泛素连接酶Nedd4调控人前列腺癌细胞的增殖与凋亡

为了研究泛素连接酶Nedd4对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,利用小RNA干扰技术,通过慢病毒包装,侵染前列腺癌细胞DU145,达到下调Nedd4表达的目的.MTT检测表明,下调Nedd4表达可以抑制DU145细胞的增殖;DAPI染色发现,下调Nedd4表达的DU145细胞对星形孢菌素诱导的细胞凋亡更加敏感.这些结果都说明,下调Nedd4的表达不仅可以抑制DU145肿瘤细胞增殖,而且可以促进细胞凋亡.     

镁离子对鼠角质细胞生长和分化的影响

利用无血清培养基培养角质细胞，研究Mg^2 对鼠角质细胞生长和分化的影响。实验结果表明，培养基中Mg^2 浓度为5．0mmol／L时，细胞贴壁率、克隆形成率明显增加，细胞分化比例和老化比例均达到最低。当Mg^2 浓度达到10．0mmol／L时，细胞增殖水平没有显著提高，角质细胞分化比例和老化比例却有一定程度的提高。培养基中加入一定浓度的Mg^2 能够刺激角质细胞的增殖，抑制角质细胞的分化，并且延缓细胞的老化。     

组织培养中TA对细胞脱分化,分化及生长的生理效应

试验表明,在枫叶海棠(Begonia heracleifia)和中华猕猴桃(Actinidia chinensis planch)的组织培养中三十烷醇(代号TA)单独使用及与其它激素配合使用时对细胞脱分化、分化及生长的生理效应如下:(1)TA单独使用时,茎段组织细胞无脱分化诱导作用,但与BA、Zt、NAA等激素配合使用时则表现出很强的协同增益效应,协同促进组织细胞的脱分化、分裂和生长。(2)TA单独使用时,对中华弥猴桃愈伤组织分化茅无诱导作用,但与ZL配合使用则具有促进茅分化和小苗生长的协同作用,还能使试管苗叶片较肥厚浓绿、健壮,对移栽成活有利。(3)TA单独使用对中华猕猴桃试管苗发根的诱导作用次于NAA,但与NAA配合使用却有显著的协同增益效应,发根时间缩短、发根的数量增多。(4)TA具有显著的促进根伸长的作用,与NAA配合使用则效果更住。     

Id3启动子/荧光素酶基因载体的构建及其在WEHI-231细胞中的活性表达

用PCR法从WEHI-231细胞基因组DNA扩增小鼠Id3(mId3)基因5’端含启动子序列的不同长度的DNA片段(mId3-pf)亚克隆至荧光素酶(Luc)报道基因载体PGV-B2,构建由mId3基因启动子片段控制的Luc报道基因重组载体mId3-pf/PGV-B2.用电穿孔术将mId3-pf/PGV-B2导入培养的WEHI-231细胞,用抗小鼠IgM抗体刺激转染后的WEHI-231细胞,24 h后测定胞内Luc活性.结果表明,4种Luc报道基因重组载体转染细胞均表现较高的mId3启动子活性,与空载体转染细胞相比,启动子活性分别升高25~60倍.抗IgM抗体刺激细胞后,Id3启动子活性较未刺激细胞均呈明显增高趋势,增高幅度可达2倍左右.表明抗IgM抗体诱导WEHI-231细胞Id3的上调表达与Id3转录活性的升高有关.     

4HPR诱导Hela细胞凋亡

目的：实验结果证明4HPR对Hela细胞具有较强的抑制作用,本文从细胞凋亡角度研究4HPR抑制Hela细胞生长的机理。方法：采用电子显微镜、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法,分析4HPR诱导Hela细胞凋亡的形态学、生化学及细胞生物学改变特征。结果：电子显微镜下：细胞固缩、核膜扭曲、核染色体聚集成块并靠近核膜;细胞DNA被降解,在1．5％琼脂糖凝胶电泳上出现典型的阶梯状图谱（DNALadder）;流式细胞仪检测出现大量亚二倍体细胞核型峰,二倍体细胞峰减少。结论：上述结果表明,4HPR可诱导Hela细胞凋亡。4HPR抑制Hela细胞生长的机理之一是诱导读细胞凋亡。     

