浙江沿海大弹涂鱼、弹涂鱼的线粒体COI基因序列差异及其系统发育

为探讨浙江沿海大弹涂鱼和弹涂鱼线粒体细胞色素氧化酶I号(COI)基因序列差异及其系统发育, 对两者进行了COI扩增、测序和分析. 结果显示: 扩增得到大弹涂鱼、弹涂鱼COI基因序列长度分别为1554bp和1556bp; 大弹涂鱼和弹涂鱼COI基因序列中, 所占比例(分别为55.8%和56.0%)均高于 所占比例(分别为44.2%和44.0%); 大弹涂鱼和弹涂鱼的种内平均遗传距离分别为0.002和0.003, 两者的种间遗传距离为0.183. 构建的系统发育树显示, 大弹涂鱼与红狼牙虾虎鱼、孔虾虎鱼、犬齿背眼虾虎鱼聚为一簇(大弹涂鱼COI序列与三者的同源性分别为91.0%、92.0%和88.0%), 弹涂鱼与青弹涂鱼聚为一簇(两者COI序列同源性为99.0%)后与大弹涂鱼所在的簇相聚. 研究结果可为探讨大弹涂鱼、弹涂鱼的系统发育及建立基于COI序列的弹涂鱼类鉴定方法提供参考资料.     

鄱阳湖流域华溪蟹属DNA条形码

探讨DNA条形码分子标记作为华溪蟹属(Sinopotamon)淡水蟹类辅助分类工具的可行性。选取分布于鄱阳湖流域的6种华溪蟹属淡水蟹类78个样本,采用线粒体COI和16SrRNA基因片段以及ITS2核基因片段,作为分子标记,结合GenBank数据库中同属序列片段,经DNA提取、引物筛选、PCR扩增、产物纯化测序及测序数据处理和分析,在计算得到的遗传距离和所构建系统发生树进行华溪蟹DNA条形码标准基因的选择。在本实验涉及的淡水蟹类个体及类群的识别上,16SrRNA和ITS2基因片段不适宜作为DNA条形码标准基因,而COI基因片段结合GenBank部分华溪蟹属序列数据分析,可区分本次研究所涉及的75%的物种。以线粒体COI基因片段为DNA条形码标准序列,可作为华溪蟹属淡水蟹类物种鉴定的辅助分类工具。     

三角帆蚌钩介幼虫体外培养及变态稚贝的形态变化

以超纯水为对照,利用普通温控培养箱,在(24.0±1.0)℃条件下对三角帆蚌钩介幼虫进行了15d的体外培养实验.结果显示:钩介幼虫排出体外24h内存活率显著下降为50.7%(p=0.006);A组(MEM高糖)、B组(RPMI1640)、C组(MEM 199)幼虫变态率分别为(7.5±3.9)%、(13.3±12.0)%、(42.1±10.0)%;D组(L-15)的幼虫变态率最高,为(66.1±3.8)%,极显著高于C组(p=0.007).相关分析表明,培养液中葡萄糖含量与钩介幼虫变态率存在显著负相关(r=-0.886).利用光镜和扫描电镜对体外培养变态发育的稚贝形态观察发现:稚贝双壳表面圆形凹陷数量和深度比幼虫显著减少,双壳边缘外套膜增厚,在外套膜、斧足表面分布有大量乳状突起,但形态不同.体外培养稚贝的外部形态和内部器官均发生了显著改变,完成了变态发育过程.     

鄱阳湖区淡水蚌类多样性格局

通过采集标本,对鄱阳湖区淡水蚌类的多样性格局进行了研究。结果表明:所有采样区域淡水蚌类共有14属40种,中国特有种有32种,洞穴丽蚌、圆顶珠蚌和蚶形无齿蚌在各采样区域都有分布。太子河、饶河、修河、信江和赣江的淡水蚌类分别是10属23种、8属17种、10属14种、12属27种和13属     

背瘤丽蚌繁殖特征及钩介幼虫形态

2004～2007年间,对鄱阳湖背瘤丽蚌(Lamprotula leai)种群组成、繁殖特性和钩介幼虫形态进行了研究。从背瘤丽蚌种群壳长组成看,优势壳长组为41～70mm,占总个体数的74.93%,年龄范围3～6龄。和历史资料比较,鄱阳湖背瘤丽蚌种群趋于小型化,低龄化。背瘤丽蚌主要繁殖特征为:雌雄异体,自然种群性比为11;最小性成熟个体雄性38mm,雌性34mm。繁殖周期为1年1次,繁殖期为2月中旬至5月,3～4月初为妊娠高峰期。繁殖力为115～504千粒/个(均值(328.09±145.73)千粒/个)。背瘤丽蚌育儿囊为四鳃型,钩介幼虫侧面观为半椭圆形,无壳钩,具4对感觉毛。     

