胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究

分别以胡萝卜子叶、下胚轴和直根形成层为外植体诱导出愈伤组织,并建立细胞悬浮系.实验结果表明:胡萝卜下胚轴是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体;诱导松散型愈伤组织的最佳激素浓度配比是1.0mg/L2,4 D+0.5mg/LKT;细胞悬浮培养细胞最佳起始密度为1.125×104个/mL～2.325×104个/50mL时,7d～9d为对数生长期;继代培养4代～5代时,可得到稳定的悬浮细胞系.     

西红花愈伤组织的诱导与花柱愈伤组织的继代、悬浮培养

以西红花的球茎,叶片和花柱为外植体诱导愈伤组织,叶片诱导培养形成白色膨大组织,球茎培养得到松散型白色愈伤组织,诱导球茎愈伤的培养基为5mg/L 6-BA 8mg/L NAA,在球茎愈伤组织中的紫外部分没有检测到西红花甙,西红花醛和西红花苦甙,在花柱愈伤组织中检测到西红花醛,适合于继代和悬浮培养,经悬浮培养后,在培养液中可检测到西红花醛和西红花苦甙,悬浮培养有利于次和一代谢的积。     

根皮苷和GA3对南方红豆杉愈伤组织和细胞悬浮培养物生长的影响

在B5Ⅲ即B5＋2,4－D 3mg/L＋KT0．1mg/L phe0.1mol/L的培养基上附加0．5mg/L的根皮苷可以促进南方红豆杉愈伤组织的生长,在B5Ⅲ＋GA3（2．2－3．2mg/L),B5Ⅲ 根皮苷0．5mg/L最佳,对于附加不同浓度的GA3的培养基而言,最适应度为2．6mg/L。     

雷公藤愈伤细胞悬浮培养生产雷公藤甲素的研究

对雷公藤叶愈伤组织进行悬浮培养,研究不同营养条件对雷公藤愈伤细胞生长及其雷公藤甲素质量分数的影响.结果表明：悬浮细胞在White培养基上增殖最快,而在MS培养基上生长最慢;White和MS培养基中悬浮细胞在第6天时雷公藤甲素质量分数最高,分别为7.14 mg/g和4.77 mg/g,而N6培养基中雷公藤甲素最大产量为6...     

红三叶和白三叶愈伤组织的诱导和胚性细胞悬浮系的建立

以红三叶（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｐｒａｔｅｎｓｅ）野生品种巴东红三叶的叶片为外植体,在ＭＢ－１至ＭＢ－９的固体培养基上诱导愈伤组织,筛选出最佳培养基是ＭＢ－９培养基．以白三叶（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｒｅｐｅｎｓｅ）裁培品种“路易斯安娜”和“Ｈｕｃａ”的叶片为外植体,接种在ＭＢ－９固体培养基上诱导愈伤组织．愈伤组织形成以后,均在ＭＢ－９固体培养上继代培养３～４次后,获得胚性愈伤组织,然后转至ＭＢ＋３ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０７ｍｇ／ＬＢＡ＋０２ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２ｍｇ／Ｌ甘氨酸＋５００ｍｇ／ＬＣＨ＋３％蔗糖的液体培养基中,经强化培养,２个月后,获得胚性细胞悬浮系．实验结果表明,缩短换液时间,即每隔３～４ｄ换一次,可加快胚性细胞悬浮系的建立．     

枸杞花药愈伤组织细胞悬浮培养与植株再生

采用枸杞花药进行离体培养,建立细胞系,诱导植株再生,结果在含不同激素的４种培养基上都诱导出愈伤组织,诱导率在１．７％￣１６．９％,愈伤组织在ＭＳ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ的固体培养基上获得大量单细胞,在液体培养基中获得含有大量胚状体的愈伤组织块,收集悬浮培养物转移到ＭＳ＋６ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ的固体培养基上,胚状体能够萌发形成大量绿色小芽,转入生根培养基（ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ）中,２０ｄ后得到     

巴东红三叶愈伤组织的诱导和胚性细胞悬浮系的建立

以红三叶（Trifoliumpratense）野生品种巴东红三叶的叶片为外植体，在MB－1至MB－9的固体培养基上诱导愈伤组织，筛选出最佳培养基是MB－9培养基．愈伤组织形成以后，均经MB－9固体培养基上继代培养3～4次后，获得胚性愈伤组织，然后转至MB＋3mg／1.2，4－D＋0．7mg／LBA＋0．2mg／LNAA＋2mg／L甘氨酸十500mg／LCH＋3％蔗糖的液体培养基中，经强化培养两个月后，获得胚性细胞悬浮系．实验结果表明，缩短换液时间，即每隔3～4d换液一次，可加快胚性细胞悬浮系的建立．     