Sema4D基因沉默对骨髓间充质干细胞成骨及成脂肪分化相关基因表达的影响

为了探讨Sema4D基因对绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞(BMMSCs)成骨及成脂肪分化能力的影响,设计3条Sema4D基因的siRNAs,分别通过显微观察和蛋白质免疫印迹(Western blot)鉴定其对BMMSCs生长形态以及对Sema4D蛋白表达的影响.进一步利用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot检测Sema4D基因沉默对成骨指标抗碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)和成脂肪分化指标脂蛋白酶(LPL)、脂肪细胞结合蛋白2(AP-2)、瘦素(Leptin)表达的影响以及对骨保护素和可溶性细胞核因子-κB受体活化因子及配基(OPG/RANKL/RANK)系统的影响.结果显示Sema4D基因沉默后,绝经后骨质疏松患者BMMSCs中ALP、BGP、CollagenⅠ的表达水平明显升高,LPL、AP-2、Leptin的表达水平也明显升高;OPG的表达水平明显升高,而RANKL和RANK的表达水平明显下降.由上述结果可知,Sema4D基因可以抑制BMMSCs成骨分化和成脂肪分化相关基因的表达,可能通过下调OPG/RANKL/RANK系统相关基因的表达来实现.     

精子发生相关基因SPATA功能的研究进展

SPATA基因是一类与精子发生相关的基因.精子发生依赖于一系列相关基因的正常表达与调控,SPATA基因在这个过程中起着一定的作用.本文通过参考大量SPATA基因相关文献,从SPATA基因在细胞增殖、细胞凋亡中的作用以及SPATA基因对多种相关疾病产生的影响和发病机理等多个方面,综述了精子发生过程中该类基因功能的研究进展,对于今后研究精子发生过程中有关特异基因的表达和细胞增殖、凋亡机理提供新思路;为研究精子发生的调控机制提供参考途径和方法;对于了解精子发生过程中产生的各种相关疾病的病因具有重要指导意义.     

顺铂对卵巢癌细胞几种生长和凋亡相关基因表达的影响

顺铂是治疗卵巢癌的一线药物,它与癌细胞内的DNA结合是产生细胞毒性的主要原因.在用基因表达谱芯片筛选顺铂处理IGROV-1细胞产生的差异表达基因基础上,选取其中与细胞生长、凋亡有关的部分重要基因,用实时定量PCR方法进行了差异表达验证.结果表明,顺铂可引起CEACAM1、KLF6、JUN、TP53INP1、MAP2K4...     

KLF4沉默与阿霉素诱导的DNA损伤协同抑制肝癌HepG2细胞的生长

探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KLF4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4沉默前后对HepG2细胞周期变化影响,应用Western blot法检测转染前后HepG2细胞中KLF4蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化.Western blot检测到高浓度的阿霉素促进KLF4的表达,并且低浓度的阿霉素可使得细胞停滞在G2/M期,高浓度的阿霉素则使部分细胞凋亡(19.31%).将KLF4沉默后,发现细胞生长变缓,低浓度的阿霉素处理后,细胞随时间增加而出现更多的细胞凋亡;高浓度的阿霉素处理后,细胞数明显减少,更多的细胞发生凋亡(28.89%),且在KLF4沉默前后均发现低浓度阿霉素促进p53与p21表达,高浓度阿霉素抑制其表达.阿霉素诱导的DNA损伤可提高KLF4的表达,KLF4依赖于DNA损伤激活的p53促进p21的表达,进而引起G1/S期细胞周期阻滞.沉默KLF4与阿霉素诱导的DNA损伤可协同抑制肝癌细胞的增殖、促进凋亡,其在肝癌细胞 HepG2中扮演十分重要的角色.     

BHIVgag—pol基因在MT—4细胞中的表达

以HIV－1 HXBc2毒株为遗传背景,通过DNA重组技术构建出嵌合有BIV R29gag-pol基因的重组病毒BHIV cDNA。BHIV cDNA经电转染导入人源细胞MT－4后,分别收集第1d到第7d的细胞和培养液上清进行检测。RT－PCR分析证实BHIV的gag基因已得到转录;反转录酶活性测定表明,BHIV中源于BIV的反转录酶已得到正确转录、翻译并加工成熟。这些结果说明重组病毒BHIV cDNA中HIV控制下的BIVgag-pol基因能够的MT－4细胞内正确表达。     