弯弓蚌螨(Unionicola arcuata)线粒体12 S rRNA基因的序列分析

用线粒体12 S rRNA基因特异性引物,对鄱阳湖地区褶纹冠蚌内弯弓蚌螨的线粒体12 S rRNA基因进行PCR扩增和双向测序,经校对拼接后,获得全长为648 bp的弯弓蚌螨12 S rRNA基因全序列。A、T、G、C 4种碱基的平均含量分别为49.1%、25.6%、8.5%、16.8%,平均A+T含量(74.7%)明显高于G+C     

象山港黄墩支港菲律宾蛤仔种群COI和ITS1基因序列特征及遗传多样性分析

为了解象山港黄墩支港菲律宾蛤仔种质资源的遗传多样性现状, 采用COI和ITS1分子标记对该种群进行了基因序列特征和遗传多样性分析. 结果表明 在该种群30个个体中扩增得到的COI基因序列长度均为709bp, ITS1序列长度范围在693~729bp(共有746个位点). COI基因序列的位点中有670个保守位点(占94.50%)、39个变异位点(占5.50%); ITS1序列的位点中有保守位点671个(占89.95%)、变异位点62个(占8.31%)和缺失/插入位点13个(占1.74%). COI基因序列的保守性高于ITS1序列. 在COI基因序列中碱基(A+T)的占比(65.84%)高于(C+G), 而ITS1序列中则是碱基(A+T)占比(37.59%)低于(C+G). COI和ITS1序列的遗传距离分析均显示群体内遗传分化不明显. 基于COI基因序列和ITS1序列构建的遗传进化树显示 各科贝类分别相聚, 象山港菲律宾蛤仔位于帘蛤科的分支中, 其COI序列与杂色蛤进化关系最近. 遗传进化树中各种贝类的聚类关系与传统分类学结果相一致, 可作为分类的参考. COI和ITS1序列的平均核苷酸差异数分别为5.497和6.549, 核苷酸多样性指数分别为0.00775和0.00973, 单倍型数目分别为21和28, 单倍型多样性分别为0.963和0.993, 根据COI和ITS1两个序列计算得到的菲律宾蛤仔象山港群体单倍型多样性均大于0.5, 核苷酸多样性指数均大于0.005, 表明该种群遗传多样性丰富, 并处于稳定状态. 本研究结果补充了菲律宾蛤仔遗传多样性方面的研究资料, 并可为象山港菲律宾蛤仔种质资源保护和遗传育种提供理论基础.     

壬基酚对三角帆蚌的毒性效应

利用壬基酚对三角帆蚌进行急性毒性试验,获得三角帆蚌在壬基酚溶液中的安全浓度;在安全浓度范围内设定了2个浓度的实验组进行慢性毒性试验,并取蚌的鳃、肝脏、性腺进行石蜡切片观察。结果表明壬基酚对三角帆蚌的急性毒性24、48、72、96h的LC50分别为65.924、45.182、27.374和16.226mg·L-1,安全浓度为1.623mg·L-1。利用0.5和1.0mg·L-1壬基酚浓度进行慢性毒性试验21d后,三角帆蚌鳃和肝组织的损伤随壬基酚浓度增加而加深;而2种浓度壬基酚处理的精巢症状基本相似,表现为精原细胞破裂,精子外泄且大多数死亡,精子细胞数目减少,细胞排列紊乱,说明NP对三角帆蚌精巢的损伤比其它组织严重。 更多还原     

5种不同体色黄鳝RAPD的初步分析

应用RAPD技术对鄱阳湖区5种不同体色黄鳝进行了遗传多样性研究,结果发现,该物种种群总基因多样性(Ht)为0.272 4,各群体内的基因多样性(Hs)为0.1948,占总群体基因变异的71.51%,提示鄱阳湖黄鳝具有较高的遗传多样性,且遗传变异主要存在于群体内.结果还发现,5种不同体色黄鳝群体间的遗传距离在0.040 0-0.180 l之间,其中细花斑群体与黄黑斑群体之间的遗传距离最小,大花斑与隐花斑之间的遗传距离最大;群体间的遗传分化系数(Gst)为0.2849,这表明,5种不同体色群体间存在明显的遗传分化.     