红豆杉植物愈伤组织的培养及其紫杉醇形成的初探

不同品种的红豆杉外植体及同一品种的不同外植体，其愈伤组织的发生率、发生速度、发生状况有所不同，激素种类及浓度对愈伤组织的诱导及生长有较大影响，适量的水解酪蛋白和抗坏血酸能促进愈伤组织生长，继代培养以２５～３０天为一代较好，接种量以０．７５～１．２５ｍ／５０ｍｌ培养基为宜，薄层层析结果表明，云南红豆杉细胞培养物中存在着紫杉醇（Ｔａｘｏｌ）。     

杜仲细胞的悬浮培养

杜仲外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上可诱导出生长速度快、离散性好、适合于悬浮培养的愈伤组织；愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的液体培养基上进行振荡培养，经３～４次继代，即可建立起悬浮细胞系；悬浮细胞的形状为长形、椭圆形、圆形和“月牙”形。     

烟草悬浮培养细胞的建立及其对机械刺激的敏感性研究

文章以幼嫩烟草茎髓为实验材料进行愈伤组织的诱导,确定了建立烟草悬浮培养细胞初期愈伤组织和液体培养基的最佳配比,以及烟草悬浮培养细胞的最佳继代量和继代时间,并以此为材料研究了烟草悬浮培养细胞对机械刺激的敏感性。     

胀果甘草愈伤组织生长和多糖合成的调控

为了研究培养基基本成分、碳源以及离子浓度对甘草愈伤组织生长和多糖合成的影响,以MS,6,7-V为基本培养基,改变碳源、PO43-及Ca2+浓度,分析胀果甘草愈伤组织生长及多糖产量.结果表明:MS培养基附加蔗糖最利于甘草愈伤组织生长,6,7-V培养基虽利于甘草多糖的合成但不利于愈伤组织生长从而影响多糖产量.当培养基中PO43-浓度为1.25mmol/L、Ca2+浓度为2.99mmol/L时,甘草愈伤组织生长量积累最高,同时对多糖的生物合成也最为有利.高浓度的PO43-和Ca2+有利于甘草多糖的合成,但不利于愈伤组织的生长.研究结果为利用生物工程手段进行甘草多糖的产业化生产提供参考数据.     

PSK对杂交鹅掌楸悬浮培养细胞生长的影响

以杂交鹅掌楸悬浮培养胚性细胞为材料,在培养过程中添加不同浓度的新型植物肽类生长调节物质植物磺肽素(PSK),研究PSK对悬浮细胞生理的影响,分析其在细胞培养中的作用。结果表明:PSK能够促进细胞分裂和增殖,0.8 mg/L的PSK处理后能够使杂交鹅掌楸胚性愈伤组织细胞结构致密、胚性细胞小、直径一致性增加、细胞质变浓,细胞内大量积累淀粉等,同时PSK显著提高了细胞的活力,促进了培养细胞低密度的增殖,并且能够促进蛋白质的积累,有利于杂交鹅掌楸体细胞胚胎的发生。     

碳源和氮源对鸡冠花愈伤组织生长及花色素苷积累的影响

研究不同碳源和氮源对鸡冠花愈伤组织生长及花色素苷积累的影响.试验实验结果表明,在7种所试验碳源中,以蔗糖效果最好,30～40 g·L-1的浓度对愈伤组织生长和花色素苷的积累较为有利.浓度高至90 g·L-1时花色素苷的含量最高,但不利于愈伤组织的生长.培养基中的总含氮量以30 m mol·L-1为宜,浓度大时促进花色素苷的积累,但对愈伤组织的生长不利.以NH 4作唯一氮源时,会对愈伤组织的生长起抑制作用.     

齿瓣延胡索细胞悬浮系的建立和延胡索乙素的形成

就各种因素对齿瓣延胡索悬浮细胞生长和延胡索乙素形成的影响做进一步的研究。结果表明：随着接种量的提高，细胞生长加速，培养液浊度增大，齿瓣延胡索细胞悬浮液培养中最适接种量为2g/30ml;pH5.6最有利于细胞生物量的积累；2，4—D与2种细胞分裂素的组合，对于生长量积累和THP含量的作用最显著；在培养基中添加甘露糖和半乳糖，对于提高培养物THP含量是有效的；G1y Phe Lys的作用效果最显著，细胞鲜质量、干质量和THP含量均最高。     