HL－60细胞分化对动粒蛋白及其基因表达的影响

以人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０为实验材料，用终浓度１μｍｏｌ·Ｌ－１甲酸（ＲＡ）和二甲亚砜（ＤＭＳＯ）分别连续处理细胞６ｄ后，可使ＨＬ－６０细胞按粒系途径定向成熟分化，即表现出核分叶，具有ＮＢＴ还原能力的正常粒细胞的形态和功能特征。利用ＡＣＡ间接免疫荧光方法，观察到在终未分化的细胞核中荧光斑点强度要明显弱于对照细胞。用ＲＮＡＮｏｒｔｈｅｒｎ和斑点杂交方法研究发现，在ＨＬ－６０细胞诱导分化过程中，Ｉｄ，ＣｙｃｌｉｎＢ１基因表达很快受到明显抑制，在终末分化的细胞中已基本被关闭；ＣＥＮＰ－Ｂ基因表达水平也明显降低，但表达变化过程与Ｉｄ和ＣｙｃｌｉｎＢ１基因有所差异。     

人生长激素基因在昆虫细胞中表达的初步研究

将人生长激素hGH的cDNA片段克隆在转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游,构成重组转移载体pVL1393hGH,将该质粒DNA与昆虫杆状病毒（AcNPV）DNA共转染秋粘虫（Spodopterafrugiperda）细胞Sf9,通过体内同源重组,hGH基因取代多角体蛋白基因,从而整合到病毒基因组上,经感染昆虫细胞后表达外源hGH基因,通过反复病毒空斑纯化,获不含多角体的重组病毒,利用免疫化学发光法测定hGH表达量达40μg／mL．     

β－半乳糖苷酶基因在HeLa细胞中瞬时表达的动态研究

本文研究了由ＳＶ４０早期启动子和增强子启动的β－半乳糖苷酶基因在ＨｅＬａ细胞瞬时表达的动态情况．外源β－半乳糖苷酶基因经磷酸钙方法导入受体细胞５０ｈ后其酶活性为６０ｍｉｌｌｉｕｎｉｔｓ，该酶活性维持一段时间后呈下降趋势，经转染２７０ｈ后，该酶活性降为０．此外本文结果还表明，携带有β－半乳糖苷酶基因的质粒对受体细胞ＨｅＬａ具有较高的转染效率．     

动物激素对基因长期作用的影响

综述了动物激素对机体细胞基因表达及蛋白质代谢的影响,阐述目前研究水平上的分子调节机制,以期寻找出未来研究的位点。     

人粒细胞集落刺激因子在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿尺核型多角 体病带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标志的非融合蛋白基因转移载体ｐＢＢ成功地构了重组杆状病毒ＡｃＮＰＶ－Ｇ－ＣＳＦ．在感染重组病毒的草地夜蛾细胞中ｈＧ－ＣＳＦ得到了高效表达。表达产物由ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检出，其分子量约为１９ＫＤａ。     

紫龙金对BGC-823细胞增殖的抑制作用及对p16~(INK4a)启动子活性的影响

利用记数法和Brdu脉冲标记法研究了紫龙金对细胞增殖的影响,western blot检测结果表明:紫龙金(3,4mg.mL-1)处理可明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长、提高BGC-823细胞中p16的表达水平.进一步利用含有p16INK4a启动子片段(-967~-165区域)及荧光素酶报告系统的载体pGL3-Basic-p16N研究了紫龙金对p16INK4a启动子活性的影响及其作用的分子机制,结果表明,紫龙金可能通过提高p16INK4a启动子活性而促进p16的表达,从而抑制细胞的增殖.     

用电穿孔法将外源基因高效导入水稻胚盾片细胞

利用电穿孔法将外源基因导入未经前处理的水稻成熟胚盾惩细胞，质粒为ｐＡＣＴ１－Ｆ，其上带有受水稻肌动蛋白基因ａｃｔｉｎ１启动控制的ＧＵＳ（ｕｉｄＡ）报告基因，电穿孔实验的条件为１００μｇＤＮＡ／ｍｌ缓冲液，３１０Ｖ／ｃｍ场强及９００μＦ电容，通过ＧＵＳ基因瞬时表达实验室证明只需一次脉冲处理便可在一个胚上获得几十个数百个转化细胞，并且发现盾片细胞较胚上其它部位的细胞更易于转化。