褶纹冠蚌寄生蚌螨群落结构

通过对太湖、巢湖、鄱阳湖中褶纹冠蚌寄生蚌螨的感染调查，发现3个湖泊的褶纹冠蚌中有3种蚌螨寄生，但蚌螨群落组成不同。弯弓蚌螨是巢湖的绝对优势种，优势度指数为99．7％；太湖的优势种是Y纹蚌螨，优势度指数70．3％，次优势种为弯弓蚌螨，优势度指数23．4％；鄱阳湖优势种是Unionicola spp，优势度指数52．4％，次优势种为弯弓蚌螨，优势度指数29.5％。蚌螨在宿主褶纹冠蚌内都呈聚集分布，但3个湖泊中不同种寄生蚌螨的分布参数不同，说明其聚集强度不同。利用卡方对种间关联关系进行检验，结果表明鄱阳湖中Y纹蚌螨与弯弓蚌螨之间呈负关联关系（x^2=5．95〉x0.05^2 =3，84，V=-0．57），弯弓蚌螨与Unionicola spp．呈正关联关系（x^2=4．22〉x0.05^2=3．84，V=0．48）。由群落相似系数可以看出3个湖泊寄生蚌螨群落相似程度较低。     

泥蚶线粒体COI和16S rRNA基因片段序列研究

采用PCR技术扩增了泥蚶线粒体DNA的COI和16S rRNA基因片段,PCR产物经T载体连接后进行克隆、测序,用MEGA version 3.0软件计算这2个基因片段序列碱基组成.结果显示：COI和16S rRNA基因删除引物序列后分别得到660bp和548bp的核苷酸序列,T,C,A和G碱基含量分别为40.4%,14.7%,20.6%,24.3%和23.2%,25.9%,30.3%,20.6%.COI和16S rRNA基因片段对泥蚶不同地理种群的遗传分化的研究具有一定的应用价值.     

三角帆蚌肌肉凝集素及其活性

将三角帆蚌的肌肉凝集素粗提液与动物(草鱼、兔、老鼠、家鸡)及人的A、B、O、AB型共8种血红细胞悬液和部分细菌(枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)菌体进行凝集反应以检测其凝集活性,同时进行糖抑制、热稳定性及pH影响试验.结果表明:三角帆蚌肌肉凝集素能凝集实验用的8种红细胞,其中对兔红细胞凝集活力最强,为25;不能和供试的3种微生物发生凝集反应;三角帆蚌凝集索粗提物在pH 6.O-8.0之间有凝集活性,在pH 7.4时凝集活性最强;温度4-50℃,三角帆蚌凝集素都具有活性,处于20℃和30℃左右温度时的凝集素活力最强,60℃的水浴加热后凝集素完全失活;三角帆蚌凝集素凝集活性可被2.5 mg/mL的麦芽糖所抑制,而D-葡萄糖、D-果糖、蔗糖、乳糖则无影响.     

基于线粒体细胞色素b基因序列的阿尔金山野生双峰驼分子系统发育研究

目前对于野生双峰驼作为一个独立种的有效性还有着较多争议．研究测定了2头阿尔金山野生双峰驼个体的线粒体细胞色素b基因序列，并结合已有的双峰驼细胞色素b基因序列进行了系统发育分析．结果表明：现有的双峰驼分为2个种群：新疆种群和甘肃种群；2个种群间的遗传距离为2．4％～3．0％，尚未达到种间水平；阿尔金山野生双峰驼属于新疆种群，不能作为一个独立的有效种．     

水藓科植物遗传多样性研究

利用ISSR分子标记方法对不同地区的13份水藓科植物进行遗传多样性分析,结果表明,稳定且重复性高的7条引物共扩增出526条清晰的条带,其中518条具有多态性,平均多态性位点比率为98.47%.运用PopGen-32软件分析发现,等位基因数Na=1.736 3,有效等位基因数Ne=1.306 2,Nei基因的多样性与Shannon信息的指数分别为0.201 5和0.321 1,说明水藓科植物的遗传多样性比较丰富.13份水藓科植物的遗传分化系数Gst、遗传距离D与遗传一致度I分别为0.025 3、0.007 1和0.054 7,对其进行计算得知,不同属种间存有基因交流,但与种间变异相比,种群内部的遗传变异较大.通过NTSYS2.1软件对13份样本的亲缘关系进行聚类,可将其分为3类,且样本的遗传距离与地理位置有一定的相关性.     

