。而32肽由于样品组分更加复杂,RPLC一步纯化后其纯度仅有80%。通过对色谱分离条件的再次优化,对32肽进行二次分离纯化,纯度达杂,RPLC一步纯化后其纯度仅有80%。通过对色谱分离条件的再次优化,对32肽进行二次分离纯化,纯度达到96.4%。在其最优化条件下,通过多次样品收集和冷冻干燥,分别制备了高纯度的21肽和32肽各100mg。 相似文献
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反相液相色谱用球形共聚物柱填料 总被引:2,自引:0,他引:2
采用新颖聚合工艺制备用于反相高效液相色谱柱填料的乙基苯乙烯-二乙烯苯球形共聚物,不需使用备有高速搅拌的混匀器和特殊的筛析设备,聚合物粒径的95%在3~7μm之间,测算了渗透性、柱效和峰不对称性等柱参数,并通过分离实例说明该填料对胺类、酚类和芳烃类具有优良分离性能。 相似文献
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多肽和蛋白质的反相高效液相色谱研究--色谱行为的多样性 总被引:1,自引:0,他引:1
以C8柱为固定相,研究了微管结合蛋白2中两段重要肽段(肽1,肽2)和猪胰岛素在反相色谱上的保留行为。当以甲醇溶液为流动相时,猪胰岛素保留因子的对数值(lnK’)随流动相有机溶剂体积分数(ψ)的变化呈现很好的线性关系。当以乙腈为流动相测定肽1的lnK’随ψ变化关系时,所得结果显示inK’与ψ呈现良好的二次曲线关系。以乙腈为流动相测定肽1和肽2和Van’t Hoff曲线(lnk’与1/T的关系图)时, 相似文献
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反相液相色谱在蛋白质及多肽分离分析中的应用 总被引:22,自引:0,他引:22
反相液相色谱是一种以疏水作用为基础的色谱分离模式。由于它具有分辨率高、重复性好、回收率高等优点,在蛋白质及多肽的分离分析中得到了极为广泛的应用。本文简要介绍了反相液相色谱及其分离机理,对其在蛋白质和多肽研究中的应用如分离纯化、肽图分析、酶活测定、构象变化检测及疏水作用研究等作系统综述,并展望了反相液相色谱在这一领域的发展前景。 相似文献
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反相高效液相色谱分离黄酮类化合物的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
根据18种黄酮类化合物在C_3、C_(18)和CN三种固定相上的梯度洗脱反相高效液相色谱分离的研究,建立了一种连续快速分离植物提取物中黄酮类化合物的方法。此法可在55 min内完成一个样品的分离及柱平衡。最佳波长和温度分别是280nm和35℃。 相似文献
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研究了反相液相色谱中负峰现象及产生的原理,应用计量置换作用原理解释了样品在色谱柱中的计量置换保留行为;应用负峰法测试了甲基脂肪酮各组分的含量.本研究采用Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm), 流动相为V(甲醇)∶ V(水, 含0.01 mmol/L磺基水杨酸)=60∶ 40, 紫外检测器(λsig=310 nm, λref=275 nm). 本方法简便,线性相关系数r均大于0.9993; 甲基酮的定量下限为0.041 μg; 相对标准偏差为0.52%~0.80%. 相似文献
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色谱流出曲线的二阶中心矩μ2和三阶中心矩μ3以及描述峰形非对称程度的偏态系数∑k=μ3/μ1.52是反映色谱峰形的重要参数。从液相色谱过程动力学方程出发,运用电子计算机证明了在线性非理想条件下高效液相色谱体系中不同保留值组分在柱末端峰形的分布基本一致的结论。 相似文献
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在未使用离子对试剂和高盐缓冲液条件下,采用亲水性C_(18)反相液相色谱柱,以甲醇-水体系为流动相,建立了面粉及面粉制品中乙二胺四乙酸二钠含量的高效液相色谱测定方法。样品采用水溶液提取,在超声辅助下与三氯化铁反应生成稳定的衍生产物,用三氯甲烷净化衍生产物。采用高效液相色谱法以pH 4.0甲醇-水溶液(10∶90,体积比)为流动相,亲水性C_(18)反相液相色谱柱为固定相,260 nm波长下测定面粉及面粉制品中乙二胺四乙酸二钠含量。乙二胺四乙酸二钠的质量浓度在1.0~50.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,其相关系数为0.999 6,检出限为3.0 mg/kg,定量下限为10.0 mg/kg。面粉样品添加浓度在10.0~200 mg/kg范围内,加标回收率为95.0%~103%,相对标准偏差为4.0%~6.3%,可满足面粉及面制品中乙二胺四乙酸二钠的快速检测和定量分析要求。 相似文献
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唑来膦酸及其有关化合物的反相离子对高效液相色谱分离 总被引:6,自引:0,他引:6
采用反相离子对高效液相色谱法研究了唑来膦酸及其有关化合物的色谱分析与分离方法。优化的分离条件:以Hypersil C8柱为固定相,以甲醇-5 mmol/L磷酸二氢钠缓冲液(含6 mmol/L四丁基溴化铵溶液,用氢氧化钠溶液调节pH至7.0)(体积比为20∶80)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL/min,紫外检测波长为220 nm,柱温为室温。在该色谱条件下,唑来膦酸与有关化合物(包括其合成过程中残余的原料咪唑乙酸和其他氧化分解产物)的分离良好,与保留时间最接近的杂质峰的分离度大于2.5。该方法不需进 相似文献
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用反相高效液相色谱法纯化白细胞介素-2条件初探胡明(沈阳军区军事医学研究所沈阳110031)关键词反相高效液相色谱法,白细胞介素-21前言高效液相色谱法(HPLC)是一项分辨率很高的液相色谱技术,具有速度快,灵敏度高、样品可回收等优点。除被广泛地应用... 相似文献
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反相高效液相色谱法测定苹果中槲皮素的含量 总被引:3,自引:0,他引:3
采用反相高效液相色谱法测定了苹果肉和苹果皮中槲皮素的含量。将样品于-80 ℃冷冻24 h后,在2,6-二叔丁基对
甲酚的保护下加入6 mol/L盐酸制成匀浆,于90 ℃恒温水浴中回流水解2 h。水解液在反相ODS柱上分离,以甲醇-水(体积
比为55∶45,乙酸调pH值为3.3)为流动相,在波长370
nm处进行测定。结果表明:苹果肉中槲皮素的平均含量为3.11~10.78
μg/g;苹果皮中槲皮素的平均含量为253.57~744.59 μg/g;苹果肉中槲皮素的平均加标回收率为100.4%。该法操作简
便易行、结果准确可靠。 相似文献