西洋参悬浮细胞系的建立及其生长特性的研究

通过对西洋参根外植体愈伤组织诱导和培养,筛选出了质地疏松、生长快的愈伤组织无性系;将该愈伤组织接种在液体培养基中进行振荡培养,经多次传代、筛选获得了分散程度好的高产西洋参悬浮细胞系12-1。在此基础上,建立并优化了西洋参悬浮细胞培养工艺体系:温度(24±1)℃,pH值6.0,生长周期是25d,培养4d后再换液继代一次,培养20d后补料。细胞悬浮培养结束后,细胞的生长量及人参皂甙含量分别达到23.65g/L和677.25mg/L。     

硫化氢对白桦悬浮细胞中多胺和次生代谢物积累的影响

【目的】分析硫化氢(H₂S)对白桦悬浮细胞中多胺含量和次生代谢物积累的影响。【方法】将不同浓度的H₂S供体硫氢化钠(NaHS)添加到白桦悬浮培养体系中,采用高效液相色谱法和比色法分析不同形态的多胺含量、多胺合成酶和分解酶活性以及黄酮、多酚和三萜等次生代谢物含量。【结果】 NaHS处理后白桦悬浮细胞中总多胺含量呈先增加后降低趋势,其中1 mmol/L NaHS处理24 h时腐胺和亚精胺总含量达最高值,分别比对照增加了30.51%和12.37%; 除高氯酸不溶性结合态亚精胺外,NaHS处理后白桦悬浮细胞中游离态、高氯酸可溶性结合态和不溶性结合态腐胺和亚精胺含量均有不同程度的增加; 同样,NaHS处理后多胺合成酶(ADC)和多胺分解酶(PAO)活性基本呈增加趋势,增加幅度分别为15.91%～26.33%和137.50%～250.12%; 1 mmol/L NaHS与不同浓度的腐胺、亚精胺和精胺分别处理悬浮细胞,不同程度地提高了白桦悬浮细胞中多酚、黄酮和三萜含量。其中,5 mmol/L 腐胺与NaHS共同处理后白桦悬浮细胞中多酚、黄酮和三萜含量达最大值,分别比NaHS单独处理增加了26.69%、13.22%和 4.55%。【结论】H₂S处理提高了白桦悬浮细胞中多胺和次生代谢物含量,H₂S与多胺共同处理可进一步促进次生代谢物的累积。     

基于区域信息的悬浮细胞识别与计数

悬浮细胞的培养过程需要对活细胞计数.针对人工计数方法存在的缺陷,利用图像分析技术对拍摄的细胞图片进行处理,实现活细胞自动识别及计数.要实现细胞识别,首先要对图像进行正确分割.对于前景和背景对比度较小且细胞很稀疏的图像,采用背景拟合设定阈值进行分割;针对前景和背景对比度较大的图像,采用一种基于局部区域直方图的方法进行分割.对分割后的图像进行链码跟踪并测量细胞参数,最终实现细胞识别及计数.实验结果表明上述方法能快速有效地计算出活细胞个数.     

金荞麦愈伤组织诱导及其总黄酮含量测定方法的建立

金荞麦是蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum Mill.)一种营养丰富并具有重要药用价值的多年生草本植物, 其块根活性提取物(其成分同悬浮培养的次生代谢产物即黄酮类化合物)是多种重要的抗癌药物和癌预防药物的主要成分之一. 利用金荞麦腋芽的叶片和茎段进行愈伤组织的诱导, 筛选出最适合愈伤组织生长的培养基为1/2MS+6-BA 2.0mg/L +NAA 0.3mg/L(或IBA 0.3mg/L)+2,4-D 0.1mg/L. 并在借鉴其他物种利用分光光度法测定总黄酮含量的基础上,对金荞麦愈伤组织的显色时间等条件进行了优化, 得到了一种适合金荞麦愈伤组织总黄酮含量测定的方法. 该方法简单易行, 为悬浮培养和其工厂化生产黄酮类化合物时总黄酮含量的测定奠定了基础.     

Isolation, characterization and functional analysis of a cdc48 homologue from tobacco BY-2 cells

The fission yeast Schizosaccharomyces pombe was used to identify genes from tobacco BY-2 cells that may play roles in cell cycle regulation. A cDNA encoding a protein homologous to the yeast CDC48 was isolated and the gene was designated as NtCDC48 . The cDNA contains an open reading frame coding for a predicted protein of 808 amino acids which comprises of two typical ATPase modules (aa 245-374 and aa 518-646) . Overexpression of NtCDC48 in tobacco BY-2 cells led to an increase in the mitotic index as well as to the formation of diffused mitotic spindles. NtCDC48-GFP fusion proteins are distributed ubiquitously through Gl to M phases, yet their subcellular localization varied regularly along with the cell cycle progression. These results indicate that NtCDC48 may play an important role in the regulation of cell cycle in BY-2 cells.