池蝶蚌(Hyriopsis Schlegelii)线粒体DNA COII基因的序列分析

用细胞色素氧化酶Ⅱ基因特异性引物,对人工选育后的F3代池蝶蚌的线粒体细胞色素氧化酶Ⅱ基因进行PCR扩增和双向测序,在10个个体中均得到序列一致的细胞色素氧化酶Ⅱ基因序列,长度为681bp;A、T、G、C含量分别为19.4%(132个)、30.4%(207个)、38.9%(265个)和11.3%(77个),A+T含量(58.3%)明显高于G+C(41.7%)含量,与其它淡水珠蚌科种类相同基因片段的碱基含量相似;密码子上4种碱基使用出现偏倚性,密码子第1位上碱基G使用率高达38.8%,碱基T为29.5%;密码子第2位上碱基T的使用率为38.8%,碱基C的使用率低至15.9%;密码子第3位上碱基T的使用率高达48.5%,而碱基C的使用率仅为4%;第3位碱基T的使用率比第二位高,这种递增现象也出现在高等无脊椎动物昆虫的COⅡ上。BLAST结果显示池蝶蚌COⅡ与三角帆蚌具有较高的同源性,相似性为95%,MP法构建的分子系统进化树表明这两种淡水珍珠育珠蚌的亲缘关系最近。     

莲寄生潜根线虫的形态鉴定和越冬场所观察研究

在１９９８－２０００年间先后在南昌市郊和江西省广昌县发病莲田广泛调查,对寄生在莲根据部的潜根线虫进行了观察和测量鉴定,鉴定结果为Ｈｉｒｓｃｈｍａｎｎｉｅｌｌａ ｄｉｖｅｒｓａ。该种烟内新记录。同时对种藕及周边土壤分离得知,种藕藕节及种藕外围土壤是莲寄生潜根线虫越冬最主要的场所其中以雌虫和四龄幼虫所占例最大,为整个虫数的６４％－９０％。     

浙江省淡水鱼类寄生单殖吸虫——新种

本文报道我省淡水鱼类斑尾复鰕虎鳃上寄生的单殖吸虫指环虫属一新种,定名为二翼指环虫Dactylogyrus bialatus,文内详细描述该新种的虫体大小、形态特征、寄主种名及寄生部位.     

5种体色瓯江彩鲤线粒体COⅡ基因的序列差异和遗传标记研究

利用PCR方法扩增获得瓯江彩鲤（Cyprinus carpio var．color）线粒体DNA的COⅡ基因,测定该基因片段序列．分析了瓯江彩鲤“全红”、“粉玉”、“粉花”、“麻花”和“大花”共20只个体的序列核苷酸位点差异和遗传多态性．结果表明,“大花”和“全红”遗传多样性最为丰富,“粉花”的遗传多样性相对贫乏．在长度为604bp的基因片段中,共检测到9个多态性核苷酸位点（占1．49%）,20只个体具有4种基因型,5种体色各自的平均核苷酸位点差异分别为0．38％、0．2％、0、0．13％和0．47％．UPGMA分子系统聚类树显示,“粉花”、“麻花”和“粉玉”的遗传关系接近;“全红”相对独立成一支,与其他4种体色瓯江彩鲤的遗传关系较远．COⅡ基因可以作为区分三分支群体的遗传标记．     

5种体色瓯江彩鲤线粒体COII基因的序列差异和遗传标记研究

利用PCR方法扩增获得瓯江彩鲤（Cyprinus carpio var．color）线粒体DNA的COⅡ基因,测定该基因片段序列．分析了瓯江彩鲤“全红”、“粉玉”、“粉花”、“麻花”和“大花”共20只个体的序列核苷酸位点差异和遗传多态性．结果表明,“大花”和“全红”遗传多样性最为丰富,“粉花”的遗传多样性相对贫乏．在长度为604bp的基因片段中,共检测到9个多态性核苷酸位点（占1．49%）,20只个体具有4种基因型,5种体色各自的平均核苷酸位点差异分别为0．38％、0．2％、0、0．13％和0．47％．UPGMA分子系统聚类树显示,“粉花”、“麻花”和“粉玉”的遗传关系接近;“全红”相对独立成一支,与其他4种体色瓯江彩鲤的遗传关系较远．COⅡ基因可以作为区分三分支群体的遗传标记．     

甜槠种群遗传多样性的简单重复序列区间初步分析

应用简单重复序列区间（ISSR）分子标记方法对甜槠种群的遗传多样性和遗传分化进行了初步研究．从100个引物中筛选出12个用于正式扩增的ISSR引物,在9个种群179个个体中共检测到202个位点,其中198个是多态位点,多态位点百分率（P）为98．02％．各种群多态位点百分率在60．40％～70．30％,平均为65．29％．甜槠物种水平的Shannon信息指数（I）为0．5322、Nei指数（h）为0．3597．各种群J平均为0．3635、h平均为0．2468．AMOVA分子差异分析表明,65．96％的变异存在于种群内,34．04％的变异存在于种群间,种群间的基因分化系数（GST）为0．3138．甜槠种群间的基因流（Nm）为1．0933．9个种群的平均遗传距离为0．1849,遗传距离与地理距离呈显著正相关．利用UPGMA法对9个种群进行聚类,结果显示浙江省内的8个种群聚成一类,庐山种群单独成一类．